图1

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“内部”产生的抗PAT4单克隆抗体的验证。(b条)用PAT4单克隆抗体(PAT4/9/H10)培养福尔马林固定、石蜡包埋的786-O细胞,并用3,3'-二氨基联苯胺(DAB)进行可视化。在用干扰控制siRNA处理的大多数细胞中,可见明显的核周染色区(). 第四阶段使用siRNA敲除转录本第四阶段(si435;海伯林等。;14 b条). (c(c))细胞裂解物系列稀释液的Western blot分析(15、7.5和3.8μg蛋白质),由携带IPTG诱导的shPAT4(43587;shPAT5)的786-O细胞池产生,用PAT4单克隆抗体Pat/9/H10进行检测。这揭示了一组60-75岁的乐队IPTG诱导的kDa强烈降低第四阶段击倒(+IPTG),表明它们是PAT4特有的。Western blot也用抗微管蛋白抗体作为负荷对照进行了检测。(d日)对786-O细胞和GFP-PAT4过度表达的HEK-293细胞系的细胞裂解产物进行Western blot,在电泳前用PNGase F处理以去除糖基。这将未经处理的细胞裂解物中的交叉反应分子分解成更为特异的条带,在约30和50时迁移kDa分别小于预测分子量55kDa(PAT4)和85kDa(GFP-PAT4),其他跨膜蛋白也有报道。43