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对提供抗体的不同形式和使用的纯化方法的描述。
下载我们的抗体基础综合指南。
2022年5月11日更新。
如果抗体是以未净化的形式收到的,您可能需要在将其用于实验装置之前对其进行净化。抗体纯化方法从非常粗糙到高度特异,必要的纯化水平取决于您对抗体的预期应用。这里我们简要概述了最常见的未纯化抗体形式和抗体纯化方法。
抗血清
多克隆抗体通常以相对未纯化的形式存在,如“血清”或“抗血清”。抗血清是指含有感兴趣抗体(以及其他血清蛋白和抗体)的免疫宿主的血清。
除了识别目标抗原的抗体外,抗血清还含有对各种非目标抗原产生抗体的抗体,这些抗体在免疫学分析中有时会发生非特异性反应。因此,通常纯化原始抗血清,以消除血清蛋白并富集与目标抗原特异反应的免疫球蛋白部分。
可以使用杂交瘤细胞培养物(细胞因子分泌细胞)产生单克隆抗体,并作为杂交瘤组织培养上清液收集。有关杂交瘤如何产生的更多详细信息,请参阅单克隆抗体生产。
腹水是历史性的体内抗体产生方法,目前仅在特殊情况下使用,即当抗体不能由在体外技术。
在这种方法中,单克隆抗体是通过在小鼠(或大鼠)的腹腔内生长杂交瘤细胞产生的。杂交瘤细胞被注射到宿主的腹部,在那里它们繁殖并产生液体(腹水),然后可以收获。这种腹水含有高抗体浓度,通常比杂交瘤细胞培养提供更高的抗体产量。然而,腹水还包括许多来自宿主的非特异性免疫球蛋白。
未净化抗体浓度
未经纯化的抗体制剂在特定抗体浓度上存在显著差异。如果给定未纯化抗体制剂的特定抗体浓度未知,可以参考以下“典型范围”作为估计指南:
抗体纯化是通过从血清(用于多克隆抗体)、腹水或杂交瘤细胞系的细胞培养上清液(用于单克隆抗体)中选择性富集或特异性提取抗体来实现的。下面我们描述了多克隆抗血清或单克隆腹水液/组织培养上清液的典型纯化方法。
蛋白质A/G纯化
蛋白质A和蛋白质G(用金黄色葡萄球菌或链球菌是抗体纯化中常用的抗体结合蛋白。蛋白质A/G纯化基于蛋白质A或G与免疫球蛋白F的高亲和力c(c)域名。蛋白质A/G纯化可从原始抗血清中清除大量血清蛋白质。然而,它并不能消除非特异性免疫球蛋白部分。因此,蛋白a/G纯化抗血清可能仍具有一些不良的交叉反应性。
了解更多关于蛋白质A、蛋白质G和其他蛋白质的抗体结合特性。
亲和力纯化
亲和纯化使用关联标记该技术基于蛋白质和与色谱基质耦合的特定配体之间的可逆相互作用来分离蛋白质。
抗原亲和纯化利用特异性免疫球蛋白组分对其产生的免疫抗原的亲和力。这个纯化方法消除了大部分非特异性免疫球蛋白级分,同时富集了与靶抗原特异性反应的免疫球蛋白级分。由此产生的亲和纯化免疫球蛋白主要含有所需特异性的免疫球蛋白。
来自Abcam的抗体纯化产品列表。
多克隆抗体有时预吸附的这意味着它们已被其他蛋白质或不同物种的血清吸附,以消除任何可能发生交叉反应的抗体。含有二级抗体的溶液通过含有潜在交叉反应物种的固定化血清蛋白的柱基质。非特异性二级抗体保留在色谱柱中,而高度特异性的二级抗体则通过色谱柱。所得纯化抗体的交叉反应性应显著降低。
返回抗体指南。