双突变环广泛应用于蛋白质工程领域，用于测量分子间和分子内的相互作用。理想情况下，在周期内产生两个单突变和双突变时，蛋白质应该没有结构重排。然而，只要单个突变体的变化总和等于双突变体的改变，突变的结构插管并不排除使用这种方法。这样，与任何结构重排相关的能量在双突变循环中抵消。此前，通过双突变循环分析确定了谷胱甘肽酶中Arg69和Asp93之间的埋藏盐桥对折叠蛋白稳定性的贡献。为了确定-14.0 kJ mol的测量相互作用-1个代表真实的相互作用能量，求解了双突变体循环中每个突变体的晶体结构。虽然突变会导致结构转移，但单突变体中的大多数突变也存在于双突变体中；因此，它们在双突变周期中的能量效应被抵消。这项研究强调了双突变周期分析的稳健性。
