主要功能和细节
表达系统:HEK 293细胞 纯度:>=95%SDS-PAGE 内毒素水平:<0.005 Eu/µg 激活:是 适用于:MS、细胞培养、HPLC、SDS-PAGE、功能研究
描述
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产品名称 -
生物活性 完全生物活性取决于A549细胞中病毒感染的细胞病变效应的剂量依赖性降低。 预计起飞时间 50 这种效应为0.30 ng/ml,对应于3.33 x 10的比活性 6 单位/mg。 -
纯度 >= 95 %SDS-PAGE电泳。 >=95%HPLC。 -
内毒素水平 <0.005 Eu/微克 -
表达式系统 HEK 293细胞 -
加入 -
蛋白质长度 全长蛋白质 -
无动物 是的 -
无运营商 是的 -
自然 重组 -
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物种 人类 -
序列 QDPYVQEAENLKKYFNAGHSDVANDLFLGILKNWKEESDRKIMQSQIV SFYFKLFKNFKDDQSIQSKSVETIKEDMNVKFFNSNKKRDDFEKLTNYSV TDLNVQRKAIHELIQVMAELSPAAKTGKRSQMLFRGRASQ -
预测分子量 17千Da -
氨基酸 24至166 -
其他序列信息 全长蛋白质,包括N端带有单个甘氨酸的前肽
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规格
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应用程序 质谱法 细胞培养 高效液相色谱法 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 功能研究 -
表格 冻干的 -
其他注释 这种蛋白质在加脂和冷冻干燥之前经过过滤消毒。 所有等分和冻干步骤均在无菌环境中进行 -
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准备和储存
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稳定性和储存 在室温下装运。 在室温下储存。 pH值:6.00 成分:0.727%磷酸二氢钾、0.248%磷酸二氢钾、10.26%海藻糖 缓冲液冻干自。 该产品是一种活性蛋白,可能会在体内引起生物反应,请谨慎处理。 -
重组 用磷酸盐缓冲盐重组。 重组蛋白在-80℃下稳定12个月或4C下稳定1周。 冻干内容物可能呈现为半透明膜或白色粉末。 这种差异不会影响产品的质量。
一般信息
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替代名称 如果1 国际单项体育联合会 国际单项体育联合会
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功能 由特定抗原或有丝分裂原激活的淋巴细胞产生。 γ干扰素除了具有抗病毒活性外,还具有重要的免疫调节功能。 它是一种有效的巨噬细胞激活剂,对转化细胞具有抗增殖作用,并可增强I型干扰素的抗病毒和抗肿瘤作用。 -
组织特异性 主要由活化的T淋巴细胞释放。 -
参与疾病 在白种人中,IFNG的遗传变异与再生障碍性贫血(AA)的风险相关[MIM:609135]。 AA是一种罕见的疾病,其循环血细胞减少是由于骨髓中的干细胞池受损所致。 在大多数患者中,干细胞损伤是由自身免疫性发作引起的。 T淋巴细胞被内源性或外源性,以及最常见的未知抗原刺激激活,分泌细胞因子,包括IFN-γ,进而能够抑制造血。 -
序列相似性 属于II型(或γ)干扰素家族。 -
翻译后 修改 蛋白质水解过程产生C末端异质性,蛋白质在Gly-150、Met-157或Gly-161交替终止。 -
手机定位 保密。 -
UniProt提供的信息
图像
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野生型A549控制细胞或IP-10敲除A549细胞( 约266969 ),生长至40%汇合,用100 ng/ml的重组人干扰素γ蛋白(ab259377)和重组人TNF-α蛋白刺激( 约259410 )在10 ng/ml或对照组中静置16或32小时。 用重组人干扰素γ蛋白(ab259377)以200 ng/ml和LPS以50 ng/ml或溶媒对照刺激生长至40%融合的THP-1细胞24小时。 使用人IP-10 ELISA试剂盒,重复测量细胞培养上清液中IP-10(CXCL10)的浓度,并根据IP-10标准曲线进行插值( 公元173194年 ). 在未稀释的上清液中测量来自车辆对照样品的IP-10,并将处理过的样品稀释200倍。 绘制插值稀释因子校正值(平均值+/-SD,n=2)。 -
通过A549细胞中病毒感染的细胞病变效应的剂量依赖性降低来确定完全生物活性。 预计起飞时间 50 这种效应为0.30 ng/ml,对应于3.33 x 10的比活性 6 单位/mg。 -
ab259377的SDS-PAGE分析。 -
所有车道: 抗IP10抗体[EPR20764]( 约214668 )稀释度为1/1000 车道1: 野生型A549布雷菲尔丁A( 约120299 )-处理过的(5ug/ml,6h)细胞裂解物 车道2: 野生型A549 IFN-y(ab259377)(100 ng/ml,32 h)和TNF-α( 约259410 )(10纳克/毫升,32小时)和Brefeldin A( 约120299 )-处理过的(最后6h为5ug/ml)细胞裂解物 3号车道: IP10淘汰赛A549 Brefeldin A( 约120299 )-处理过的(5ug/ml,6h)细胞裂解物 车道4: IP10敲除物A549 IFN-y(ab259377)(100ng/ml,32h)和TNF-α( 约259410 )(10ng/ml,32h)和布雷费尔丁A( 约120299 )-处理过的(最后6h为5ug/ml)细胞裂解物 车道5: THP-1布雷费尔丁A( 约120299 )-处理过的(5ug/ml,6h)细胞裂解物 车道6: THP-1干扰素-y(ab259377)(200ng/ml,24h)和脂多糖(50ng/ml、24h)治疗24小时,Brefeldin A( 约120299 )-处理过的(最后6h为5ug/ml)细胞裂解物 每车道30µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 观察到的频带大小: 11千Da 为什么实际的频带大小与预测的不同? 1-6车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 约214668 在11 kDa时观察到。 红色-加载控制 约8245 (小鼠抗GAPDH抗体[6C5])。 约214668 western blot显示在野生型A549细胞中与IP10反应,在IP10敲除细胞系中观察到信号丢失 ab266971年 (敲除细胞裂解物 约256888 ). 对野生型和IP10敲除A549细胞裂解物进行SDS-PAGE分析。 用荧光蛋白印迹(TBS)封闭溶液封闭膜,然后用 约214668 和 约8245 (小鼠抗GAPDH抗体[6C5])在4°C下过夜,稀释率分别为1/1000和1/20000。 印迹与山羊抗兔IgG H&L(IRDye)孵育 ® 800CW)预吸收床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸收床( 约216772 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
所有车道: 抗PD-L1抗体[EPR19759]( ab213524号 )稀释度为1/1000 车道1: 野生型A549用100 ng/ml IFNγ(ab259377)处理48 h细胞裂解液 2号和6号车道: CD274敲除物A549用100 ng/ml IFNγ(ab259377)处理48小时细胞裂解物 3号车道: U-87 MG细胞裂解物 车道4: MCF7细胞裂解物 车道5: 野生型A549未经处理的细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 观察到的频带大小: 50千Da 为什么实际的频带大小与预测的不同? 1-6车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- ab213524号 在50 kDa时观察到。 红色-抗-GAPDH抗体[6C5]-负荷控制( 约8245 )在37 kDa时观察到。 ab213524号 western blot显示,在100 ng/ml IFNγ处理48 h细胞的野生型A549中与PD-L1反应。 在处理和未处理的敲除细胞系中均观察到信号丢失 约267054 (经处理和未经处理的敲除细胞裂解物 约256831 )使用了。 野生型A549用100 ng/ml IFNγ处理48 h,CD274敲除型A549使用100 ng/ml IFNγ治疗48 h细胞裂解物进行SDS-PAGE。 在室温下,将膜在0.1%的TBST和3%的脱脂奶粉中封闭1小时。 ab213524号 和抗-GAPDH抗体[6C5]-负荷控制( 约8245 )分别以1/1000和1/20000的稀释度在4°C下培养过夜。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸附床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸附床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
所有车道: 抗IP10抗体[EPR7850]( 约137018 )稀释1/500 车道1: 野生型A549 Brefeldin A( 约120299 )-处理过的(5ug/ml,6h)细胞裂解物 车道2: 野生型A549 IFN-y(ab259377)(100 ng/ml,32 h)和TNF-α( 约259410 )(10 ng/ml),持续32小时,以及Brefeldin A( 约120299 )-处理过的(最后6h为5ug/ml)细胞裂解物 3号车道: IP10淘汰赛A549 Brefeldin A( 约120299 )-处理过的(5ug/ml,6h)细胞裂解物 车道4: IP10敲除物A549 IFN-y(ab259377)(100 ng/ml,32 h)和TNF-α( ab259410磅 )(10 ng/ml),持续32小时,以及Brefeldin A( 约120299 )-处理过的(最后6h为5ug/ml)细胞裂解物 每车道30µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 观察到的频带大小: 11千Da 为什么实际的频带大小与预测的不同? 车道1-4: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 约137018 在11 kDa时观察到。 红色-加载控制 约8245 (小鼠抗GAPDH抗体[6C5])。 2018年12月13日 western blot显示与A549野生型细胞中的IP10反应,在IP10敲除细胞系中观察到信号丢失 约266969 (IP10敲除细胞裂解物 约256886 ). 对A549野生型和IP10敲除细胞裂解物进行SDS-PAGE分析。 用荧光蛋白印迹(TBS)封闭溶液封闭膜,然后用 约137018 和 约8245 (小鼠抗GAPDH抗体[6C5])在4°C下过夜,分别以1/500和1/20000稀释。 印迹与山羊抗兔IgG H&L(IRDye)孵育 ® 800CW)预吸收床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸收床( 约216772 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
纯度:100% 使用1260 Infinity II HPLC系统和DAD(安捷伦科技公司)和MabPac RP柱(3.0x100 mm,4µm,Thermo Scientific)记录光谱。 注入5µL纯化蛋白,并在3分钟内从80%的水:TFA(99.9:0.1 v/v)和20%的乙腈:水:TFA(90:9.9:0.1 v/v/v。 流速为0.5 mL/min,柱室温度为50°C。 -
ab259377的质谱分析(安捷伦科技)。 质谱显示了全长蛋白质和两个C末端截短型(-5 aa和-16 aa)。 文献报道了C末端的异质性(PAN,Yu‐Ching E.等人,《人类干扰素γ的结构表征》,《欧洲生物化学杂志》166.1(1987):145-149.)。 -
M+1.4 Da(计算,质量16833.6) 使用6545XT AdvanceBio LC/Q-TOF(安捷伦科技公司)和MabPac RP色谱柱(42.1x50 mm,4µm,Thermo Scientific)记录光谱。 注入5µL纯化蛋白,梯度在3分钟内从85%的水:FA(99.9:0.1 v/v)和15%的乙腈:FA。 流速为0.4 mL/min,柱室温度为60°C。 使用Bioconfirm软件(安捷伦科技公司)对数据进行分析和反褶积。
协议
数据表和文件
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SDS下载 -
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