Your browser does not have JavaScript enabled and some parts of this website will not work without it.
为了获得Abcam网站的最佳体验,请升级到现代浏览器,例如谷歌浏览器
看看我们的BETA网站,看看我们到目前为止做了什么。
搜索和浏览所选产品
通过通常的分销商购买
如果不正确,请在下面的框中输入您所在的国家/地区,以查看与您所在国家/地区相关的站点信息。
欢迎光临
没有帐户?
定制产品和商业合作伙伴关系,加速您的诊断和治疗计划。
定制产品
与我们合作
获得针对任何研究障碍的建议和支持
查看支撑中心
你的实验一步一步地进行
查看协议
完整的事件细分,包括摘要、演讲者、注册等
查看全局事件日历
查看所有路径
查看所有交互式路径
通过定量DNA含量进行细胞周期分析是流式细胞术最早的应用之一。
哺乳动物、酵母、植物或细菌细胞的DNA可以被各种DNA结合染料染色。这些染料的前提是它们是化学计量的,即它们与细胞中存在的DNA数量成比例地结合。
这样,处于S期的细胞将比G1期的细胞拥有更多的DNA。它们会按比例吸收更多的染料,发出更明亮的荧光,直到DNA含量加倍。G2细胞的亮度大约是G1细胞的两倍。
DNA结合染料包括碘化丙啶(PI),7-氨基放线菌素-D(7-AAD),赫斯特33342,33258和S769121号,TO-PRO-3,4'6'-二氨基-2-苯基吲哚(DAPI),DRAQ5™和DRAQ7™.
在大多数情况下,细胞必须固定或渗透,以允许染料进入,否则活性细胞会主动抽出染料。为了固定,通常使用酒精或醛。酒精是一种脱水固定剂,也能渗透。这将便于染料接触DNA,并提供良好的轮廓(低变异系数,CV)。缺点是它经常与荧光蛋白和一些表面标记物不相容。
如果需要同时检查荧光蛋白或表面标记物,则使用醛(交联)固定剂,通常是多聚甲醛更合适。这可能导致质量较差(CV较高),但允许同时检测其他荧光色素和膜结合蛋白。然而,多聚甲醛通常不会渗透细胞膜,因此需要进一步的样品处理。
使用固定细胞,可以在实验结束时对样品进行积累、染色和分析。酒精固定细胞在4°C下稳定数周。醛固定细胞可稳定2至3天。
另一种允许DNA染料进入细胞的方法是用洗涤剂使其渗透。这可以是Triton®声波风廓线仪X-100(0.1%)或NP40(0.1%”)。皂苷不是DNA分析的推荐渗透试剂,因为它不能很好地渗透核膜。渗透细胞的储存时间不能与固定细胞一样长,应在数小时内进行处理。
通常还需要结合固定(多聚甲醛)和渗透(Triton X-100)进行细胞内染色。也有其他方法,例如使用柠檬酸缓冲液(与洗涤剂结合使用),尽管这些方法并不普遍。还有一些染料会进入活细胞并与DNA定量结合,包括Hoechst 33342、DRAQ5™(ab108410)和DyeCycle染料。
使用的方法取决于实验和所需的信息。为了便于设置,我们建议使用流式细胞仪的DNA含量PI染色碘化丙锭流式细胞术试剂盒否则,我们建议使用此协议。
运行细胞仪时,应显示以下曲线图:向前和侧面散射以识别细胞脉冲形状分析,以识别团块和双峰(这可以是脉冲面积与脉冲宽度的关系,也可以是脉冲面积与脉冲高度的关系,具体取决于细胞仪)前向散射与PI信号;PI直方图。
为了进行分析,首先使用脉冲宽度与脉冲面积对单个细胞群进行选通。然后将此门应用于散点图并清除明显的碎片。组合这些门并应用于PI直方图。
有两种方法可以量化每个细胞周期阶段的细胞百分比:
流式细胞术DNA分析共识(Book)。M.G.Ormerod、B.Tribukait、Walter Giaretti。
根据程序编辑的方案由以下人员提供:Derek Davies,英国癌症研究所伦敦研究所FACS实验室英国伦敦林肯酒店44号。
观看我们易于遵循的视频协议。