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鹿吉尼亚斯® 病原基因检测PCR套装(用于腹泻原性大肠菌)

腹泻原性大肠菌E. coli)是引起人腹痛、腹泻的大肠菌的总称,根据性质和症状的不同,分为7种。
本套装通过多应用PCR进行基因放大,确认其放大产品,可以确认在日本主要报告的5种病原基因的持有状况。

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特长

●使用3种Primax,可检测与肠管病原性大肠菌(EPEC)、肠管出血性大肠菌(EHEC)、肠管毒素性大肠菌(ETEC)、肠道侵入性大肠菌(EIEC)、肠管凝集性大肠菌(EAEC)病原性有关的遗传因子
●通过将检测结果数值化,可以容易地判定

配套元件构成

 个别名称容量数量
试剂A AptaTaq DNA Master(5×Conc.)* 1.2 mL 一枝
试剂B PCR辅助食品 1.1 mL 一枝
试剂C 标准混合1 0.4 mL 一枝
试剂D 标准混合2 0.4 mL 一枝
试剂E 标准混合3 0.4 mL 一枝
试剂F 积极控制 0.4 mL 一枝
试剂G 6×负载缓冲存储器(BPB・XC) 1.2 mL 一枝

*AptaTaq DNA Master(5×Conc.)是Roche Diagnostics K.K.的商品。

操作步骤

增菌、分离培养 分离大肠杆菌
提取DNA 鹿吉尼亚斯®用DNA提取试剂制出模板DNA
PCR 进行3种多应用PCR
电泳 进行3%的阳极化凝胶电泳
检测 用溴化乙烯溶液检测,检测PCR片断
确定 在专用的计算表中输入结果,进行病原型的判定

分析方法

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电泳模式

100:10bp DNA拉达
P:积极控制
1:ATCC®35150(EHEC)
2:ATCC®43887(EPEC)
3:ATCC®35401(ETEC)
4:ATCC®43893(EIEC)
5:ATCC®25922(非病原性大肠菌)
6~10:临床分离股

游泳条件是3%的外脊KANTO HC(1)×TBE缓冲液)中,使用Mupid-exU,100V为35分钟。使用13孔的梳子,将样品8μ游泳了。
*使用的Agaloss凝胶是在一个凝胶中刺入3个13孔胶水制作而成的。



样本编号
12345678910
系数的合计值 97 1 24 4 0 97 1 24 16 2
病原型的判定 EHEC EPEC ETEC EIEC 其他 EHEC EPEC ETEC ETEC EAEC

检测基因及其PCR放大产品尺寸

 系数放大尺寸(bp)目标区域

Reaction
mixture 1
1 384 eaeA
32 132 stx1
64 93 stx2
Reaction
mixture 2
16 130 est
8 62 elt
Reaction
mixture 3
2 575 aggR
4 382 invE
校规
控件
120 16s rDNA

InvE遗传因子是由于位于柏拉图上的侵入性基因而脱落的。
①从3个多应用PCR的电泳结果中读取带图案。
②使用该电泳带的有无结果,用二进制输入解析用excel表,进行病原型的判定。
③16s rDNA为阳性的情况下,可以推测为大肠菌。

合计分数和腹泻原性大肠菌的病原型

合计点数病原型
0 EHEC/STEC、EPEC、ETEC、EIEC、EAEC以外的大肠菌或近缘微生物
1 EPEC
2 EAEC
4~7 EIEC
8~11 ETEC(elt+)
16~19 ETEC(est+)
24~27 ETEC(est+、elt+)
32~35 EHEC/STEC(stx1+)
64~67 EHEC/STEC(stx2+)
96~99 EHEC/STEC(stx1+、stx2+)
除上述以外 怀疑是混合感染

*不能区分EIEC和痢疾菌。合计得分为36的情况下,怀疑有志贺痢疾菌的可能性。
*stx2(志贺毒素
2型生产基因)有时无法通过变体检测。例)stx2f

产品一览表

产品编号 产品名称 保存温度 规格 包装 价格
08178-96 传感器R DNA提取试剂
Cica geneusR DNA extraction reagent
冷藏 分子生物学用 1pack(120次) ¥22,000
08087-96 传感器R病原基因检测PCR脚注(用于腹泻原性大肠菌)
Cica geneusR Pathogenesis Gene Detection PCR Kit (for Diarrheagenic E.coli)
冷冻 分子生物学用 1pack(100次) ¥85,000

关于其他厂家的商品的许可证和专利,请向各厂家确认。

・“法律”、“SDS”、“库存”等详细信息请点击产品编号进行确认。
・购买和使用试剂时

小册子

鹿吉尼亚斯® 病原基因检测PCR套装(用于腹泻原性大肠菌)

 

使用说明书

病原基因检测PCR套装(用于腹泻原性大肠菌)

计算表(ZIP文件、Excel)

分析用excel表

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相关文献

1)公立大学法人大阪市立大学、株式会社KALS、株式会社二共刃型工业腹泻原性大肠菌检测方法”,专利公开2008-283895

2) Ruttler, M.E.at el,Biocell, 30(2): 301-308, 2006
3)Hiroe, Aet al,Appl, Environ, Microbiol,78(9): 3177-3184, 2012



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