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western印迹缓冲液和储备溶液的配方。
下载完整的western blot指南。
溶血缓冲液
必须保护10%脱氧胆酸钠储备溶液(5 g到50 mL)免受光照。
三氯化氢
20 mM Tris-HCl,pH值7.51 mM EGTA(钙2+ 螯合剂)
加载缓冲器/Laemmli 2X缓冲器
运行缓冲液(三甘氨酸/SDS)
转移缓冲液(湿)
转移缓冲液(半干)
阻塞缓冲器
所有程序都必须在通风橱下进行。
避免煮沸时体积发生较大变化;在容器上盖上一个松散的盖子以防止蒸发。
对于1 L:24 g Tris碱(配方重量:121.1 g)88克氯化钠(配方重量:58.4克)溶于900 mL蒸馏水中pH至7.6,使用12 N HCl添加蒸馏水至最终体积为1 L
对于1x溶液,将1份10x溶液与9份蒸馏水混合,并再次将pH调节至7.6。1x溶液的最终摩尔浓度为20 mM Tris和150 mM NaCl。
Tris缓冲液的替代配方结合了Tris碱和Tris-HCl。这避免了单独中和Tris碱溶液所需的大量潜在危险盐酸。
对于1 L:24 g Tris-HCl(配方重量:157.6 g)5.6 g Tris碱(配方重量:121.1 g)88克氯化钠(配方重量:58.4克)溶于900毫升蒸馏水中
对于1 L:100毫升TBS 10x900毫升蒸馏水1毫升吐温20
15克甘氨酸1克十二烷基硫酸钠10 mL吐温20
这需要在通风橱下进行。
对于100 mL:20 mL十二烷基硫酸钠10%12.5 mL Tris HCl,pH 6.8,0.5 M67.5 mL蒸馏水在通风柜下添加0.8 mLβ-巯基乙醇
10 mM HEPES1.5 mM氯化镁210 mM氯化钾0.5 DTT0.05%NP-40(或0.05%Igepal或Tergitol)pH值7.9
准备250 mL缓冲液A:HEPES:1 M=238.3 g/L,因此10 mM=0.59 g/250 mL氯化镁2:1 M=203.3 g/L,因此1.5 mM=0.076 g/250 mLKCl:1 M=74.5 g/L,因此10 mM=0.187 g/250 mLDTT:1 M=154.2 g/L,因此0.5 mM=0.019 g/250 mLNP-40:0.05%
5 mM水电站1.5 mM氯化镁0.2 mM乙二胺四乙酸二乙酯0.5毫米DTT26%甘油(v/v)pH 7.9
准备250 mL缓冲液B:HEPES:1 M=238.3 g/L,因此5 mM=0.295 g/250 mL氯化镁:1 M=203.3 g/L,因此1.5 mM=0.076 g/250 mLEDTA:1 M=372.2 g/L,因此0.2 mM=0.0186 g/250 mLDTT:1 M=154.2 g/L,因此0.5 mM=0.019 g/250 mL26%甘油(v/v)=65 mL
对于1 L:250µL Triton®声波风廓线仪X-1001升TBS pH值7.6-7.8
对于400 mL:6.4毫升高2O(运行)2 (GPR=30%w/w)393.6 mL TBS pH 7.6–7.8
以1:10稀释度使用的一级抗体为例。
对于1 mL:100µL一级抗体10毫克牛血清白蛋白900µL TBS pH值7.6–7.8
以ABC为例,每种成分的稀释度为1:100。
对于1 mL:10µL链霉亲和素10µL HRP(或AP)-生物素980µL TBS pH值7.6–7.8
3.03克钠2一氧化碳三6.0克NaHCO三(1升蒸馏水)pH 9.6PBS:1.16克钠2高性能操作40.1克氯化钾0.1克K三人事军官44 g氯化钠(500 mL蒸馏水)pH 7.4
协议由Abcam“AS-IS”根据Abcam实验室使用Abcam试剂和产品的实验提供;在这些条件之外使用协议的结果可能会有所不同。