同时准备Sepharose珠子。如果使用单克隆抗体,请选择蛋白G-偶联Sepharose珠。如果使用多克隆抗体,通常适合使用蛋白a偶联的Sepharose珠(请参阅下表“选择蛋白珠”)。如果珠子呈粉末状,则在1 mL 0.1 M PBS中孵育100 mg珠子,冲洗1 h,使其膨胀,然后离心,去除上清液并丢弃。
添加1 mL PBS 0.1%BSA,使用Eppendorf旋转器混合1 h,在PBS中冲洗两次。去除上清液,并添加400μL蛋白酶抑制剂制成的缓冲液(可以与裂解缓冲液相同)。泥浆现在可以使用了。可在4°C下储存几天;长时间使用0.02%叠氮化物将珠子保存在PBS中(使用当天广泛冲洗珠子,并在新鲜的裂解缓冲液中配制)。你也可以买一些预先织好的珠子作为浆料使用。