Distinct ‘safe zones’ at the nuclear envelope ensure robust replication of heterochromatic chromosome regions

Hani Ebrahimi; Hirohisa Masuda; Devanshi Jain; Julia Promisel Cooper

doi:10.7554/eLife.32911

图6。

富含Bqt4的结构域确保异染色质的忠实遗传。

(A类)设计用于将复制叉移动到NE的系统示意图。Polα-GFP和Man1-GBP的共表达将Polα相关（复制）染色质招募到NE富含Man1的亚结构域。下图显示Polα-GFP的再活化，以与围绕细胞核的Man1-GBP-mCherry共定位。(B类)在缺乏Man1-GBP的细胞中，Polα-GFP在核内部呈弥散分布。(C类)按照文本和方法中的描述，使用H3K9Me2抗体（ab1220，Abcam）进行ChIP-seq实验。(D类)H3K9Me在ade6+三个独立WT菌株的基因座。蓝色实线表示中间带；带状物的宽度表明了三个分离物的富集水平范围。(E–F)H3K9Me2在Chr III着丝粒富集的带状线图。中心核心区域用黄色方框表示。核心区域两侧的尖峰(F类)与基因组中多个区域中存在的小重复区域（~25bp）对齐；因此，不可能确定其来源。

图6——图补充1。

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Polα上的C末端GFP标签不会干扰着丝粒沉默。

显示了所示菌株的五倍系列稀释液。While期间重量细胞表达尿酸4+在缺乏尿嘧啶的介质上生长，在FOA的存在下无法生长，尿苷-D18细胞不能在-URA上生长，但在FOA上生长。窝藏细胞尿酸4+在着丝粒国际货币兑换率基因座因沉默而在FOA上生长国际货币兑换率; 这些细胞在-URA上也表现出部分活性丧失，这也是由于国际货币兑换率沉默。这种沉默在携带Polα/Swi7-GFP的细胞中是完整的。

图6——图补充2。

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Man1-GBP将Polα-GFP和端粒复制到富含Man1的结构域。

(A类)三名代表重量细胞核内可见Rad11-mCherry的细胞（活细胞的单个Z平面图像）。(B类)每行显示一个代表性活细胞，表达Polα-GFP Man1-GBP和Rad11-mCherry（细胞核的单个Z平面图像）。Polα-GFP再活化到NE，形成荧光环。Rad11也似乎再活化到了NE，与之相比，细胞核内部的细胞可检测到的Rad11-mCherry信号更低重量单元格（与A比较）。(C类)Taz1倾向于局限于Man1贫困地区（量化为(E类))在中重量设置。在DeltaVision显微镜上进行成像。(D–E型)在包含Man1-GBP/Polα-GFP系留系统的细胞中，Taz1/Man1重叠的频率增加。(D类)中的图像(C类). (E类)使用Applied Precision softWorX软件确定了定义Taz1-mTurquoise和Man1-GBP-mCherry之间共定位程度的Pearson相关系数。虽然在wt情况下Taz1很少与Man1共定位，但GBP介导的Polα-GFP招募会将端粒复制到Man1位点。