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1.使用了什么样的样本(物种、组织)?作为阳性对照,我们建议分离心脏线粒体。·我已经在这个测试中使用了从各种小鼠组织中分离出来的线粒体。我在这个实验中有多个控件,如TOM20、NDUFB8、TIM23以及ND1,它们都工作得很好。2.您是否执行了任何纯化步骤来富集样品中的线粒体蛋白质?当进行线粒体分离时,我们发现线粒体靶点的结果有所改善。我们的组织线粒体分离试剂盒示例如下:https://www.abcam.com/Mitochondria-Isolation-Kit-for-Tissue-ab110168.html是的,我们做到了。但结果还是一样的。3.你想要的分子量是多少?观察到的比能带大小为40 kDa。·这种抗体的信号太弱,无法分析。它需要过度暴露(通常是通宵),4.你是如何储存抗体的?4摄氏度
Abcam社区
已验证客户
2013年1月29日被问及
我有几个关于您的协议和故障排除提示的后续问题:1.一抗含有叠氮化钠。叠氮化钠抑制HRP,即二级抗体的结合物。因此,您需要纯化抗体以去除叠氮化钠,或者使用非HRP结合的另一种二级抗体。很抱歉,我之前没有注意到这一点,但这很可能是阻止检测蛋白质的问题。下面是我们的叠氮化钠去除协议的链接:https://www.abcam.com/index.html?pageconfig=resource&rid=138692.你每口井装了多少样品?3.您是否用可逆染色法(如Ponceau S)确认了MTCO1蛋白转移?由于您使用的是PVDF膜,我们建议将膜预先浸泡在甲醇中,然后再浸泡在转移缓冲液中。4.5%的牛奶可能会堵塞膜。尝试用3%的牛奶块代替1小时30分钟可能是值得的。
2013年1月29日答复