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.2007年9月;43(3):371-6.
doi:10.1016/j.yjmcc.2007.05.021。 Epub 2007年6月7日。

靶向PKCalpha的腺病毒短发夹RNA改善重建心脏组织的收缩功能

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靶向PKCalpha的腺病毒短发夹RNA改善重建心脏组织的收缩功能

阿里·埃尔·阿穆切等。 J Mol Cell心脏病学. 2007年9月.

摘要

PKCalpha已被证明是防止心力衰竭小鼠收缩力的负调节因子和PKCalpha-基因缺失。小干扰(si)RNA通过RNA干扰(RNAi)介导基因沉默,可用于敲低心肌细胞中的PKCalpha。然而,脂质体转染(si)RNA在原代细胞中的转染效率往往较低。为了解决这一局限性,我们开发了一种腺病毒载体(AV),驱动针对PKCalpha的短发夹(sh)RNA,并评估了其在新生大鼠心肌细胞和类似于体外功能性心肌的工程心脏组织(EHT)中沉默PKCalpha的潜力。无意义编码AV(Ad-shNS)作为对照。定量PCR和Western blotting显示,在Ad-shPKCalpha感染的细胞中,PKCalpha-mRNA降低90%,PKCalphi蛋白降低50%。EHT在第11天感染Ad-shPKCalpha,4天后在器官浴中进行等长测力。在基础和Ca(2+)或异丙肾上腺素刺激条件下,Ad-shPKCalpha的平均收缩张力高于Ad-shNS-感染EHT的50%以上。抽搐张力与PKCalpha mRNA水平呈负相关。总之,AV递送的shRNA介导了心肌细胞中高效的PKCalpha敲除,并改善了EHT的收缩能力。数据支持PKCalpha作为心肌收缩性负调节器的作用,并证明EHT与AV递送shRNA是一个有效的靶向验证模型。

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