Collagen Hybridizing Peptide（CHP）是通过组织损伤和胶原的再造等三重螺旋结构崩溃，与变性了的胶原结合，形成新的三重螺旋结构检测变性了的胶原的试剂。准备了Fluorescein标识（F-CHP）、Cy3标识（R-CHP）、Biotin标识（B-CHP）3种。
特征
- 与动物种类和骨胶原类型无关，与变性骨胶原特异性地结合。
- 不需要抗原活化，冷冻切片、石蜡切片都可以使用。
- 与抗体相比，因为分子量是IgG的2%左右，所以对组织的渗透性很高，即使不薄片化也可以染色。
原理
在生物体内存在的大部分的骨胶原不管是骨胶原类型，都有三重螺旋结构。众所周知，这种胶原由于受到胶原酶的分解和机械损伤，三重螺旋结构崩溃，变性。CHP是特异性结合变性胶原的探针。
F-CHP（Fluorescein标识）
R-CHP（Cy3标识）
B-CHP（Biotin标识）产品信息
in vitro用胶原检测探针（CHP）
| 标识 | 产品名称 | 简称 | 产品编号 | 产品信息 | 相关资料 |
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| Fluorescein | Collagen Hybridizing Peptide，5-FAM Conjugate | F-CHP | FLU60 | 60μg | 数据表 |
| FLU300 | 300μg |
| Cy3 | Collagen Hybridizing Peptide，Cy3 Conjugate | R-CHP | RED60 | 60μg |
| RED300 | 300μg |
| Biotin | Collagen Hybridizing Peptide，Biotin Conjugate | B-CHP | BIO60 | 60μg |
| BIO300 | 300μg |
控制用胶原检测探针（CHP）
| 标识 | 产品名称 | 简称 | 产品编号 | 产品信息 | 相关资料 |
|---|
| Fluorescein | Collagen Hybridizing Peptide，5-FAM Conjugate | F-CHP | FLU60CTL | 60μg | 数据表 |
| Cy3 | Collagen Hybridizing Peptide，Cy3 Conjugate | R-CHP | RED60CTL | 60μg |
| Biotin | Collagen Hybridizing Peptide，Biotin Conjugate | B-CHP | BIO60CTL | 60μg |
应用程序
组织病理学
被酶分解后的胶原蛋白会变得热不稳定，在体温下变性。这种变性的胶原是病态下炎症和组织损伤的标志，或者是生理发育中组织重构的标志。CHP几乎适应所有的组织，可以用于心肌梗塞、关节炎、肾炎、纤维症等广泛的疾病的研究。
肺纤维化
这是通过迷你泵，在不同期间（1～4周）给药了布霉素的老鼠和给药了1周PBS的老鼠的照片。CHP的信号在服用布霉素后的第4周之前有所增加。
心肌梗塞
CHP对正常的心脏组织没有反应，但对心肌梗塞后第7天的心脏有强烈反应。
左：心肌梗塞后第7天的心脏/右：正常心脏| 疾病 | 心肌梗塞 |
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| 样本 | 小鼠心脏 |
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| 染色 | B-CHP+Alexa647标识Streptavidin（黄色） |
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变形性膝关节病
变性的软骨可以看到高度分解的Ⅱ型胶原。
左：变形性膝关节病的关节软骨组织/右：正常组织| 疾病 | 变形性膝关节病 |
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| 样本 | 患者关节软骨组织 |
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| 染色 | F-CHP（绿色）
蓝色 |
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肾小球肾炎
CHP引起炎症，对线球体损伤了的骨胶原的眼反应着，不过，抗骨胶原Ⅳ抗体对组织内全部的骨胶原Ⅳ反应着。
左：肾小球肾炎的肾脏/右：正常组织| 疾病 | 肾小球肾炎 |
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| 样本 | 大鼠肾脏 |
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| 染色 | F-CHP（绿色）
抗胶原IV抗体（红） |
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骨骼肌组织的发育
通过CHP检测的胶原蛋白分解，可以观察骨骼肌组织的发育过程。照片是追踪了预先形成的软骨被再吸收，石灰化了的骨被置换这样的软骨内骨化的过程的照片。CHP仅局限于正在进行软骨内骨化的骨骼组织。
| 样本 | 小鼠胚胎（14～18日龄） |
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| 染色 | F-CHP（绿色）
蓝色 |
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皮肤老化
9个月龄小鼠皮肤真皮可见大量变性的胶原。CHP还可用于检测光老化、皮肤炎症及自身免疫性皮肤疾病中的胶原损伤，评价护肤品和成分的有效性和安全性。
左：21日龄小鼠皮肤/右：9月龄小鼠皮肤| 样本 | 小鼠皮肤切片（21日龄、9月龄） |
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| 染色 | B-CHP+Alexa647标识
流（黄色）
蓝色 |
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机械损伤
骨胶原是所有承重组织的主要组成部分，包括肌腱、韧带、骨骼和软骨。对这些组织的机械损伤使骨胶原变性，在宏观尺度上没有可检测的形态学变化的情况下，有可能引起病态变化。通过使用CHP，可以在分子水平上检测机械拉伸的腱纤维束胶原的损伤状态。
大鼠尾腱束的拉伸试验
左：以大鼠尾腱束为样本，进行拉伸试验，拉伸率为5,10.5,15%，用CHP检测损伤情况。随着拉伸率的增加，胶原蛋白的损伤增加，随之F-CHP的荧光也增加。
右：应力-应变曲线（黑线）偏离线形成区域（红虚线）时，CHP的荧光强度从基线开始上升。这暗示着骨胶原分子的展开对应着机械性损伤的开始。
左：拉伸率为15%的拉伸试验后，通过SHG（灰色）和CHP（绿色）进行多光子成像分析的结果。CHP的染色图案显示分子水平的胶原损伤具有不均一性。
右：拉伸率为12%的试验后，结合金纳米粒子结合B-CHP，用TEM（透射电子显微镜）观察的结果。高密度的CHP结合区域表示发生了纤维破坏（d带图案的丧失）。组织的脱细胞化
从脱细胞化组织得到的天然细胞外基质（ECM）被广泛用于再生医疗。但是，通过脱细胞化的方法，ECM的组成和微细结构发生变化的话，也会影响生物学活性和组织修复功能。以前的组织学的染色，SEM（扫描型电子显微镜），TEM（透射型电子显微镜）不能进行，不过，CHP用简单的图像解析能定量地观察分子水平的变性骨胶原。
猪膀胱基底膜复合体各表面活性剂脱细胞化的评价
这是用4种表面活性剂（1%SDS、8mM CHAPS、4%SD、3%Triton X-100）脱细胞化的猪膀胱基底膜复合体中的胶原用抗胶原I抗体（上段），变性胶原用F-CHP（下段）染色的照片。1%SDS和3%Triton X-100的胶原蛋白变性，其中1%SDS的变性效果很强。变性胶原的检测
用SDS-PAGE电泳胶原蛋白的话，SDS和热会使胶原蛋白变性。CHP容易并且特异性地检测这个变性骨胶原。因为不需要在像西部布洛克一样的膜上转印和布洛克的作业，所以可以节约时间和工夫。
SDS-PAGE检测
左：在SDS-PAGE凝胶中使用F-CHP检测阶段稀释的Ⅰ型胶原，结果检测下限值为5ng。
中央·右：CHP不论胶原蛋白的类型都能检测，不过，对纤维蛋白原和层粘连蛋白等没有反应。癌细胞浸润
由于癌的转移产生的细胞浸润和游走基于通过细胞外基质（ECM）的各种各样的水平的物理的约束的细胞的能力。癌细胞可以以蛋白酶非依赖性或蛋白酶依赖性的方式侵入ECM，但证明蛋白酶依赖性的细胞浸润并不容易。ECM分解的活性可以通过蛋白质分解产生荧光的合成水凝胶，或者通过使用具有用于ECM修饰蛋白酶的荧光报告基因的细胞来可视化。但是，合成水凝胶没有市售，报道基因的转染与很多初代细胞（例.患者来源的细胞）不相容。二次谐波产生（SHG）显微镜用于在无标记的情况下可视化纤维状ECM结构，但在分子水平上检测ECM的分解没有足够的灵敏度。
癌细胞引起的胶原蛋白代谢旋转的可视化
CHP是in vitro在的3D胶原水凝胶内，可以可视化癌细胞的蛋白质分解移动引起的细胞周围的胶原代谢旋转。水凝胶中分解的胶原蛋白通过三重螺旋杂交直接用CHP标记，其信号可以通过荧光共聚焦显微镜容易观察到。
使用DQ胶原和CHP的细胞浸润的比较
这是MDA-MB-231细胞开始培养1天后的照片。CHP染色的信号在细胞周围空间显示出纤维样的形态，但是DQ胶原信号失去了特征性的胶原纤维形态，在细胞质内作为凝集点出现。这暗示着DQ胶原被切断了的荧光碎片从胶原纤维分离，被细胞内在化了的可能性。
>in vitro关于CHP的常见问题
>in vivo用sulfo-Cy7.5标记胶原检测探针（CHP）
