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为了防止血小板在手术过程中活化,应避免强力机械力(例如快速移液、剧烈摇晃)。此外,可以使用方案中指示的血小板抑制剂,但也存在其他抑制剂。研究人员选择最适合其研究和实验目标的抑制剂。
分离血小板的应用示例如下:
Western blotting、流式细胞术、ELISA和免疫细胞化学/免疫荧光,以研究血小板内的细胞和信号传递过程。可以研究血小板在各种试剂刺激下的聚集和粘附,以及激活后颗粒成分的释放。
除非血小板用于组织培养实验,否则试剂无需无菌。除非另有说明,否则应在4°C下储存和使用所有缓冲液。
ACD缓冲液(酸-柠檬酸-挤压)
39 mM柠檬酸、75 mM柠檬酸钠、135 mM葡萄糖,pH 7.4。
使用前,预热至室温,必要时调整pH值。
CPD缓冲液(柠檬酸-磷酸-葡萄糖)
16 mM柠檬酸、90 mM柠檬酸钠、16 mM NaH2人事军官4,142 mM葡萄糖,pH 7.4。
血小板清洗缓冲液
10 mM柠檬酸钠、150 mM氯化钠、1 mM EDTA、1%(w/v)葡萄糖,pH 7.4。
HEP缓冲器(HEP指缓冲器中的HEPES)
140 mM NaCl、2.7 mM KCl、3.8 mM HEPES、5 mM EGTA、pH 7.4。
泰罗德缓冲器
134 mM氯化钠,12 mM氯化氢钠三,2.9 mM KCl,0.34 mM Na2高性能操作4,1 mM氯化镁2,10 mM HEPES,pH 7.4。
根据实验,在使用前将缓冲液加热至室温或保持在冰上。
2X血小板溶解缓冲液
2%NP40,30 mM HEPES,150 mM NaCl,2 mM EDTA,pH 7.4。
采血笔记
该程序的第一步包括获取全血并通过离心制备富含血小板的血浆(PRP)。离心条件可能变化很大(例如,从800 x g持续5分钟到100 x g持续20分钟),但分离效果始终良好。
验血师应将血液抽入Becton Dicinson Vacutainer®(含有ACD,黄色帽)或放入含有1/10体积CPD缓冲液的塑料注射器中。所需的血容量取决于实验。40–45毫升血液的平均体积为1–3 x 109血小板。血小板的数量可能会因抽取血液的个体而异。
图1。血液成分示意图