简介

  • 产品名称

    抗NF-κB p65抗体
    参见NF-kB p65原代抗体
  • 描述

    NF-κB p65多克隆兔
  • 寄主种

    兔子
  • 测试应用

    适用于:冰冻切片ICC/IFIHC-P世界银行知识产权流式细胞术更多细节
  • 物种反应性

    与之反应:鼠,鼠,鸡,人,印第安麂,Heterocephalus glaber
  • 免疫原

    合成的肽与人NF-kB p65 aa 500对应于C末端(C末端)结合到匙孔血蓝蛋白。
    肽可用AB16636

  • 阳性对照

    • 该抗体在下列裂解物中呈阳性信号:小鼠脾组织、HeLa全细胞、A431全细胞WB:人胎脑、肾和肺组织裂解物。
  • 一般注释

      

性能

应用

我们的保证担保覆盖使用AB16502在以下测试应用中。

应用注意事项包括推荐的起始稀释液;最佳稀释/浓度应由最终用户确定。

应用 退让 笔记
冰冻切片 使用依赖于测定的浓度。
ICC/IF 使用浓度为1~5μg/ml。
IHC-P 使用1~5μg/ml的浓度,在开始使用IHC染色方案之前进行热介导的抗原检索。
世界银行 使用浓度为0.5μg/ml的检测约64 kDa的带(预测分子量:60 kDa)。人NF-κB p65肽(AB16636).

ABCAM推荐使用牛奶作为阻断剂。

知识产权 使用依赖于测定的浓度。
流式细胞术 使用依赖于测定的浓度。

AB171870兔多克隆IgG适合作为该抗体的同种型对照。

目标

  • 功能

    NF-κB是一种多效性转录因子,存在于几乎所有的细胞类型中,参与许多生物过程,如炎症、免疫、分化、细胞生长、肿瘤发生和凋亡。NF-κB是由含有Rela/P65、RelB、NFKB1/P105、NFKB1/P50、ReR和NFKB2/P52的类Re-样结构域形成的同源或异源二聚体,而异源二聚体P65-P50复合物似乎是最丰富的。二聚体结合在其靶基因的DNA中的Kappa B位点,并且个体二聚体对于不同的Kappa B位点具有不同的偏好,它们可以与可区分的亲和力和特异性结合。不同的二聚体组合分别起转录激活子或阻遏子的作用。NF-κB是由翻译后修饰和亚细胞分区的各种机制以及与其他辅因子或辅阻遏物的相互作用控制的。NF-κB复合物在与NF-κB抑制剂(I-κB)家族成员络合的非活性状态中被保持在细胞质中。在传统的激活途径中,i-KAPAB通过不同活化剂对IKKAP-B激酶(IKKs)磷酸化,随后降解,从而释放转移到细胞核的活性NF-κB复合物。NF-κB异源二聚体p65-p50和p65-C-ReR复合物是转录激活因子。NF-κB p65-p65复合体似乎参与了侵袭素介导的IL-8表达的激活。I-κB对NF-κB的抑制作用主要通过与p65的相互作用发挥作用。p65显示弱的DNA结合位点,这有助于NF-κB复合物中的DNA结合。与染色质在NF-κB启动子区的关联与DDX1。
  • 序列相似性

    包含1个RHD(Rel-like)结构域。
  • 9AATAD基序是存在于大量酵母和动物转录因子中的反式激活域。
  • 翻译后的
    修改

    泛素化,导致其蛋白酶体降解。NF-κB反应的终止需要降解。
    LSE-310经SEDD6单甲基化。LYS310的单甲基化被EHMT1的AKE重复所识别,并促进靶基因抑制的染色质的形成,导致NF-κB转录因子活性的下调。在Ser-311上的磷酸化破坏了与EHMT1的相互作用,而不阻止LYS-310的单甲基化,并减轻靶基因的抑制。
    Ser-311的磷酸化破坏EHMT1的相互作用,并促进转录因子活性(通过相似性)。Ser-536上的磷酸化刺激LYS310上的乙酰化和与CBP的相互作用;磷酸化和乙酰化形式显示增强的转录活性。
    可逆乙酰化;乙酰化似乎是由CBP介导的,通过HDAC3去乙酰化。在LYS122上乙酰化增强了DNA结合并削弱了与NFKBIa的关联。在DNA结合和NFKBIa关联的影响下,在LYS310上的乙酰化是完全转录活性所必需的。乙酰化还可以降低DNA结合并导致核输出。与BRMS1的相互作用促进了“赖氨酸-310”的脱乙酰化。
  • 细胞定位

    细胞核。细胞质。核,但也发现在细胞质中的非活性形式络合到抑制剂(i-KAPPA-B)。在TNF-α诱导下,在细胞核中与RelA共定位。
  • UniProt信息
  • 数据库链接

  • 替代名称

    • 禽网状内皮组织增生症病毒(VRE)癌基因同源物A抗体
    • MGC131774抗体
    • NF-kappa B p65 DelTA3抗体
    • NFKAPABP65抗体
    • NFKB P65抗体
    • NFKB3抗体
    • 核因子-κB抗体
    • 核因子NF-κB p65亚单位抗体
    • 核因子NF-κB p65亚单位抗体
    • κ轻多肽基因增强子在B细胞3抗体中的核因子
    • κ轻多肽基因增强子核因子在B细胞3抗体中的作用
    • OtSAMP000 000 034 34抗体
    • OtSAMP000 000 034抗体
    • OTHAMP09000243575抗体
    • OtSAMP000 000 03634 76抗体
    • OtSAMP000 000 0339抗体
    • P65抗体
    • p65 NF-κB抗体
    • p65 NFKB抗体
    • 受体抗体
    • TF65亚型人抗体
    • 转录因子NFKB3抗体
    • 转录因子p65抗体
    • V型禽网状内皮组织增生症病毒癌基因同源物A(B细胞3(p65))中κ轻多肽基因增强子的核因子
    • V-RE禽网状内皮组织增生症病毒癌基因同源物A抗体
    • V-RE网状内皮组织增生症病毒癌基因同源物A(禽)抗体
    • V-RE网状内皮组织增生症病毒癌基因同源物A、核因子κ轻多肽基因增强子B细胞3、p65抗体
    查看全部

图像

  • 第1巷野生型HAP1细胞裂解液(20μg)
    第2巷NFκB p65敲除HAP1细胞裂解液(20μg)
    第3巷HeLa细胞裂解液(20μg)
    第4巷A431细胞裂解液(20μg)

    1—4车道合并信号(红色和绿色)。绿色-AB16502观察到70 kDa。红色AB8245加载控制,观察到37 kDa。


    在野生型HAP1细胞中,AB16502与NFκB p65反应,并伴有额外的交叉反应带。NFκB p65基因敲除样品未观察到条带。对野生型和NFκB p65基因敲除样品进行SDS-PAGE电泳。AB16502(NFκB p65)和AB8245(对GAPDH的负荷控制)均稀释1/1000,在4°C孵育过夜。用羊抗兔IgG H& L(印迹)开发印迹。®预吸附(800 CW)AB21673和山羊抗小鼠IgG H&L(Ir染料)®第六百八十)预吸附AB21677第二抗体在成像前室温下以1/10×000稀释1小时。

  • 人乳腺癌FFPE切片中NF-kB p65染色的IHC图像TM系统使用标准协议F。使用热介导的抗原检索,用柠檬酸钠缓冲液(PH6,表位检索溶液1)预处理20分钟。然后将切片与AB16502,1μg/ml孵育,在室温下8分钟,并用HRP偶联的紧凑聚合物体系检测。使用DAB作为显色剂。然后切片用苏木精复染,并安装DPX。

  • 所有车道:抗-NF-κB p65抗体(AB16502)1/1000稀释

    第1巷:人胎脑裂解液
    第2巷:人胎肾裂解液
    第3巷:人胎肺裂解液

    裂解物/蛋白质,每车道20盎司。

    次要的
    所有车道:山羊抗兔IgG H&L(HRP)AB97051单片机(1/20000稀释)

    预测波段大小:60 kDa
    观察波段大小:65 kDa
    为什么实际频带大小与预测不同?



    阻隔/稀释缓冲液和浓度:5% NFDM/TBST

    曝光时间:LANE1 15秒,车道2和3秒3秒

    正常脑可能表达低水平的p65(pMID:21479220)

  • IC16/IF图像的AB16502染色人HeLa细胞。将细胞固定于甲醇(5分钟),在室温下与抗体(AB16502,1μg/ml)孵育1h。第二抗体(绿色)为Alexa For For®488山羊抗兔IgG(H+L),稀释1/1000小时,成像1h。TMFX信号增强器被用作主要阻断剂,5% BSA(在TBS- T)被用于所有其他阻断步骤。DAPI用于染色细胞核(蓝色)。Alexa Furor®594鬼笔环肽被用来标记F-肌动蛋白(RED)。

  • NF-κB p65用0.5mg HeLa全细胞提取液,5μg兔多克隆NFKB p65和50 g L蛋白G磁珠(+)免疫沉淀。对照组(-)未添加抗体。
    将抗体在蛋白G小球搅拌下孵育10min,加入RIPA缓冲液稀释的HeLa全细胞提取液,搅拌下再孵育10min。
    通过添加40μL SDS负载缓冲液洗脱蛋白质,70℃孵育10min。o在SDS-PAGE凝胶上分离每个样品的10μL,转移到硝酸纤维素膜上,用5% BSA封闭,用AB16502进行检测。
    次级:小鼠单克隆抗体[SB62a]二级抗体抗兔辣根过氧化物酶(IgG轻链)AB9697
    频带:68 kDA: NFKB P65

  • 免疫组化(福尔马林/PFA固定石蜡切片)绒毛蛋白分析克里DCK1F/F小鼠结肠组织切片用AB16502(Brown)标记NF-κB p65。在4μm福尔马林固定石蜡包埋切片上,采用柠檬酸盐缓冲液(pH 6)在99°C下加压18分钟,进行热诱导表位检索。在Brfield显微镜下,在加入一级抗体前,将玻片暴露于过氧化物酶阻断液(AB16502)。用4℃过夜与一次抗体孵育后,用过氧化物酶共轭聚合物孵育玻片。

  • DCK1免疫组化(福尔马林/PFA固定石蜡切片)分析F/F小鼠结肠组织切片用AB16502(Brown)标记NF-κB p65。在4μm福尔马林固定石蜡包埋切片上,采用柠檬酸盐缓冲液(pH 6)在99°C下加压18分钟,进行热诱导表位检索。在Brfield显微镜下,在加入一级抗体前,将玻片暴露于过氧化物酶阻断液(AB16502)。用4℃过夜与一次抗体孵育后,用过氧化物酶共轭聚合物孵育玻片。

     

  • ICC/IF图像显示AB16502染色的MCF7细胞。将细胞固定在4% pFA(10分钟),然后在1% BSA/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸中孵育1pB-TWEN 1h,使细胞通透,阻断非特异性蛋白-蛋白质相互作用。然后将细胞与抗体(AB16502,1μg/ml)隔夜培养4°C,第二抗体(绿色)为山羊。抗兔DyL光®488(IgG -H和L,预吸附)AB96899用1/250稀释1h。用Alexa Flor®594 WGA在1:200稀释1h标记质膜(红色)。DAPI用于在1.43μm的浓度下染色细胞核(蓝色)。

  • 所有车道:抗NF-κB p65抗体(AB16502):1μg/ml

    第1巷:脾(小鼠)组织裂解物
    第2巷:Hela(人上皮癌细胞系)全细胞裂解物

    裂解物/蛋白质,每车道10盎司。

    次要的
    所有车道:以1/3000稀释度对兔IgG -H和L预吸附(HRP)的多克隆

    采用ECL技术开发。

    在还原条件下进行。

    预测波段大小:60 kDa
    观察波段大小:64 kDa为什么实际频带大小与预测不同?


    曝光时间:八分钟
  • AB16502通过免疫组化(Falalin /PFA固定石蜡包埋切片)染色NF-kB p65在小鼠腹膜肿瘤细胞中的染色。用多聚甲醛固定组织,室温下用1%的BSA封闭60分钟。样品与原代抗体(1/1000)一起孵育2小时。未稀释的Alexa Flour®647羊抗兔IgG多克隆作为第二抗体。

    见复审

  • 抗NF-κB p65抗体(AB16502)在1μg/mL+ HeLa(人上皮癌细胞系)全细胞裂解液中10μg

    次要的
    山羊抗兔IgG H&L(HRP)AB97051单片机)50000毫克/毫升

    采用ECL技术开发。

    在还原条件下进行。

    预测波段大小:60 kDa
    观察波段大小:64 kDa为什么实际频带大小与预测不同?


    曝光时间:4分钟


    使用4-12%双TIS凝胶在MOPS缓冲系统下产生该印迹。凝胶在200 V下运行50分钟,然后在30V转移到硝酸纤维素膜上70分钟。然后用2%牛血清白蛋白阻断该膜一小时,然后在4°C孵育AB16502过夜。用与HRP结合的抗兔抗体检测抗体结合,并用ECL显影液可视化。AB133406

  • AB16502在大鼠组织中定位心肌细胞的细胞核。将组织固定(动物灌注固定)4% PFA,后固定在同一固定剂中过夜。在30%蔗糖中冷冻保存,并用低温恒温器切割。

    见复审

  • 所有车道:抗NF-κB p65抗体(AB16502):0.5μg/ml

    第1巷:Hela全细胞裂解液
    第2巷:A431全细胞裂解液
    第3巷:Hela全细胞裂解液人NF-κB p65肽AB16636)1μg/ml
    第4巷:A431全细胞裂解液人NF-κB p65肽AB16636)1μg/ml

    裂解物/蛋白质,每车道20盎司。

    次要的
    所有车道:Alexa Furor山羊多克隆兔IgG 1/5000稀释

    在还原条件下进行。

    预测波段大小:60 kDa
    观察波段大小:64 kDa为什么实际频带大小与预测不同?

  • AB16502以1/500稀释染色法,用免疫细胞化学法对异步和多聚甲醛固定(4%)HeLa细胞。将抗体与细胞孵育30分钟,然后用Cy3缀合的山羊抗鼠IgG(H+L)抗体检测。

    这张照片是由一个评论所提供的。柯克·麦克马纳斯提交2006年2月27日。

    见复审

推荐信

该产品已被引用:

  • 王L等。 穿心莲内酯对α-萘异硫氰酸盐致胆汁淤积性肝损伤的抑制作用 J-NAT-MED 七十三:38~39(2019)。阅读更多(PubMed:30617707)
  • 威克西JA等。 宫内生长受限的新生仔猪的神经病理学与胶质细胞活化和脑内的炎症状态有关。 神经炎症 十六:5(2019)。阅读更多(PubMed:30621715)
参见本产品的所有351个出版物

客户评论与问答

-属于41评论或问答

应用
蛋白质印迹法
样品
人细胞裂解液-全细胞(人组织)
凝胶运行条件
变性变性(10%丙烯酰胺凝胶)
装载量
20μg
治疗
UV-B 100MJ/CM2
规格
人体组织
阻塞步骤
BSA作为30分钟(s)·浓度的阻断剂:5%℃:25℃

用户社区

核实客户

2019 4月25日提交

应用
免疫组化法(福尔马林/PFA固定石蜡切片)
样品
小鼠组织切片(前列腺)
抗原检索步骤
热传导缓冲液/酶:柠檬酸盐
透化作用
规格
前列腺
阻塞步骤
血清阻断剂为1小时(s)和0分钟(s)·浓度:10%℃:温度20℃
固定剂
多聚甲醛

用户社区

核实客户

2019 1月18日提交

应用
蛋白质印迹法
样品
人细胞裂解液-全细胞(HEK293)
凝胶运行条件
变性变性
装载量
25μg
规格
HEK293
阻塞步骤
牛奶为1小时(S)和0分钟(S)·浓度的封闭剂:5%℃:RT°C

用户社区

核实客户

2018 12月24日提交

应用
蛋白质印迹法
样品
大鼠细胞裂解液-全细胞(心脏)
凝胶运行条件
变性变性
装载量
25μg
规格
阻塞步骤
牛奶为1小时(S)和0分钟(S)·浓度的封闭剂:5%℃:RT°C

用户社区

核实客户

2018 12月24日提交

应用
蛋白质印迹法
样品
小鼠细胞裂解液-全细胞(心肌细胞)
凝胶运行条件
变性变性
装载量
25μg
规格
心肌细胞
阻塞步骤
牛奶为1小时(S)和0分钟(S)·浓度的封闭剂:5%℃:RT°C

用户社区

核实客户

2018 12月24日提交

应用
炸薯条
样品
人细胞裂解液-核(肿瘤细胞系)
阴性对照
GAPDH
规格
肿瘤细胞系
检测步骤
实时聚合酶链反应
类型
交联(X芯片)
交联步骤的持续时间:30分钟(s)和0秒(s)
交联剂:甲醛的规范
阳性对照
干扰素B1

吉奥尔哥斯西尼迪斯

核实客户

十二月07日提交2018

退让
应用
炸薯条
样品
人类细胞裂解液-核(肾透明细胞肾癌)
阴性对照
786-透明细胞肾癌细胞。
规格
肾(透明细胞肾癌)
检测步骤
其他
类型
交联(X芯片)
交联步骤的持续时间:10分钟(s)和0秒(s)
交联剂:1%甲醛的规范
阳性对照
786-母系获得的转移性肾癌细胞。

用户社区

核实客户

2018 8月17日提交

应用
蛋白质印迹法
样品
小鼠细胞裂解液-全细胞(BV-2细胞)
凝胶运行条件
非还原非变性(天然)(8%)
装载量
40μg
治疗
1μg/ml LPS 24h
规格
BV-2细胞
阻塞步骤
BSA作为1小时(S)和0分钟(S)·浓度的阻滞剂:5%℃:温度21℃

韩智慧女士

核实客户

2018 7月31日提交

应用
免疫细胞化学/免疫荧光
样品
狗细胞(永生化组织细胞肉瘤(DH85))
透化作用
PBS中的0.1%—Triton X-100
规格
永生化组织细胞肉瘤(DH85)
阻塞步骤
BSA作为1小时(S)和0分钟(S)·浓度的阻滞剂:0.1%℃:温度23℃
固定剂
多聚甲醛

用户社区

核实客户

2018 4月16日提交

应用
免疫细胞化学
样品
Rat Cultured Cells(心肌细胞)
透化作用
是- Triton X-100,0.03%
规格
心肌细胞
阻塞步骤
BSA作为1小时(S)和0分钟(S)·浓度的阻滞剂:1%℃:RT°C
固定剂
多聚甲醛

用户社区

核实客户

2018 2月27日提交

-属于41评论或问答

请注意:所有产品仅用于研究用途。不用于诊断程序
有关许可证查询,请联系PosisSts@ ABCAMC.

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