图5

MDCK细胞中TRPP2的消融降低ER-Ca²⁺泄漏并导致可释放钙量增加²⁺(A类)条件表达MDCK细胞的分析TRPP2型-靶向（TRPP2 kd）或对照shRNA盒，以及GFP标记。通过western blotting分析在没有（−tet）和存在（+tet）四环素的情况下生长的细胞制备的裂解物。荧光显微镜（绿色）也观察到GFP的诱导表达。细胞核用Hoechst 33342（蓝色）染色。比例尺：10μm。(B类)Fura-2细胞溶质钙²⁺在缺乏细胞外钙的情况下，用2μM离子霉素（Iono）处理TRPP2缺失细胞（TRPP2 kd）和对照细胞后的成像²⁺显示了代表性记录道和组数据（峰值-基线；n个=7）。(C类)除使用10μM ATP外，实验按（B）进行(n个=6). (D类)western blotting分析对照组和TRPP2 kd细胞裂解液中SERCA2和Bcl-2的水平。(E类)用低亲和力钙负载MDCK细胞²⁺指示剂Mag-Fur-2AM和洋地黄素渗透分析钙的动力学²⁺泵入ER及其泄漏。图片显示了渗透（a）后定位于细胞内储存物中的Mag-Fura-2（340 nm波长激发）的荧光及其钙²⁺（b）和（c）重新填充之前和之后的加载状态（340/380nm比率以假彩色表示）。(F类)图表显示了Ca的变化²⁺细胞内储存物的负载状态（340/380nm比率R（右）除以最小比率R（右）₀)在对照组和TRPP2缺失（TRPP2 kd）细胞中。通过添加1.5 mM ATP和Ca开始重新加注²⁺30μM CPA抑制SERCA后观察到泄漏。最小比率R（右）₀在用离子霉素（Iono；2μM）耗尽储存后发现。(G公司)ER再填充和泄漏的统计分析n个=64个控制单元和n个=64个TRPP2-分别来自六个和七个独立测量的缺失细胞。每个细胞的钙渗漏率与R（右）/R（右）₀在CPA治疗开始时，用Excel软件将数据拟合成线性回归线(年=bx公司+一，其中b条为0.0054，一为−0.005，相关性对=0.835（对于对照细胞）；b条为0.0038，一为−0.0032，并且对=0.661（对于TRPP2缺失的细胞）。左边的条形图显示了两个回归斜率之间的差异及其标准误差(对=0.025). 其余的条形图显示了泄漏和重新填充的平均速率及其标准误差。