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.2009:15:737-46.
Epub 2009年4月13日。

视网膜缺血再灌注后猪视网膜动脉和视网膜神经中的蛋白激酶C

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视网膜缺血再灌注后猪视网膜动脉和视网膜神经中的蛋白激酶C

博迪尔·盖斯林等。 摩尔-维斯. 2009.

摘要

目的:视网膜缺血时激活的细胞内信号转导通路的识别对于揭示新的药理靶点可能很重要。迄今为止,大多数研究都集中于识别神经保护剂。视网膜血管是循环衰竭的关键器官,因此本研究旨在分别检查视网膜血管和神经视网膜。

方法:通过提高猪眼内压诱导视网膜缺血,然后再灌注5、12或20小时。采用实时PCR、western blot和免疫荧光染色技术测定蛋白激酶C(PKC)α、PKCbeta1和PKCbeta2 mRNA水平和蛋白表达。

结果:在这个猪模型中,视网膜动脉可以很容易地从神经视网膜中分离出来进行研究。缺血再灌注后视网膜动脉和神经视网膜中的PKCalpha、PKCbeta1和PKCbeta2 mRNA水平往往低于假手术眼。这在5小时后最为明显,在再灌注12小时和20小时后不太明显。同样,缺血-再灌注后PKCalpha、PKCbeta1和PKCbeta2的蛋白水平与假手术眼相比略低。在神经视网膜的双极细胞和内皮细胞中观察到PKCalpha、PKCbeta1和PKCbeta2免疫染色,在视网膜动脉的平滑肌层也观察到少量PKCbeta免疫染色。

结论:视网膜缺血再灌注导致神经视网膜和视网膜动脉中PKC水平降低。通过研究视网膜血管系统,可以找到药物治疗的新靶点,从而确定视网膜循环衰竭后损伤发展中涉及的细胞内信号转导途径。

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数字

图1
图1
视网膜动脉和神经视网膜中PKC mRNA水平。PKCα,PKCβ1、和PKCβ2通过实时PCR评估mRNA表达水平(A类)视网膜动脉和(B类)缺血和再灌注5小时(n=6)、12小时(n=14)或20小时(n=6)时,神经视网膜与假手术眼相比。数值表示为平均值±SEM。使用Student的配对比率进行统计比较t吨-Bonferroni校正试验(缺血再灌注与半手术)。图中给出了精确的p值。请注意PKCα,PKCβ1、和PKCβ2视网膜动脉和神经视网膜的变化模式相似。
图2
图2
视网膜动脉和神经视网膜中PKC蛋白水平。蛋白质印迹法评估磷酸化和总PKCα、PKCβ1和PKCβ2蛋白表达水平(A类)视网膜动脉和(B类)视网膜神经,缺血眼和再灌注12(n=7)或20(n=5)小时眼与假手术眼相比。右面板是再灌注20小时组动物的神经视网膜和视网膜动脉的western印迹的代表性示例。数值表示为平均值±SEM。使用Student的配对比率进行统计比较t吨-Bonferroni校正试验(缺血再灌注与假手术)。图中给出了精确的p值。
图3
图3
视网膜动脉和神经视网膜中的PKC免疫反应。显示缺血和再灌注20小时后视网膜动脉和视网膜中磷酸化PKCα、PKCβ1和PKCβ2免疫反应的典型示例。答:内皮细胞标记物CD31(也称为PECAM-1)的双重染色显示,磷酸化PKC在内皮细胞中共同定位(箭头所示)。平滑肌层也可见弱磷酸化PKC染色。B类:根据western blot,缺血再灌注后神经视网膜中观察到的PKCα、PKCβ1和PKCβ2水平较低,反映在免疫荧光染色结果中,显示缺血再灌注眼与假手术眼相比,磷酸化PKCα和PKCα2染色较少。此外,磷酸化PKCβ1染色显示,与假手术眼相比,缺血再灌注眼中标记的双极细胞小体更少(参见p-PKCβ一图片中的插入内容)。在所研究的所有猪中也观察到类似的结果。缩写:外核层(ONL)、外丛状层(OPL)、内核层(INL)、内网状层(IPL)、神经节细胞层(GCL)和神经纤维层(NFL)。
图4
图4
视网膜动脉平滑肌层PKC免疫反应。显示缺血和再灌注20小时后视网膜动脉中磷酸化PKCα、PKCβ1和PKCβ2免疫反应的典型示例。平滑肌肌动蛋白(平滑肌标记物)的双重染色显示,平滑肌层与磷酸化PKC共定位(箭头所示)。注意,磷酸化PKCα的共定位最明显。

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引用人

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