跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

政府意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息,确保你在联邦政府网站。

Https系统

该站点是安全的。
这个https(https)://确保您连接到官方网站,并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2017年1月20日;12(1):e0170005。
doi:10.1371/journal.pone.0170005。 2017年电子收集。

GFAP-GFP转基因小鼠星形胶质细胞的体内双光子成像

附属公司

GFAP-GFP转基因小鼠星形胶质细胞的体内双光子成像

郭东军等。 公共科学图书馆一号. .

摘要

星形胶质细胞在正常脑功能和神经疾病中起着重要作用。体内双光子激发激光扫描显微镜有潜力揭示细胞在各种生理和病理条件下快速、动态的结构变化。体内成像方法的类型已被证明会影响神经元树突棘的可塑性,但尚未建立星形胶质细胞的最佳体内成像方法。我们比较了GFAP-GFP转基因小鼠新皮层中活星形胶质细胞的双光子激光显微镜的开放颅骨和薄颅骨成像方法。薄壳法在体内至少一周内提供了稳定的星形胶质细胞图像强度和形态特征,没有星形胶质细胞增生的证据。相反,开颅法导致图像强度的显著变化并诱发星形胶质细胞增生。在涉及星形胶质细胞粗大调控或导致星形胶质细胞增生的大多数情况下,颅骨薄片法是星形胶质细胞体内成像的首选方法。

PubMed免责声明

利益冲突声明

提交人声明,不存在相互竞争的利益。

数字

图1
图1。GFAP-GFP小鼠体内星形胶质细胞成像的开颅技术和薄颅技术的示意图和图像分析。
(A,B)小鼠颅骨由两层薄薄的皮质骨和一层厚的松质骨组成。在颅骨开放技术中,颅骨的三层都被切除,暴露的硬脑膜涂上ACSF,并在颅骨窗上覆盖一层玻璃盖片(a)。在颅骨减薄技术中,颅骨被小心地减薄至内皮质骨,厚度约为20μm。薄薄的颅骨涂上一层氰基丙烯酸酯胶,并在颅骨窗上覆盖一层玻璃盖片(B)。在这两种技术中,左侧躯体感觉新皮质上方的颅骨圆形区域(直径约2mm,标有黑色圆圈)被切除(a)或变薄(B)。手术后拍摄的血管图像有助于确保在相同区域进行重复观察。(C) 开颅技术需要约7 mW的激发激光功率才能获得良好的图像质量,而薄颅技术需要更高的激光功率(约25 mW)才能提供类似的图像强度(t检验,*p<0.05,每组n=6)。(D) 在开颅技术中,术后24小时和3天的平均荧光强度降低,但在1周时增加(*,#经Tukey后测的单向方差分析,p<0.05,每组6个)。(E) 相反,与基线相比,薄颅骨技术中的平均荧光强度随时间的推移没有显著变化(p>0.05),尽管与24小时相比,第3天和第1周的荧光强度略有下降(通过Tukey后验的单向方差分析,p<0.05,每组n=6)。
图2
图2
开颅技术(A-D)和颅骨减薄技术(E-H)后1周内星形胶质细胞的典型体内图像。图A-H中的箭头分别表示图A1-H1中放大的星形胶质细胞。星形胶质细胞通常具有典型的浓密外观,由薄突起组成,如A1和E1所示。开颅手术后,星形胶质细胞及其胞体在第3天和第1周时减小,但在第1周星形胶质细胞数量增加。开颅手术后三天,星形胶质细胞开始失去典型的浓密外观,出现精细突起,个别突起延伸和肥大(C1、D1)。颅骨减薄术后1周内星形胶质细胞无明显变化(E-H,E1-H1)。
图3
图3
开颅技术(A-D)和颅骨薄切片技术(E-H)星形胶质细胞数量和形态特征的比较。(A) 在开颅技术中,星形胶质细胞的数量在术后24小时和第3天减少,然后在术后1周增加。(B-D)术后第3天和第1周,星形胶质细胞及其胞体的大小减少(B,C),而胞体与星形胶质细胞大小的比值在术后第1周增加(D)。(E-H)在薄颅骨技术中,在术后观察到的所有时间点,星形胶质细胞数量、星形胶质细胞或胞体大小以及胞体与星形胶质细胞的比率均未观察到显著变化。*、#、&经Tukey后验单因素方差分析,p<0.05(每组6例)。
图4
图4。GFAP-GFP转基因小鼠开颅和颅骨减薄术后固定组织切片中GFAP的免疫组织化学染色。
GFAP(红色)的表达是反应性星形胶质细胞的典型免疫组织化学标记。在开颅手术(B,C)后第3天和第1周,新皮质手术侧(左侧)GFAP阳性星形胶质细胞大量增加,但在薄颅手术(d,E)后没有增加。对侧(右侧)(G-J)和对照组(A,F)出现少量GFAP阳性星形胶质细胞。图A-J中的箭头分别表示图A1-J1中放大的星形胶质细胞。总结数据(K,L)表明,在第3天和第1周,开颅小鼠左侧新皮质中的GFAP阳性星形胶质细胞明显多于瘦颅骨小鼠或对照小鼠(K),而右侧新皮质(L)没有显著差异*经Tukey后验单因素方差分析,p<0.05(每组6例)。

类似文章

引用人

工具书类

    1. Verkhratsky A、Nedergaard M、Hertz L(2015)为什么星形胶质细胞很重要?神经化学研究40:389–401。2007年10月10日/11064-014-1403-2-内政部-公共医学
    1. De Pitta M,Brunel N,Volterra A(2015)《星形胶质细胞:协调突触可塑性?神经科学。-公共医学
    1. Seifert G、Schilling K、Steinhauser C(2006),《神经疾病中的星形胶质细胞功能障碍:分子视角》。《国家神经科学评论》7:194-206。10.1038/编号1870-内政部-公共医学
    1. Svoboda K,Yasuda R(2006)双光子激发显微镜原理及其在神经科学中的应用。神经元50:823–839。2016年10月10日/j.neuron.2006.05.019-内政部-公共医学
    1. Holtmaat A,de Paola V,Wilbrecht L,Trachtenberg JT,Svoboda K,Portera-Cailliau C.(2012)通过慢性颅窗成像新皮质神经元。冷春Harb协议2012:694–701。10.1101/pdb.prot069617-内政部-项目管理咨询公司-公共医学