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抗体有时会与抗原以外的蛋白质发生非特异性结合。这通常在多克隆抗体中更常见,但在单克隆抗体中也可能发生。
为了确定哪一条带或染色是特异性的,可以进行免疫肽阻断实验。在进行染色方案之前,抗体被中和(与过量的对应于抗体识别的表位的肽一起孵育)。与封闭肽结合的抗体不再能与蛋白质或细胞中的表位结合。
然后将中和抗体与单独使用的抗体并排使用,并将结果进行比较。通过比较封闭抗体和单独抗体的染色,您可以看到哪种染色是特定的;用中和抗体进行的western印迹或免疫染色将不会出现这种染色。
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方法
如果多肽/抗原竞争导致western blot中有多条带消失,则这些带包含抗原决定簇,可能是完整抗原的片段或包含抗原的复合物。