主要功能和细节
重组生产(无动物),具有高批次一致性和长期供应安全性 兔单克隆[E379]抗NF-kB p65 适用人群:WB、IHC-P、ICC/IF、IP 敲除已验证 反应对象:老鼠、人类
相关共轭物和制剂
概述
-
产品名称 -
描述 兔单克隆[E379]抗NF-kB p65 -
寄主物种 兔子 -
特异性 该抗体识别NF-kB p65。 对于WB,该抗体不适合检测小鼠组织裂解物中的NF-KB p65。 PMID:18036230报道,通过脂多糖治疗,NF-KB p65的表达增加。 尽管一些论文支持NF-κB p65在小鼠组织中的表达(PMID:21479220和20008488),但该抗体无法检测到这些小鼠组织中感兴趣的条带。 -
经过测试的应用程序 -
物种反应性 与以下物质反应: 老鼠,人类 -
免疫原 人NF-kB p65 aa 500内的合成肽到达C末端(C末端)。 确切的顺序是专有的。 数据库链接: Q04206问题 -
阳性对照 WB:野生型HAP1细胞裂解物。 HeLa、MEF、RAW 264.7和A431细胞裂解物; 人胎脑、肾和肺组织裂解物。 IHC-P:人类乳腺癌和结肠癌组织。 小鼠结肠组织。 小鼠脾脏、人扁桃体和人前列腺增生组织。 ICC/IF:HeLa和NIH/3T3细胞。 IP:HeLa全细胞裂解液中的NF-kB p65 IP( 约150035 ).
-
一般注意事项
属性
-
表格 液体 -
储存说明 在4°C下装运。 短期储存在+4°C下(1-2周)。 交付时,等分。 储存于-20°C。 避免冷冻/解冻循环。 -
存储缓冲区 pH值:7.20 防腐剂:0.01%叠氮化钠 成分:PBS、40%甘油(甘油、甘油)、0.21%牛血清白蛋白 -
浓度信息加载。。。 -
纯度 蛋白质A纯化 -
克隆性 单克隆的 -
克隆编号 E379型 -
同位素 免疫球蛋白G -
研究领域
相关产品
-
替代版本 -
检测试剂盒 -
兼容的辅助设备 -
同种型对照 -
阳性对照 -
重组蛋白 -
相关产品
应用
|
||
|
||
|
||
|
|
|
|
|
目标
-
功能 NF-kappa-B是一种多效性转录因子,存在于几乎所有细胞类型中,参与炎症、免疫、分化、细胞生长、肿瘤发生和凋亡等多种生物过程。 NF-kappa-B是由类Rel结构域蛋白RELA/p65、RELB、NFKB1/p105、NFKB1/p50、Rel和NFKB2/p52形成的同二聚体或异二聚体复合物,其中异二聚物p65-p50复合物最为丰富。 二聚体结合在其靶基因DNA中的kappa-B位点,并且单个二聚体对不同的kappa-B位点有不同的偏好,它们可以以不同的亲和力和特异性结合。 不同的二聚体组合分别作为转录激活物或阻遏物。 NF-kappa-B受翻译后修饰和亚细胞区室化的各种机制以及与其他辅因子或辅压因子的相互作用控制。 NF-kappa-B复合物被保存在细胞质中,处于与NF-kampa-B抑制剂家族成员复合的非活性状态。 在传统的激活途径中,I-kappa-B激酶(IKK)对不同的激活物进行磷酸化,随后降解,从而释放转移到细胞核的活性NF-κB复合物。 NF-kappa-B异二聚体p65-p50和p65-c-Rel复合物是转录激活物。 NF-kappa-B p65-p65复合物似乎参与了侵袭素介导的IL-8表达激活。 I-κB对NF-κB的抑制作用主要通过与p65的相互作用发挥。 p65显示一个弱的DNA结合位点,该位点可能直接参与NF-kappa-B复合体中的DNA结合。 通过与DDX1的关联与NF-kappa-B启动子区域的染色质关联。 -
序列相似性 包含1个RHD(Rel-like)域。 -
域 9aaTAD基序是存在于大量酵母和动物转录因子中的反式激活域。 -
翻译后 修改 泛素化,导致其蛋白酶体降解。 NF-kappa-B响应终止需要降解。 SETD6在Lys-310处单甲基化。 Lys-310的单甲基化被EHMT1的ANK重复序列识别,并促进靶基因受抑制染色质的形成,导致NF-kappa-B转录因子活性的下调。 Ser-311的磷酸化破坏了与EHMT1的相互作用,但未阻止Lys-310的单甲基化,并减轻了靶基因的抑制。 Ser-311的磷酸化破坏与EHMT1的相互作用并促进转录因子活性(通过相似性)。 Ser-536上的磷酸化刺激Lys-310上的乙酰化以及与CBP的相互作用; 磷酸化和乙酰化形式显示出增强的转录活性。 可逆乙酰化; 乙酰化似乎由CBP介导,而脱乙酰化则由HDAC3介导。 Lys-122处的乙酰化增强了DNA结合并损害了与NFKBIA的结合。在不影响DNA结合和NFKBIA结合的情况下,Lys-310处的乙酰基化是完整转录活性所必需的。 乙酰化还可以降低DNA结合并导致核出口。 与BRMS1的相互作用促进“Lys-310”的脱乙酰化。 -
手机定位 核心。 细胞质。 核,但在细胞质中也发现了与抑制剂(I-kappa-B)复合的非活性形式。 TNF-α诱导后在细胞核中用RELA染色。 -
UniProt提供的信息 -
数据库链接 -
替代名称 禽网状内皮增生病病毒(vrel)癌基因同源物A抗体 MGC131774抗体 NF-κB p65delta3抗体
查看所有内容
图像
-
车道1: 野生型HAP1细胞裂解物(20µg) 车道2: NF-kB p65敲除HAP1细胞裂解物(20µg) 3号车道: HeLa细胞裂解物(20µg) 车道4: A431细胞裂解物(20µg) 1-4车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色-在70 kDa下观察到ab32536。 红色- 约8245 37 kDa时观察到的负载控制。 在野生型HAP1细胞中,未纯化的ab32536与NF-kB p65特异性反应。 使用NF-kB p65敲除样品时未观察到条带。 对野生型和NF-kB p65敲除样品进行SDS-PAGE分析。 ab32536(NF-kB p65)和 约8245 (GAPDH的负荷控制)分别稀释至1/50 000和1/2000,并在4°C下培养过夜。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸附床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸附床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1/10000稀释1h。 -
用1:100稀释度纯化的ab32536标记NF-kB p65的HeLa(人宫颈腺癌上皮细胞)细胞的免疫细胞化学/免疫荧光分析。 细胞固定在100%甲醇中。 约150077 山羊抗兔IgG(Alexa Fluor ® 488)作为二级抗体,稀释度为1:1000。 DAPI核复染。 用PBS代替一级抗体作为二级抗体对照。 -
用ab32536在1/5000(0.098 ug/ml)稀释后进行石蜡包埋小鼠脾组织标记NF-kB p65的免疫组织化学分析,然后使用现成的LeicaDS9800(Bond™Polymer Refine Detection)。 小鼠脾脏细胞质染色。 该切片在室温下与ab32536孵育30分钟。 免疫染色在徕卡生物系统BOND上进行 ® RX仪器。 苏木精复染。 仅二级抗体对照:二级抗体是现成的LeicaDS9800(Bond™Polymer Refine Detection)。 用柠檬酸缓冲液(pH 6.0,表位检索溶液1)进行20分钟的热介导抗原检索 -
所有车道: 稀释1/1000的抗-NF-kB p65抗体[E379](ab32536) 车道1: 人胎儿脑裂解物 车道2: 人胎肾裂解物 3号车道: 人胎肺裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 次要 所有车道: 山羊抗狂犬病IgG H&L(HRP)( ab97051型 )稀释1/20000 预测的带宽大小: 65千帕 观察到的频带大小: 65千帕 阻塞/稀释缓冲液和浓度:5%NFDM/TBST 暴露时间 :1号车道37秒,2号和3号车道3秒 正常大脑可能表达低水平的p65(PMID:21479220) -
4%对甲醛固定、0.1%TritonX-100渗透NIH/3T3细胞的免疫荧光分析,在1/100(4.89 ug/ml)稀释度下用ab32536标记NF-kB p65,然后 约150081 山羊抗兔IgG H&L(Alexa Fluor®488)以1/1000稀释度预吸附抗体(绿色)。 共聚焦图像显示,用TNF-α(50 ng/ml)处理20分钟后,NIH/3T3细胞的信号从细胞质转移到细胞核。 约195889年 使用抗α-Tubulin小鼠单克隆抗体-微管标记(Alexa-Fluro®594)在1/200稀释度下对微管蛋白进行反染色(红色)。 核染色为DAPI(蓝色)。 仅二级抗体对照:二级抗体为 约150081 山羊抗狂犬病IgG H&L(Alexa Fluor®488)以1/1000稀释度预先吸附在处理(右侧)和未处理(左侧)的细胞中。 -
对石蜡包埋的人类前列腺增生组织进行免疫组织化学分析,用ab32536在1/5000(0.098 ug/ml)稀释度下标记NF-kB p65,然后使用现成的LeicaDS9800(Bond™Polymer Refine Detection)。 前列腺增生的细胞质染色。 该切片在室温下与ab32536孵育30分钟。 免疫染色在徕卡生物系统BOND®RX仪器上进行。 苏木精复染。 仅限二级抗体对照:二级抗体是现成的LeicaDS9800(Bond™Polymer Refine Detection)。 用柠檬酸缓冲液(pH 6.0,表位检索溶液1)进行20分钟的热介导抗原检索 -
对石蜡包埋的人扁桃体组织进行免疫组织化学分析,用ab32536在1/5000(0.098 ug/ml)稀释度下标记NF-kB p65,然后使用现成的LeicaDS9800(Bond™Polymer Refine Detection)。 人扁桃体细胞质染色。 该切片在室温下与ab32536孵育30分钟。 免疫染色在徕卡生物系统BOND上进行 ® RX仪器。 苏木精复染。 仅二级抗体对照:二级抗体是现成的LeicaDS9800(Bond™Polymer Refine Detection)。 用柠檬酸缓冲液(pH 6.0,表位检索溶液1)进行20分钟的热介导抗原检索 -
MMP3和NFκB共同定位于人类动脉粥样硬化斑块。 对动脉粥样硬化斑块石蜡包埋组织块切片(4µm)进行MMP3和p50(A、B和C)或MMP3与p65双重免疫染色( D、 E和F,如图所示 )分别使用兔多克隆NFκB p50和MMP3抗体(Abcam)和ab32536,以及山羊抗兔二级抗体。 用液体永久红染色原和载体蓝染色原进行双重免疫染色。 粉红色表示p50(A、B和C)或p65(D、E和F)的表达。 蓝色表示MMP3(A、B、C、D、E和F)的表达。 箭头表示与p50(B和C)或与p65(E和F)共表达MMP3的细胞。 200倍放大倍数(A和D); B、C、E和F放大400倍。 -
分化的THP-1(人单核细胞白血病细胞系)细胞中NF-κB/p65的核定位。 细胞固定,渗透,ab32536染色,Alexa Fluor可视化 ® 555山羊抗兔IgG(绿色)。 细胞核用DAPI(蓝色)复染。 显微镜图像 答:。 非刺激性THP-1细胞(顶行)细胞质中的非活性NF-κB/p65蛋白定位 B。 LPS刺激后NF-κB/p65蛋白转位到THP-1细胞的细胞核中(最下面一行)。 使用合适的TRITC和DAPI滤波器以及63×物镜获取每个荧光通道的图像。 比例尺:10μm -
小鼠结肠切片的免疫组织化学分析,用未纯化的ab32536染色NF-kB p65。 在pH为6的柠檬酸盐缓冲液中通过微波加热进行抗原回收。 切片与一级抗体(1/250)孵育过夜,并使用 约80437 暴露兔特定HRP/DAB检测IHC试剂盒。 -
用未纯化的ab32536标记NF-kB p65的人类癌细胞的免疫细胞化学/免疫荧光分析(中间面板)。 简单地说,将受试细胞接种在用HCl和乙醇处理过的盖玻片上,并在使用前进行高压灭菌。 NF-κB的p65亚单位的免疫染色是通过用Triton X-10使细胞渗透,然后用抗NFκB p65兔单克隆一抗[E379](ab32536)处理细胞,然后用Alexa Fluor ® 488驴抗兔IgG二级抗体。 细胞核用DAPI染色(左面板)。 合并(右侧面板)。 使用荧光显微镜采集图像。 -
使用未纯化的ab32536对HeLa(宫颈腺癌人上皮细胞系)细胞进行免疫荧光染色。 -
所有车道: 1000µg时的抗-NF-kB p65抗体[E379](ab32536) 车道1: Raw264.7(小鼠Abelson小鼠白血病病毒诱导的肿瘤巨噬细胞)全细胞裂解物 车道2: Raw264.7(小鼠Abelson小鼠白血病病毒诱导的肿瘤巨噬细胞)用1ug/ml脂多糖处理6小时全细胞裂解物 3号车道: 小鼠脑裂解物 车道4: 小鼠脾裂解物 每车道15µg的裂解液/蛋白质。 次要 所有车道: 山羊抗狂犬病IgG H&L(HRP)( ab97051型 )1/20000稀释(山羊抗狂犬病IgG,(H+L),过氧化物酶结合) 预测的带宽大小: 65千帕 暴露时间: 3秒 这种抗体不适合检测小鼠组织裂解物。 PMID:18036230报道,通过脂多糖治疗,NF-KB p65的表达增加。 尽管一些论文支持NF-κB p65在小鼠组织中的表达(PMID:21479220和20008488),但ab32536无法在这些小鼠组织中检测到感兴趣的条带。 -
抗-NF-kB p65[E379]抗体(未纯化ab32536)与还原野生型(WT)和p65敲除(KO)小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)裂解物的反应性。 SDS-PAGE后,在25°C下将膜在5%乳中TBS+0.1%吐温中封闭1小时,然后与未净化的ab32536(5%乳中1:1000稀释TBS+0.1%吐温)在4°C下孵育16小时。 然后用抗兔HRP结合二级抗体孵育印迹,然后用ECL培养。 -
用1:2000稀释度(0.2μg/ml)纯化ab32536标记NF-kB p65的人结肠癌组织切片的免疫组织化学(福尔马林/PFA-固定石蜡包埋切片)分析。 热介导抗原检索使用 约93684 (Tris/EDTA缓冲液,pH 9.0)。 组织用苏木精复染。 使用免疫组织探针一步法HRP聚合物(即用型)二级抗体。 以PBS代替一抗作为阴性对照。 -
1/5000稀释(纯化)的抗-NF-kB p65抗体[E379](ab32536)+15µg的HeLa(人宫颈腺癌上皮细胞)全细胞裂解物 次要 山羊抗狂犬病IgG H&L(HRP)( ab97051型 )稀释1/20000 预测的带宽大小: 65千帕 封闭和稀释缓冲液: 5%NFDM/TBST。 -
1/5000稀释(纯化)的抗-NF-kB p65抗体[E379](ab32536)+15µg的MEF(小鼠胚胎成纤维细胞(永生化))全细胞裂解物 次要 山羊抗狂犬病IgG H&L(HRP)( ab97051型 )稀释1/20000 预测的带宽大小: 65千帕 封闭和稀释缓冲液: 5%NFDM/TBST。 -
1/100000稀释(未纯化)的抗-NF-kB p65抗体[E379](ab32536)+HeLa(人宫颈腺癌上皮细胞系)细胞裂解液 预测的带宽大小: 65千帕 观察到的频带大小: 65千帕 -
使用未纯化的ab32536对石蜡包埋的人乳腺癌组织进行免疫组织化学分析。
协议
数据表和文件
-
SDS下载 -
数据表下载
工具书类 (338)
秦W 等。 长期接触氨会导致仔猪肺部氧化应激和糖酵解增强。 环境毒物 37:179-191 (2022). 公共医学:34806272 欧D 等。 LIM矿化蛋白-1通过改变NF-κB和MAPK/JNK通路抑制IL-1β诱导的人软骨细胞损伤。 实验治疗学 23:61(2022)。 公共医学:34934432 太阳L 等。 电针通过抑制NLRP3信号改善老年小鼠术后认知功能障碍和相关神经炎。 CNS神经科学疗法 28:390-400 (2022). 公共医学:34951130 田X 等。 梗阻性黄疸小鼠回肠末端TLR2和TLR5的表达及其在肠粘膜损伤中的作用。 医学科学建筑学 18:237-250 (2022). 公共医学:35154543 徐H 等。 CCR2+巨噬细胞促进正畸牙齿移动和牙槽骨重塑。 前部免疫 13:835986 (2022). 公共医学:35185928