主要功能和细节
重组生产(无动物),实现高批次一致性和长期供应安全 兔单克隆[EP823Y]到Smad3(磷酸化S423+S425) 适用于:WB、ICC/IF、ChIC/CUT&RUN-seq、IHC-P、Dot-blot 反应对象:老鼠、人类
相关共轭物和制剂
概述
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产品名称 -
描述 兔单克隆[EP823Y]到Smad3(磷酸化S423+S425) -
寄主物种 兔子 -
特异性 该抗体检测丝氨酸423和丝氨酸425上磷酸化的Smad3。 该Smad3抗体也可检测到在等效位点磷酸化的Smad1、Smad2和Smad5。 -
经过测试的应用程序 -
物种反应性 与以下物质反应: 老鼠,人类 -
免疫原 合成肽。 此信息为Abcam和/或其供应商专有。 -
阳性对照 WB:HL-60用TGF-ß细胞裂解物处理; A549未经处理,用5ng/ml TGF-ß1处理24小时全细胞裂解物; F9全细胞裂解物。 IHC-P:人胃癌和肝癌组织; 小鼠肾组织; 环境性肠病(EE)十二指肠活检。 ICC/IF:TGF处理的A549细胞; 用CTL-siRNA或NDRG1-siRNA转染PML+/+小鼠胚胎成纤维细胞(MEFs); 小鼠原代胚胎心外膜细胞。
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一般注意事项
属性
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表格 液体 -
储存说明 在4°C下装运。 交付后,将等分样品储存在-20°C下。 避免冷冻/解冻循环。 -
存储缓冲区 pH值:7.20 防腐剂:0.01%叠氮化钠 成分:59%PBS、40%甘油、0.05%BSA -
正在加载浓度信息。。。 -
纯度 蛋白质A纯化 -
克隆性 单克隆 -
克隆编号 EP823Y型 -
同位素 免疫球蛋白G -
研究领域
相关产品
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替代版本 -
兼容的辅助设备 -
同位素控制 -
阳性对照 -
重组蛋白 -
相关产品
应用
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目标
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功能 受体调节型SMAD(R-SMAD)是一种由TGF-β(转化生长因子)和激活素1型受体激酶激活的细胞内信号转导和转录调节剂。 结合TGF-β调节的许多基因启动子区域中的TRE元件,并在形成SMAD3/SMAD4复合物时激活转录。 也可以在AP-1/SMAD位点形成SMAD3/SMAD4/JUN/FOS复合物来调节TGF-β介导的转录。 可能通过调节原代角质形成细胞的生长和迁移以及改变TGF介导的单核细胞趋化性,对伤口愈合产生抑制作用。 这种对伤口愈合的影响似乎对激素敏感。 软骨生成和骨生成的调节器,并抑制骨折的早期愈合。 通过刺激PDPK1激酶与作为负调控因子的14-3-3蛋白YWHAQ的分离,对其活性进行积极调节。 -
参与疾病 大肠癌 Loeys-Dietz综合征3 -
序列相似性 属于矮人/SMAD家族。 包含1个MH1(MAD同源1)域。 包含1个MH2(MAD同源2)域。 -
域 MH1结构域是DNA结合所必需的。 还结合DNA结合所必需的锌离子。 MH2结构域是同源和异源相互作用以及转录调控所必需的。 足够用于核进口。 连接子区域是TGFβ介导的转录活性所必需的,并与MH2结构域协同作用。 -
翻译后 修改 丝氨酸和苏氨酸残留物磷酸化。 EGF和TGF-β治疗中Thr-179、Ser-204和Ser-208连接区的磷酸化增强。 Ser-208是MAPK介导的磷酸化的主要位点。 CDK介导的磷酸化以细胞周期依赖的方式发生,并抑制SMAD3的转录活性和抗增殖功能。 这种磷酸化被黄哌啶醇抑制。 G(1)/S结合处的最大磷酸化。 还通过TGFBR1和ACVR1磷酸化C末端SXS基序中的丝氨酸残基。 TGFBR1介导的这些C末端位点的磷酸化是与SMAD4相互作用、核定位和反式激活活性所必需的,并且似乎是TGF-β介导的连接区磷酸化的先决条件。 PPM1A在C末端SXS基序中去磷酸化。 这种去磷酸化破坏了与SMAD4的相互作用,促进核输出并终止TGF-β介导的信号传导。 CSNK1G2/CK1在Ser-418处的磷酸化促进配体依赖的泛素化和随后的蛋白酶体降解,从而抑制SMAD3介导的TGF-β反应。 PDPK1磷酸化。 MH2结构域中EP300在细胞核中的乙酰化作用正向调节其转录活性,并通过TGF-β增强。 无所不在。 单泛素化,防止DNA结合。 USP15脱泛素可减轻TGF-β靶基因的抑制并促进其活化。 PARP1和PARP2使Poly-ADP-核糖化。 ADP核糖基化在TGF-β信号传导过程中负调控SMAD3转录反应。 -
手机定位 细胞质。 核心。 缺乏TGF-β的细胞质和细胞核。 在TGF-β刺激下,与SMAD4复合后迁移至细胞核(PubMed:15799969)。 通过磷酸酶PPM1A的作用,从SMAD2/SMAD4复合物中释放,并通过与RANBP1的相互作用从细胞核中输出(PubMed:16751101,PubMed:19289081)。 在细胞核内膜与LEMD3共定标(PubMed:15601644)。 MAPK介导的磷酸化似乎对核导入没有影响(PubMed:19218245)。 PDPK1阻止其对TGF-β的核转位(PubMed:17327236)。 -
UniProt提供的信息 -
数据库链接 -
替代名称 DKFZP586N0721抗体 DKFZp686J10186抗体 hMAD 3抗体
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图像
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使用最终浓度为700 ng/µL的pAG-MNase、经hTGF-β1(7 ng/mL 1 h)和5µg ab52903[EP823Y]处理的2.5 x 10^5 A549(人肺癌细胞系)细胞进行ChIC/CUT&RUN。 所得DNA在Illumina NovaSeq 6000上测序,测序深度为1000万读。 阴性IgG对照 约172730 图中还显示了。 日内瓦大学拥有与ChIC(染色质免疫清洗)方法相关的专利。 -
使用最终浓度为700 ng/µL的pAG-MNase、经hTGF-β1(7 ng/mL 1 h)和5µg ab52903[EP823Y]处理的2.5 x 10^5 A549(人肺癌细胞系)细胞进行ChIC/CUT&RUN。 所得DNA在Illumina NovaSeq 6000上测序,测序深度为1000万读。 阴性IgG对照 约172730 图中还显示了。 日内瓦大学拥有与ChIC(染色质免疫清洗)方法相关的专利。 -
使用最终浓度为700 ng/µL的pAG-MNase、经hTGF-β1(7 ng/mL 1 h)和5µg ab52903[EP823Y]处理的2.5 x 10^5 A549(人肺癌细胞系)细胞进行ChIC/CUT&RUN。 所得DNA在Illumina NovaSeq 6000上测序,测序深度为1000万读。 阴性IgG对照 约172730 图中还显示了。 日内瓦大学拥有与ChIC(染色质免疫清洗)方法相关的专利。 -
所有车道: 1/2000稀释(纯化)的抗S-mad3(磷酸化S423+S425)抗体[EP823Y](ab52903) 车道1: F9(小鼠胚胎睾丸癌上皮细胞)全细胞裂解物 车道2: F9(小鼠胚胎睾丸癌上皮细胞)全细胞裂解。 然后用磷酸酶孵育膜。 每车道15µg的裂解液/蛋白质。 次要 所有车道: 山羊抗狂犬病IgG H&L(HRP)( ab97051型 )稀释1/20000 预测的带宽大小: 48千Da 观察到的频带大小: 50千Da 为什么实际的频带大小与预测的不同? 暴露时间: 1分钟 封闭和稀释缓冲液:5%NFDM/TBST。 -
A549+/-TGFβ(5ng/ml,24h)和A549+TGFβ(5ng/ml,24 h)+Lamda磷酸酶(LP)细胞的免疫细胞化学/免疫荧光分析。 Smad3(磷酸化S423+S425)用纯化的ab52903以1/100稀释度标记,而Smad3用 约207447 稀释度为1/500。 用4%多聚甲醛固定细胞,并用0.1%triton X-100使其透化。 约150077 (山羊抗兔IgG Alexa Fluor ® 488)(1/1000)作为二级抗体。 这些细胞与 约195889年 (抗α-管蛋白抗体[DM1A]-微管标记物(Alexa Fluor ® 594)) 1/200. 细胞核用DAPI(蓝色)复染。 对照:用PBS代替一抗。 -
所有车道: 1/1000稀释(纯化)的抗S-mad3(磷酸化S423+S425)抗体[EP823Y](ab52903) 车道1: A549全细胞裂解物 车道2: 用5ng/ml TGF-ß1处理A549 24小时全细胞裂解物 3号车道: A549用5ng/ml TGF-ß1处理24小时全细胞裂解物,将膜与碱性磷酸酶一起孵育 每条泳道10µg的裂解物/蛋白质。 次要 所有车道: 山羊抗狂犬病IgG H&L(HRP)( ab97051型 )稀释度为1/100000 预测的带宽大小: 48千Da 观察到的频带大小: 55千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? 封闭和稀释缓冲液:5%NFDM/TBST。 -
所有车道: 1/2000稀释度的抗S-mad3(磷酸化S423+S425)抗体[EP823Y](ab52903) 车道1: (A) 未经处理的10µg HL-60细胞裂解物 车道2: (B) 经TGF处理的HL-60细胞在10µg下裂解。 预测的带宽大小: 48千Da 观察到的频带大小: 55千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? 其他波段位于: 45千Da。 我们不确定这些额外波段的身份。 -
所有车道: 抗S-mad3(磷酸化S423+S425)抗体[EP823Y](ab52903),稀释度为1/1000 车道1: TGF-全细胞裂解物加Smad3非磷酸肽治疗HL-60(人类急性早幼粒细胞白血病) 车道2: TGF-全细胞裂解物加Smad3(磷酸化S423/425)肽治疗HL-60(人类急性早幼粒细胞白血病) 3号车道: TGF-全细胞裂解物加Smad2非磷酸肽治疗HL-60(人类急性早幼粒细胞白血病) 车道4: TGF-全细胞裂解物加Smad2(磷酸化S465/467)肽治疗HL-60(人类急性早幼粒细胞白血病) 车道5: TGF-全细胞裂解物加Smad1非磷酸肽治疗HL-60(人类急性早幼粒细胞白血病) 车道6: TGF-全细胞裂解物加Smad1(磷酸化S463/465)肽治疗HL-60(人类急性早幼粒细胞白血病) 每条泳道10µg的裂解物/蛋白质。 次要 所有车道: 羊抗狂犬病IgG,(H+L),在1/2000稀释度下结合过氧化物酶 预测的带宽大小: 48千Da 观察到的频带大小: 55千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? 暴露时间: 3分钟 封闭和稀释缓冲液和浓度:5%NFDM/TBST。 -
所有车道: 抗S-mad3(磷酸化S423+S425)抗体[EP823Y](ab52903),稀释度为1/1000 车道1: 从未经处理的人A549细胞制备的裂解物 车道2: 未经处理的人A549细胞制备30分钟的裂解液 3号车道: TGF-ß1细胞以10ng/ml的速度制备30min的裂解液 车道4: 以20ng/ml的浓度从TNF-a细胞制备30min的裂解液 车道5: TGF-ß1和TNF-a细胞按上述剂量制备30min的裂解液 车道6: 空白DMEM介质 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 次要 所有车道: 驴抗狂犬病IgG H&L(HRP)( ab16284号 ) 使用ECL技术开发。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 48千Da 观察到的频带大小: 48千Da 暴露时间: 1小时
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环境性肠病(EE)十二指肠活检的代表性IHC显微照片显示p-SMAD3染色(ab52903) 只有 上皮(箭头所示)。 -
用免疫细胞化学/免疫荧光法(ICC/IF)对小鼠原代胚胎心外膜细胞中Smad3进行ab52903染色。 细胞用4%甲醛固定,用0.5%Triton X-100渗透,用PBS+1%BSA+10%山羊血清+0.1%Triton X-10020°C封闭1小时。 样品与一级抗体(1/100在PBS+1%BSA+10%山羊血清+0.1%Triton X-100中)在4°C下孵育16小时。 Alexa Fluor®488-共轭山羊抗兔IgG多克隆(1/200)用作二级抗体。 -
TGF-β1信号传导受损 国家发改委1 -沉默的MEF。 PML公司 +/+ 小鼠胚胎成纤维细胞(MEFs)转染 细胞毒性淋巴细胞 -siRNA(A和B)或 国家发改委1 -siRNAs(C&D),并用100 ng/ml TGF-β1诱导。 免疫荧光染色显示磷酸化的SMAD3(SMAD3-P,ab52903)在 细胞毒性淋巴细胞 -siRNA处理的MEF(B),而用 国家发改委1 -siRNA(D)。 -
用ab52903在1/100稀释度下对石蜡包埋人肝癌组织中Smad3进行免疫组织化学分析。 -
ab52903通过免疫细胞化学/免疫荧光对人TII肺细胞A549细胞中的Smad3(磷酸化S423+S425)进行染色。 用多聚甲醛固定细胞并用0.1%Triton x100渗透,然后用3%BSA在室温下封闭1小时。样品在4°C下与一级抗体(1/200:在3%BSA中1x PBST中)孵育24小时。 用TRITC结合的山羊多克隆兔IgG作为次级抗体,稀释度为1/200。 -
人Smad 3(磷酸化S423+S425)磷酸肽(泳道1)、Smad 3(磷酸化S423)磷酸肽(泳道2)、Smad 3(磷酸化S425)磷酸肽(泳道3)和Smad 3非磷酸肽(泳道4)的斑点印迹分析,以1/1000的稀释度用ab52903标记Smad 3(磷酸化S423+S425)。 山羊抗狂犬病IgG,(H+L),过氧化物酶偶联物( ab97051型 )以1/20000的稀释度作为二级抗体。 阻塞和稀释缓冲液:5%NFDM/TBST。
协议
数据表和文件
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数据表下载
工具书类 (507)
太阳B 等。 虹膜素通过促进成骨和拮抗TGF-β/Smad信号传导,在成骨不全的生长鼠模型中减少骨折。 J正交变换 38:175-189 (2023). 公共医学:36439629 戴Z 等。 周细胞在脑海绵体畸形发展中的作用。 i科学 25:105642 (2022). 公共医学:36465134 弗拉纳根DJ 等。 上皮转化生长因子β参与生长因子信号传导,以规避细胞凋亡,并以侵袭性特征驱动肠道肿瘤发生。 国家公社 13:7551 (2022). 公共医学:36477656 胡H 等。 瘢痕疙瘩患者血浆衍生外体hsa_circ_0020792通过调节miR-193a-5p和激活TGF-β1/Smad2/3信号传导促进正常皮肤成纤维细胞增殖、迁移和纤维化。 药物开发治疗 16:4223-4234 (2022). 公共医学:36524216 Shi L公司 等。 二甲双胍通过调节微环境成纤维细胞和巨噬细胞促进烧伤创面愈合。 单元格 11:不适用(2022年)。 公共医学:36552856