主要功能和细节
重组生产(无动物),实现高批次一致性和长期供应安全 兔单克隆[EPR9518]到PODXL 适用于:流式细胞周期(内部)、WB、IHC-P、ICC/IF 敲除已验证 反应对象:人类
相关共轭物和制剂
概述
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产品名称 -
描述 兔单克隆抗体[EPR9518]对PODXL的作用 -
寄主物种 兔子 -
经过测试的应用程序 -
物种反应性 与以下物质反应: 人类 -
免疫原 人PODXL aa 300-500内的重组片段。 确切的顺序是专有的。 数据库链接: O00592号 -
阳性对照 WB:Raji、HeLa、HCT116和HAP1全细胞裂解液。 人胎儿肾脏裂解物。 IHC-P:人体肾组织。 人肝细胞癌、乳腺癌和子宫内膜癌组织。 人脑胶质瘤组织。 ICC/IF:HeLa细胞。 流式细胞仪(内部):HeLa细胞。
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一般注意事项
属性
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表格 液体 -
储存说明 在4°C下装运。 短期储存在+4°C下(1-2周)。 交付时,等分。 储存于-20°C。 避免冷冻/解冻循环。 -
存储缓冲区 防腐剂:0.01%叠氮化钠 成分:0.05%BSA、40%甘油、PBS -
正在加载浓度信息。。。 -
纯度 蛋白质A纯化 -
克隆性 单克隆 -
克隆编号 EPR9518 -
同位素 免疫球蛋白G -
研究领域
相关产品
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替代版本 -
同位素控制 -
KO细胞系 -
KO细胞裂解物 -
阳性对照 -
重组蛋白
应用
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目标
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功能 参与粘附和细胞形态以及癌症进展的调节。 作为一种抗粘附分子,通过电荷排斥在足细胞相邻足突之间维持开放的过滤途径。 作为前粘附分子,增强细胞对固定化配体的粘附,以整合素依赖的方式增加迁移率和细胞间接触。 诱导顶端肌动蛋白依赖性微绒毛的形成。 参与顶端前质膜亚结构域的形成,以在肾小管形成过程中建立初始上皮极化和顶端腔的形成。 通过与肌动蛋白结合蛋白EZR的相互作用诱导细胞迁移和侵袭,在癌症的发展和侵袭性中发挥作用。 影响EZR依赖的信号事件,导致癌细胞中MAPK和PI3K通路的活性增加。 -
组织特异性 肾小球上皮细胞(足细胞)。 -
序列相似性 属于podocalyxin家族。 -
域 胞外结构域的富含O-聚糖的结构域和细胞质尾部的C-末端PDZ结合基序(DTHL)都携带顶端分选信号。 细胞质结构域是顶膜靶向和肾小管形成所必需的。 细胞质C末端PDZ结合基序(DTHL)对于与SLC9A3R1的相互作用以及将SLC9A3R1靶向顶端细胞膜至关重要。 细胞外结构域是微绒毛形成所必需的(根据相似性)。 大的高阴离子细胞外结构域允许在相邻足细胞足突之间维持开放的过滤途径。 -
翻译后 修改 N-和O-键糖基化。 唾液糖蛋白。 -
手机定位 顶端细胞膜。 细胞投射,跛足。 细胞投射,丝状体。 细胞突起,皱褶。 细胞投射,微绒毛。 薄膜筏。 膜。 在单个附着的上皮细胞中,其局限于游离质膜上的顶端前极,而其他顶端和基底外侧蛋白尚未极化。 在上皮极化过程中,与SLC9A3R2在顶端质膜上结肠癌。 与SLC9A3R1在跨高尔基网络(瞬时)和顶端质膜上进行结肠酸化。 它与膜筏的结合是暂时的。 在微绒毛形成的顶端细胞表面,用肌动蛋白丝、EZR和SLC9A3R1以点状模式进行结肠化。在肾小球上皮细胞的顶端细胞膜上,用EZR与SLC9A3R2进行结肠化(根据相似性)。 形成颗粒状、间断的图案,形成斑块,优先采用极性分布,位于细胞的迁移极点或沿丝状体末端形成簇状,与内皮细胞接触。 用跛足动物的膜下肌动蛋白进行配色,尤其与褶边有关。 在细胞突起处用管状蛋白结球。 与ITGB1同步。 在顶端表面生成和发光过程中,与PARD3、PRKCI、EXOC5、OCLN、RAB11A和RAB8A在顶端膜起始位点(AMI)进行结肠酸化(通过相似性)。 -
UniProt提供的信息 -
数据库链接 -
表格 选择性剪接产生2种亚型。 -
替代名称 GCTM-2抗原抗体 Gp2抗体 Gp200抗体
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图像
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流式细胞术重叠直方图显示野生型Hela(绿线)和PODXL敲除型Hela用ab150358染色(红线)。 用80%甲醇固定细胞(5分钟),然后用0.1%PBS-Triton X-100渗透15分钟。然后将细胞培养在含有10%正常山羊血清的1x PBS中,以阻止非特异性蛋白-蛋白质相互作用,然后用抗体(ab150358)(1x 10 6 100μl,1.0μg/ml(1/2250)),22°C,30分钟。 将二级抗体山羊抗狂犬病IgG H&L(Alexa Fluor®488)预吸附液在1/4000的温度下于22°C孵育30分钟 同位素对照抗体重组兔IgG,单克隆[EPR25A]-同位素对照在与一级抗体相同的浓度和条件下使用(野生型Hela-黑线,PODXL敲除Hela-灰线)。 未标记样本也用作对照(为了简单起见,未显示此行)。 使用50 mW蓝光激光器(488nm)和525/40带通滤波器采集了超过5000个事件。 -
所有车道: 稀释1/10000的抗-PODXL抗体[EPR9518](ab150358) 车道1: 野生型HeLa细胞裂解物 车道2: PODXL敲除HeLa细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 58千Da 观察到的频带大小: 160千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? 1-2车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色-在160 kDa下观察到ab150358。 红色-抗-GAPDH抗体[6C5]-负荷控制( 约8245 )在37 kDa时观察到。 western blot显示ab150358与野生型HeLa细胞中的PODXL反应。 敲除细胞系时观察到信号丢失 约264984 (敲除细胞裂解物 ab257210型 )已使用。 对野生型HeLa和PODXL敲除的HeLa细胞裂解物进行SDS-PAGE。 在室温下,将膜在0.1%的TBST和3%的脱脂奶粉中封闭1小时。 ab150358和抗-GAPDH抗体[6C5]-负荷控制( 约8245 )在4°C下过夜,分别以1/10000和1/20000稀释。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸附床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸附床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
人肾组织切片免疫组织化学(福尔马林/PFA-固定石蜡包埋切片)分析,以1/1000稀释度(0.44μg/ml)的纯化ab150358标记PODXL。 热介导抗原检索使用 约93684 (Tris/EDTA缓冲液,pH 9.0)。 组织用苏木精复染。 ImmunoHistoProbe一步法HRP聚合物(即用型)是二级抗体。 以PBS代替一抗作为阴性对照。 -
所有车道: 稀释1/1000的抗-PODXL抗体[EPR9518](ab150358) 车道1: 野生型HCT116细胞裂解物 车道2: PODXL敲除HCT116细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 58千Da 观察到的频带大小: 200千Da 为什么实际的频带大小与预测的不同? 1-2车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色-在200 kDa下观察到ab150358。 红色-抗α-管蛋白抗体[DM1A]-负载控制( 约7291 )在50 kDa时观察到。 western blot显示ab150358与野生型HCT116细胞中的PODXL反应。 敲除细胞系时观察到信号丢失 约266887 (敲除细胞裂解物 ab257211号 )已使用。 对野生型HCT116和PODXL敲除HCT116细胞裂解物进行SDS-PAGE分析。 在室温下,将膜在0.1%的TBST和3%的脱脂奶粉中封闭1小时。 ab150358和抗α-微管蛋白抗体[DM1A]-负载对照( 约7291 )分别以1/1000稀释度和1/2000稀释度在4°C下过夜。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸附床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸附床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
所有车道: 稀释1/1000的抗-PODXL抗体[EPR9518](ab150358) 车道1: 野生型HAP1全细胞裂解物 车道2: PODXL敲除HAP1全细胞裂解物 3号车道: Raji全细胞裂解物 车道4: HeLa全细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 预测的带宽大小: 58千Da 1-4车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色-在160 kDa下观察到ab150358。 红色-装载控制, 约9484 ,在37 kDa下观察到。 ab150358在野生型细胞中与PODXL特异性反应,因为PODXL敲除细胞中信号丢失。 对野生型和PODXL敲除样品进行SDS-PAGE分析。 Ab150358和 约9484 (小鼠抗GAPDH负荷对照)分别在4°C下以1/1000稀释度和1/20000稀释度孵育过夜。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸收床 ab216773号 和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸收床 约216776 二级抗体在成像前在室温下以1/20000稀释1小时。 -
1/10000稀释(纯化)的抗-PODXL抗体[EPR9518](ab150358)+15µg的人胎肾裂解物 次要 抗狂犬病IgG(HRP),针对1/2000稀释度的非还原型IgG 预测的带宽大小: 58千Da 观察到的频带大小: 165千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? 封闭和稀释缓冲液:5%NFDM/TBST。 -
用纯化的ab150358标记PODXL(1/500)的HeLa(人宫颈腺癌)细胞的免疫细胞化学/免疫荧光分析。 细胞用100%甲醇固定。 Alexa Fluor公司 ® 488-结合山羊抗兔IgG( 约150077 )以1/1000稀释液作为二级抗体。 细胞核与DAPI染色(蓝色)。 仅二级对照:用PBS代替一级抗体作为阴性对照。 -
所有车道: 1/1000稀释(未净化)的抗-PODXL抗体[EPR9518](ab150358) 车道1: Raji裂解物 车道2: HeLa裂解物 3号车道: 人胎肾裂解物 每条泳道10µg的裂解物/蛋白质。 次要 所有车道: HRP标记山羊抗兔抗体(稀释度为1/2000) 预测的带宽大小: 58千Da 观察到的频带大小: 165千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? -
石蜡包埋人肾组织的免疫组织化学分析,用稀释度为1/100的未纯化ab150358抗体标记PODXL。 在开始IHC染色方案之前进行热介导的抗原回收。 -
HeLa(人宫颈腺癌)细胞的细胞内流式细胞术分析,用纯化的ab150358标记PODXL,稀释度为1/250(红色)。 二级抗体为山羊抗兔IgG(Alexa Fluor ® 488),稀释度为1/2000。 使用兔单克隆IgG(黑色)作为同型对照,使用未与一级抗体和二级抗体孵育的细胞(蓝色)作为未标记对照。 -
用免疫组织化学法(福尔马林/PFA-固定石蜡包埋切片)在人肾组织切片中未经纯化的ab150358染色PODXL。 用甲醛固定组织样品,切成20微米薄片,用0.05%吐温-20渗透,并在25°C下封闭60分钟。 抗原回收是通过热调解进行的。 将样品与稀释度为1/250的初级抗体在25°C下孵育1小时。 一种Alexa Fluor ® 488-结合驴抗兔多克隆(1/1000)作为二级抗体,稀释度为1/1200。 -
用未纯化的ab150358对石蜡包埋的人肝癌血管进行免疫组织化学分析,显示阳性染色。 在开始IHC染色方案之前进行热介导的抗原回收。 -
用未纯化的ab150358对石蜡包埋的人乳腺癌组织进行免疫组织化学分析,显示阳性染色。 在开始IHC染色方案之前进行热介导的抗原回收。 -
用未纯化的ab150358对石蜡包埋的人子宫内膜癌组织进行免疫组织化学分析,显示阳性染色。 在开始IHC染色方案之前,进行热介导抗原回收。 -
未纯化ab150358显示石蜡包埋人骨骼肌组织的免疫组织化学分析 阴性染色 在开始IHC染色方案之前进行热介导抗原回收。 -
用未纯化的ab150358对石蜡包埋的正常人肾组织进行免疫组织化学分析,显示阳性染色。 在开始IHC染色方案之前进行热介导的抗原回收。 -
用未纯化的ab150358对石蜡包埋的人脑胶质瘤组织进行免疫组织化学分析,显示阳性染色。 在开始IHC染色方案之前,进行热介导抗原回收。
数据表和文件
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SDS下载 -
数据表下载
工具书类 (12)
长野H 等。 刀豆毒素转录后敲除诱导人脑微血管内皮细胞ABCB1/MDR1的表达和活性。 药物科学杂志 111:1812-1819 (2022). 公共医学:35182544 于X 等。 通过在单侧肾切除小鼠的肾包膜下植入hPSC衍生肾祖细胞来实现肾单位成熟。 当前干细胞治疗 不适用:不适用(2022年)。 公共医学:35984016 Dhondt B公司 等。 通过基于密度的尿液分离,揭示前列腺癌细胞外囊泡的蛋白质组学景观。 J细胞外囊泡 9:1736935(2020)。 公共医学:32284825 翟S 等。 IL-17通过促进足细胞损伤加重原发性肾病综合征儿童的肾损伤。 实验治疗学 20:409-417 (2020). 公共医学:32537005 伊藤S 等。 人脑微血管内皮细胞体外内吞细胞表面蛋白的鉴定。 药剂学 12:不适用(2020年)。 公共医学:32585920