LncRNA MALAT1通过Wnt/β-catenin信号通路调节ox-LDL诱导的EndMT

摘要

背景

内皮-间充质转化（EndMT）在动脉粥样硬化中起着重要作用，但lncRNA的调控机制仍有待阐明。在这里，我们分类确定转移相关的肺腺癌转录物1（MALAT1）在ox-LDL诱导的EndMT中的作用。

方法

通过喂食ApoE建立动脉粥样硬化模型^−/−用RT-qPCR检测高脂饮食小鼠和小鼠动脉组织中lncRNA MALAT1的水平。用ox-LDL处理人脐静脉内皮细胞（HUVECs）建立细胞模型，检测CD31、vWF、α-SMA、Vimentin和lncRNA MALAT1等EndMT标记物水平，并分析其相关性。MALAT1在EndMT中的作用及其对Wnt/β-catenin信号通路的依赖性可通过敲除或过度表达MALAT1进一步检测。

结果

在喂食高脂肪食物时，MALAT1上调载脂蛋白E^−/−老鼠。经ox-LDL处理的HUVEC显示CD31和vWF表达显著降低，α-SMA和波形蛋白表达显著增加，MALAT1上调。增加的MALAT1水平促进了ox-LDL诱导的β-catenin核移位。抑制MALAT1表达可逆转β-catenin和EndMT的核移位。此外，MALAT1的过度表达增强了ox-LDL对HUVEC EndMT和Wnt/β-catenin信号激活的影响。

结论

我们的研究表明，病理性EndMT需要激活MALAT1依赖的Wnt/β-catenin信号通路，这可能对动脉粥样硬化的发生很重要。

试注册

不适用。

背景

动脉粥样硬化是一种由多种危险因素引起的多步骤心血管疾病，是世界上最常见的死亡原因之一[1]. 迄今为止，动脉粥样硬化发生和发展的病理机制尚未被揭示。内皮-间充质转化（EndMT），一种特殊类型的上皮-间充质体（EMT）[2]是内皮细胞转化为间充质细胞或肌纤维母细胞的复杂生物过程。EndMT的特征是特定内皮标记物的丢失和间充质标记物的获得。最近的研究表明，EndMT可能与动脉粥样硬化的进展密切相关[3,4]. 例如，EndMT-derived细胞在小鼠动脉粥样硬化病变中很常见[3]. 在人类斑块中也检测到共表达内皮和成纤维细胞/间充质蛋白的“过渡”细胞[5]. 此外，EndMT增强斑块钙化，增加斑块负担[6]EndMT的程度与临床事件中的斑块不稳定性有关[5]. 更重要的是，导致动脉粥样硬化病变形成的典型危险因素，如细胞因子[7]，活性氧（ROS）[8]和高糖[9]也会触发EndMT。氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）激活内皮细胞ox-LDL-受体，是动脉粥样硬化的危险因素之一[10]上调刺激因子，如炎性细胞因子[11]、ROS[12]和TGF-β[13]，可进一步诱发EndMT。然而，对EndMT针对ox-LDL的精确调节器仍知之甚少。

转移相关肺腺癌转录物1（MALAT1），也称为NEAT2（非编码核富集丰富转录物2），于2003年首次在非小细胞肺癌中发现[14,15]是最初确定的与人类疾病相关的长非编码RNA之一。MALAT1在哺乳动物中进化保守，在许多组织中大量表达[15,16]. 成熟的MALAT1定位于细胞核中，带有细胞质tRNA样的小RNA，称为massRNA[17]. 当RNA聚合酶II依赖性转录被激活时，MALAT1在哺乳动物细胞中富含参与前mRNA剪接和RNA转运的核斑点动力学和不规则形状的核结构域[18]. MALAT1与动脉粥样硬化相关的多种细胞的功能调节有关，如血管内皮细胞[19,20,21]，平滑肌细胞[22]和巨噬细胞[23]. 据报道，ox-LDL可通过NF-κB途径诱导THP-1衍生巨噬细胞中MALAT1的转录[24]，并且MALAT1可以调节TGF-β1诱导的内皮祖细胞中的EndMT[25].

Wnt/β-catenin通路是典型的Wnt信号通路，据报道参与动脉粥样硬化的发展和进展的多个方面[26]包括内皮功能障碍[27]，巨噬细胞激活[28,29]血管平滑肌细胞的增殖和迁移[30]. 另一方面，据报道Wnt/β-catenin信号通路在调节EndMT中起关键作用[31]. 当Wnt信号通路被激活时，β-catenin的磷酸化被抑制，游离的β-catentin积累并转移到细胞核中以调节末端MT调节基因的表达，如Twist、Snail和Slug[32,33,34]. Wnt/β-catenin信号通路参与成人瓣膜内皮细胞EndMT[35]和人肾小球内皮细胞系[36]. 研究还表明，MALAT1可以促进骨肉瘤中β-catenin的表达和核蓄积[37]，食管鳞癌[38]和肾细胞癌[39].

在本研究中，我们试图阐明MALAT1是否通过Wnt/β-catenin信号通路参与ox-LDL诱导的EndMT的调节。我们发现，在患有高脂肪食物诱导动脉粥样硬化的ApoE−/−小鼠和用ox-LDL刺激的人脐静脉内皮细胞系（HUVECs）的动脉组织中，MALAT1失调。MALAT1的过度表达对HUVEC末端MT和β-catenin核转位的影响与ox-LDL相似。MALAT1基因敲除通过部分逆转ox-LDL引发的β-catenin核积累挽救了HUVEC的EndMT。总的来说，这些数据强调了MALAT1在动脉粥样硬化的发展和进展中的重要性。

材料和方法

动物

雄性C57BL/6小鼠（8周龄）和ApoE−/−（B6/JNju-Apoeem1Cd82/Nju）小鼠取自南京大学南京生物医学研究所（中国南京）。C57BL/6小鼠采用标准饲料喂养，作为对照组。ApoE−/−小鼠喂食含21%脂肪、1.25%胆固醇的高脂肪饮食（HFD）16 周，作为动脉粥样硬化模型组。所有动物都被保存在室温恒定的房间里（25 °C）和12 h光-暗循环（8:00开始亮起 上午至8:00 PM）。动物实验按照河北医科大学动物伦理委员会的要求进行。

样品采集

16只小鼠的胸主动脉 HFD周（24 周龄）。人道安乐死后，胸腔被插入，心脏迅速暴露。使用20号针头和1x PBS（20 4毫升） 温度为2.5°C时注入 ml/min。对于H&E染色，然后通过向心脏灌注20 PBS中4%多聚甲醛ml。然后分离胸主动脉并将其置于4%多聚醛中24 h.对于实时定量PCR，采集胸主动脉并保存在液氮中。16天后，在麻醉下摘除眼球，从小鼠身上采集血液 HFD周（24 周龄）。通过离心15次从血液中分离血清 3000时最小值 转速为4转/分时 °C，储存温度为− 80 °C，直到进行每次测定。

血脂水平

采用日立7080全自动生化分析仪（日本东京）测定血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）水平。

苏木精和伊红（H&E）染色

在梯度脱水和透明后，用石蜡包埋胸主动脉，然后在4 μm厚度。然后，用苏木精和曙红染色试剂盒（H&E）（Beyotime，Shanghai，China）对切片进行染色，然后用Leica DM6000B全自动生物显微镜（Wetzlar，Germany）拍照。

细胞培养和治疗

HUVEC来自中国科学院细胞库（中国上海），在含有10%FBS的Dulbecco改良Eagle培养基（Gibco BRL，Gaithersburg，MD，USA）中培养，2 mM谷氨酰胺和1%青霉素，在37℃，5%CO2的增湿大气中 摄氏度。用不同浓度（10，20，40）的ox-LDL（中国北京联合生物）处理HUVEC μg/ml），适用于48 小时。

质粒构建与细胞转染

对于MALAT1的过度表达，上海集成生物技术解决方案（中国上海）构建了一个包含全长人类MALAT1（pcDNA-MALAT1）的pcDNA3.1表达载体。对于MALAT1敲除，三个MALAT1-靶向siRNAs（MALAT1-siRNA1，5′-GGGGUGGUG UAUUAATTUUAUCUAAA UACCACCTT-3′；MALAT1-siRNA2，5′-GCGUCAUUAAAGCCUAGUTTA CUAGGCUUAAAUGAGCTT3′；MALAT1-siRNA3，5′-GGGGGCUGAUAAC UACAATTUGUAUAGUCTCTT-3′）在GenePharma（中国上海）设计并合成了一个加扰siRNA（sense 5′-UUCUCCGAACGUGUCACGUTT-3′，antisense 5′-ACGUGCACGUAGAA TT-3′）（加扰）。使用Lipofectamine™3000转染试剂（美国赛默飞世尔公司）。实时定量PCR用于验证MALAT1敲除和过度表达的效率。为了敲除MALAT1，HUVEC被转染MALAT1siRNA或阴性对照siRNA 24 用ox-LDL治疗前h（40 μg/ml），适用于48 h.对于MALAT1的过度表达，用MALAT1-pcDNA或MALAT1-表达载体转染HUVEC 48 小时。

细胞形态分析

为了观察细胞形态，细胞F-actin用罗丹明-阴茎肽染色（Thermo Fisher，美国），细胞核用DAPI Fluoromount-G®染色（Southern Biotech，伯明翰，美国）。然后使用共焦激光扫描显微镜对细胞进行成像（蔡司，德国奥伯科钦）。

实时定量PCR

使用Eastep®Super Total RNA Extraction Kit（中国北京普罗莫加）从新鲜冷冻胸主动脉或指定时间收集的细胞中提取总RNA。cDNA是使用PrimeScript™RT试剂盒和gDNA橡皮擦（日本京都Takara Clontech）制备的。使用TB Green™Premix Ex Taq™（日本京都Takara Clontech）在应用的生物系统7300实时PCR系统（美国加利福尼亚州Bio-rad）上进行三次实时定量PCR。引物购自Sangon Biotech CO.，Ltd.（中国上海）。序列如表所示1β-actin作为内部对照。使用2计算每个基因的相对表达^-ΔΔCt方法[40].

表1引物序列

蛋白质印迹

用添加蛋白酶抑制剂鸡尾酒（德国默克公司）和PMSF的冰镇裂解缓冲液从细胞中提取总蛋白。核蛋白用核蛋白和细胞质蛋白提取试剂盒（中国上海贝尤蒂姆）提取。使用洗涤剂兼容Bradford蛋白质测定试剂盒（Beyotime，中国上海）测定蛋白质浓度。蛋白质在SDS-PAGE凝胶上分离并转移到硝化纤维素膜上（美国生命技术公司）。用Odyssey®封闭缓冲液（PBS）（美国林肯市LI-COR）封闭后，用CD31（ab28364，1:500）、vWF（ab6994，1:500。之后，IRDye 800CW山羊抗兔IgG（H + 五十） 二级抗体（926–32211，1:10000），IRDye®680LT山羊抗兔IgG（H + L） 添加第二抗体（926–68021）（LI-COR，Lincoln，USA）并孵育1 室温下h。然后由Odyssey（LI-COR，Lincoln，USA）扫描带强度，并将其归一化为GAPDH或Histone H3。

免疫荧光分析

在ox-LDL处理或转染后，对HUVEC进行免疫染色。用4%聚甲醛固定细胞10 室温下最小值，10 4时最小值 °C和甲醇5 分钟，然后用1%BSA阻止1 室温下培养h，与CD31（ab28364，1:20）、vWF（ab6994，1:400）、α-SMA（ab32575，1:500）、波形蛋白（ab92547，1:300）和β-catenin（ab3257，1:250）（英国剑桥Abcam）的一级抗体孵育过夜，4 摄氏度。清洗后，添加山羊抗狂犬病IgG H&L（DyLight®488）（ab96899，1:200）并孵育1 h，然后用DAPI Fluoromount-G®（Southern Biotech，Birmingham，USA）进行细胞核染色。然后使用共焦激光扫描显微镜对细胞进行成像（蔡司，德国奥伯科钦）。

统计分析

所有图形都是使用Graphpad Prism软件创建的。使用SPSS 19.0版软件（SPSS lnc）对所有数据进行分析，并以平均值表示 ± SD（标准偏差）。使用双尾Student t检验评估两组之间的差异。采用单因素方差分析对多组结果进行比较。采用皮尔逊秩相关检验进行变量间的相关分析。P（P） < 0.05被认为具有统计学意义。

结果

MALAT1在动脉粥样硬化小鼠模型中上调

测定16周HFD饮食后小鼠血清TC、TG和LDL-C水平。如图所示。1a、 与对照组小鼠相比，血清TC、TG和LDL-C水平显著升高。主动脉组织用H&E染色。在模型组的主动脉切片中可以清楚地观察到动脉粥样硬化斑块，而对照组没有（图。1b） ●●●●。接下来，我们检测了动脉粥样硬化诱导后主动脉中MALAT1的表达。我们发现，与对照组相比，模型组主动脉中MALAT1水平显著上调（图。1c） ●●●●。这些结果表明，随着血脂异常，动脉粥样硬化小鼠动脉组织中的lncRNA MALAT1水平升高。

图1

小鼠血脂、组织学和MALAT1的变化. 阿波（ApoE）^−/−用HFD喂养小鼠16次 周，以正常喂养的C57B/6小鼠为对照。一采用全自动生化分析仪检测两组患者的血脂水平(n个 = 9, **P（P） < 0.01，与对照组相比）。b条血管壁H&E染色。放大倍数，200倍。c（c）qRT-PCR测定主动脉组织中MALAT1的水平(n个 = 3, **P（P） < 0.01，与对照组相比）

在ox-LDL诱导的HUVEC末端MT期间，MALAT1上调

接下来，我们研究了MALAT1在HUVECs中的表达和作用。用不同浓度（10、20、40）的ox-LDL处理HUVEC μg/ml），适用于48 h.培养后，随着ox-LDL的增加，HUVEC经历了EndMT转变，其形态变化为纺锤形（图。2a） 内皮标志物CD31和vWF的表达降低，间充质标志物α-SMA和波形蛋白的表达增强（图。2b–d）。然后通过qRT-PCR在这些HUVEC中检测到MALAT1，并且随着ox-LDL浓度的增加，其在ox-LDL-处理细胞中的表达显著增加（图。2e） ●●●●。如图所示。2f、 α-SMA mRNA与MALAT1或波形蛋白mRNA与MALAT1呈显著正相关（双侧皮尔逊相关，rα-SMA = 0.936，瑞文汀 = 0.915,P（P） < 0.001），CD31 mRNA和MALAT1或vWF mRNA和MALAT1之间呈显著负相关（双侧皮尔逊相关，rCD31 = − 0.894，rvWF = − 0.913,P（P） < 0.001). 这些结果表明，MALAT1可能有助于ox-LDL诱导的HUVEC末端MT，40 以下研究中使用了μg/ml ox-LDL。

图2

HUVEC细胞形态、EndMT标记物和MALAT1的变化。用不同浓度（10、20、40）的ox-LDL处理HUVEC μg/ml），适用于48 小时。一细胞F-actin用罗丹明-阴茎倍体素染色。细胞核用DAPI Fluoromount-G®染色。在荧光显微镜下观察细胞。放大400倍。b-d（英国）用qRT-PCR（B）、Western blot（C）（n = 3, *P（P） < 0.05, **P（P） < 0.01，与对照组相比）和免疫荧光分析（D）。放大400倍。e（电子）通过qRT-PCR检测MALAT1的表达（n = 3, *P（P） < 0.05, **P（P） < 0.01与对照组）。ox-LDL组中α-SMA、vimentin、CD31、vWF和MALAT1的相对水平分别与对照组正常化。（f）MALAT1与α-SMA mRNA、波形蛋白mRNA、CD31 mRNA、vWF mRNA的Pearson相关性

MALAT1基因敲除减弱HUVEC中ox-LDL诱导的EndMT

为了确定MALAT1的沉默是否可以消除ox-LDL诱导的HUVEC的EndMT，使用三种MALAT1-siRNAs（MALAT1-siRNA1、MALAT1-4iRNA2、MALAT1-siRNA3）敲除MALAT1。MALAT1-siRNA3的敲除效率是最佳的，因此MALAT1-SiRNA 3被用于进一步的实验（图。3a） ●●●●。ox-LDL处理后，转染MALAT1-siRNA3的细胞显示鹅卵石样内皮外观，而转染Scramb对照的细胞保持纺锤样间充质表型（图。3b） ●●●●。接下来，通过qRT-PCR、蛋白质印迹和免疫荧光染色检测EndMT的标志物。经ox-LDL处理后，与转染打乱细胞或未转染细胞的细胞相比，转染MALAT1-siRNA的细胞显示间充质标记物α-SMA和波形蛋白的mRNA和蛋白水平显著降低，内皮标记物CD31和vWF的水平增加（图。3c-e）。这些数据表明，MALAT1的敲低可减弱HUVEC中ox-LDL诱导的EndMT。

图3

敲除MALAT1可减弱HUVEC中ox-LDL诱导的EndMT。一HUVEC转染MALAT1-siRNA1、MALAT1-siRNA2、MALAT1-siRNA3或干扰控制（scr）24小时 h.通过qRT-PCR（n）测定MALAT1水平 = 3, *P（P） < 0.05，与阴性对照组相比）。b条MALAT1 siRNA对ox-LDL诱导的细胞形态的影响（40 μg/ml）。放大400倍。c-e公司用qRT-PCR检测MALAT1-siRNA3对内皮标记物（CD31，vWF）和间充质标记物（α-SMA，vimentin）表达的影响(c（c）)，Western印迹(d日) (n个 = 3, *P（P） < 0.05, **P（P） < 0.01与对照组，^#P（P） < 0.05,^##P（P） < 0.01与ox-LDL组）和免疫荧光分析(e（电子）). 放大400倍

MALAT1过度表达促进HUVEC中EndMT的表达

为了进一步确定MALAT1对HUVEC EndMT的影响，MALAT1在HUVECs中过度表达。应用qRT-PCR分析检测MALAT1的水平，结果表明，与对照组相比，转染pcDNA-MALAT1的HUVECs中MALAT1的表达增加到2.4倍（图。4a） ●●●●。与对照细胞相比，经ox-LDL处理后，MALAT1过度表达的细胞显示出更多具有纺锤状间充质表型的细胞（图。4b） ●●●●。通过qRT-PCR分析EndMT生物标记物CD31、vWF、α-SMA和波形蛋白，Western blot和免疫荧光染色显示，与转染pcDNA载体的细胞相比，pcDNA-MALAT1转染显著降低了内皮标记物CD31和vWF的mRNA和蛋白水平，并显著增加了间充质标记物α-SMA和波形蛋白的水平（图。4c-e）。这些结果表明，MALAT1在ox-LDL诱导的HUVEC末端MT过程中起重要作用。

图4

MALAT1过度表达对HUVEC末端MT的影响。构建全长人MALAT1 cDNA质粒（pcDNA-MALAT1）并转染HUVEC。空载体用作阴性对照。一通过qRT-PCR检测MALAT1的表达（n = 3, *P（P） < 与pcDNA载体组相比为0.05）。b条MALAT1过度表达对ox-LDL（40 μg/ml）。放大400倍。c-e公司通过qRT-PCR检测MALAT1过表达对内皮标志物（CD31，vWF）和间充质标志物（α-SMA，波形蛋白）表达的影响(c（c）)，Western印迹(d日) (n个 = 3, *P（P） < 0.05, **P（P） < 0.01与pcDNA载体组）和免疫荧光分析(e（电子）). 放大400倍

敲除MALAT1抑制ox-LDL诱导的Wnt/β-catenin通路激活

Ox-LDL可以上调细胞核中β-catenin的表达，这是Wnt/β-catentin途径激活的标志[41]. 因此，敲低MALAT1以研究MALAT1在ox-LDL诱导的HUVECs中Wnt/β-catenin激活中的作用。western blot检测β-catenin的表达和位置（图。5a） 和免疫荧光分析（图。5b） ●●●●。MALAT1基因敲除逆转了ox-LDL诱导的β-catenin表达增加和细胞核移位，表明MALAT1基因敲减抑制了ox-LDLL诱导的HUVEC中Wnt/β-catentin信号的激活。

图5

MALAT1基因敲除抑制ox-LDL诱导的β-catenin易位。用MALAT1-siRNA或干扰控制（scr）转染HUVEC 24小时 小时。一β-catenin在细胞核中的蛋白表达 = 3, *P（P） < 0.05，与对照组相比，^#P（P） < 与模型组比较，0.05）。b条免疫荧光分析检测β-catenin的位置。放大400倍

MALAT1的过度表达通过ox-LDL促进Wnt/β-catenin途径的激活

为了进一步分析MALAT1对Wnt/β-catenin信号激活的影响，通过western blot检测β-catentin的表达和位置（图。6a） 和免疫荧光分析（图。6b） 在MALAT1过度表达和ox-LDL诱导后。结果表明，与对照细胞相比，转染MALAT1过表达质粒的HUVECs细胞核中的β-catenin水平升高，表明MALAT1过表达进一步促进了ox-LDL诱导的Wnt/β-catentin信号通路的激活。

图6

MALAT1的过度表达促进Wnt/β-catenin通路的激活。用pcDNA-MALAT1或pcDNA载体转染HUVEC 48 小时。一核内β-连环蛋白的蛋白水平(n个 = 3, *P（P） < Western blot分析0.05，与pcDNA载体组相比。b条免疫荧光分析检测β-catenin的位置。放大400倍

讨论

越来越多的证据表明EndMT在动脉粥样硬化的发生和发展中发挥着重要作用[6]促进斑块的不稳定性[5]. 当EndMT发生时，内皮细胞呈现间充质细胞（平滑肌细胞、成纤维细胞）的形状和特性，包括迁移、增殖、分泌细胞外基质（纤维连接蛋白、胶原等）和基质金属蛋白酶，以及各种白细胞粘附分子的表达[3]这些都与动脉粥样硬化斑块的形成、发展和不稳定性有关。人类动脉粥样硬化的病理性内膜增厚是由内膜平滑肌细胞的分散和胞外血浆衍生脂质的积聚形成的[42]. EndMT导致屏障功能丧失，即渗透率增加，这有利于脂质的通过和沉积[43]EndMT是血管内膜中血管平滑肌细胞的来源之一[3]. EndMT在动脉粥样硬化中的作用非常明确，但其机制有待进一步研究。

大量证据表明，MALAT1在冠状动脉粥样硬化性心脏病中起着关键作用[44]. 例如，MALAT1在不稳定型心绞痛患者中上调[45]但另一项研究表明，与非动脉粥样硬化性内动脉相比，MALAT1在动脉粥样硬化性冠状动脉斑块中的表达较少，后者在组织病理学上与冠状动脉的结构层相似，但具有抗动脉粥样硬化性[15]. 此外，据报道，MALAT1中的rs619586AG/GG基因型可预防冠状动脉粥样硬化性心脏病的发生[46]. 在本研究中，在喂食HFD的ApoE−/−小鼠的动脉组织中，MALAT1上调。这与之前的研究一致，表明MALAT1在巨噬细胞中上调[24]和HUVEC[47]用ox-LDL处理，在增殖的血管平滑肌细胞中[22]所有这些细胞都是动脉粥样硬化的关键细胞。然后，研究表明，MALAT1在EMT和EndMT过程中起着重要作用。MALAT1通过海绵miR-124去除Capn4促进鼻咽癌细胞EMT[48]并通过miR-145调节内皮祖细胞（EPC）中TGFBR2和SMAD3介导TGF-β1诱导的EndMT[25]. 因此，我们进行了进一步的体外研究，以阐明MALAT1在动脉粥样硬化EndMT过程中的作用。

LDL-C，尤其是ox-LDL，在动脉粥样硬化的发展中起着重要作用，亚临床动脉粥样硬化在LDL-C患者中仍然很常见 < 70 毫克/分升[49]. Ox-LDL激活内皮细胞中的Ox-LDL受体[10]上调EndMT刺激因子，如炎性细胞因子[11]、ROS[12]和转化生长因子-β[13]. 此外，ox-LDL可以促进前列腺癌细胞的EMT[50]和人肾近端小管上皮细胞[51]. 最近的研究表明，ox-LDL通过稳定蜗牛在人主动脉内皮细胞中诱导EndMT[52]. 在本研究中，经ox-LDL诱导后，人脐静脉内皮细胞的形态由鹅卵石样变为纺锤状，内皮标志物CD31和vWF减少，间充质标志物α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和波形蛋白增加。这些数据表明ox-LDL可以在HUVECs中诱导EndMT。此外，MALAT1和EndMT标记物的变化之间存在显著的线性相关，表明在ox-LDL诱导的HUVEC中，MALAT1和End MT之间存在联系。接下来，将MALAT1敲低或过度表达，以检测MALAT1是否参与ox-LDL诱导的EndMT过程。正如预期的那样，MALAT1沉默逆转了ox-LDL处理的HUVEC的形态学和EndMT标记物的变化。相反，异位MALAT1表达可诱导CD31和vWF的表达，并抑制α-SMA和Vimentin的表达，但HUVEC的形态略有改变。这些数据表明，MALAT1参与了ox-LDL诱导的EndMT。

Wnt/β-catenin是EndMT的信号通路之一[53]. 当Wnt/β-catenin信号通路被激活时，β-catenin被转运到细胞核中，与T细胞因子/白细胞增强因子家族的转录因子相互作用，并激活Wnt反应基因的转录，导致EndMT的发生[54]. 在本研究中，ox-LDL激活了Wnt/β-catenin途径，如细胞核中β-catentin蛋白表达增加所示。由ox-LDL诱导的β-catenin的表达和核转位被MALAT1敲除所抑制，而被MALAT1过度表达所促进。因此可以得出结论，MALAT1可能通过Wnt/β-catenin信号通路部分调节ox-LDL诱导的EndMT。

结论

本研究表明，MALAT1在动脉粥样硬化小鼠和ox-LDL治疗的HUVEC的动脉组织中失调，并揭示了MALAT1在促进ox-LDL-诱导的体外HUVEC-EndMT中的重要作用，这依赖于Wnt/β-catenin信号通路。因此，这些发现可能将ox-LDL诱导的EndMT与其在动脉粥样硬化中臭名昭著的作用联系起来，并强调MALAT1在动脉粥样硬化发展中的重要性。