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了解ELISA分析的工作原理,此技术的优缺点,以及可用的不同类型的ELISA。
目录
查看完整的ELISA指南
ELISA(酶联免疫吸附试验)是一种检测生物样品中是否存在抗原的技术。与其他类型的免疫分析一样,ELISA依靠抗体通过高度特异的抗体-抗原相互作用检测目标抗原。
在ELISA检测中,抗原固定在固体表面。这可以直接完成,也可以通过使用自身固定在表面的捕获抗体来完成。然后将抗原与检测抗体复合,该检测抗体与适于检测的分子(例如酶或荧光团)结合。
图1。ELISA检测的基本设置。多孔板上的捕获抗体将固定感兴趣的抗原。该抗原将被与生物素和链霉亲和素结合的检测抗体识别和结合。
ELISA测定通常在多孔板(96或384孔)中进行,其提供固体表面以固定抗原。固定分析物有助于将抗原与样品中其他成分分离。这种特性使ELISA成为同时对多个样品进行的最简单的检测方法之一。
更多信息,请查看我们关于ELISA原则的网络研讨会.
图2.不同类型的ELISA(直接、间接、夹心和竞争)
在直接ELISA中,抗原固定在多孔板表面,并用抗原特异性抗体检测。抗体直接与HRP或其他检测分子结合。
间接ELISA是一种使用两步过程进行检测的技术,其中抗原特异性的一级抗体与靶标结合,并且针对一级抗体的宿主物种的标记的二级抗体与一级抗体结合以进行检测。对于直接ELISA检测,抗原固定在多孔板的表面。
该方法还可用于通过用血清代替初级抗体来检测血清样本中的特定抗体。
探索间接ELISA试剂盒和试剂
夹心ELISA(或夹心免疫分析)是最常用的格式。这种形式需要两种针对不同抗原表位的抗体。这两种抗体通常被称为配对抗体。其中一种抗体被涂覆在多孔板的表面上,用作捕获抗体,以便于抗原的固定。另一种抗体是缀合的,并且有助于抗原的检测。
探索夹心ELISA试剂盒和试剂
也称为抑制ELISA或竞争性免疫分析,竞争性ELISA分析通过检测信号干扰来测量抗原的浓度。前面的每种格式都可以根据竞争格式进行调整。
样本抗原与参考抗原竞争,以结合特定量的标记抗体。将参考抗原预先包被在多孔板上,样品与标记抗体预先孵育并添加到孔中。根据样本中抗原的数量,或多或少可以获得游离抗体来结合参考抗原。这意味着样本中的抗原越多,检测到的参考抗原越少,信号越弱。
一些竞争性ELISA试剂盒使用标记抗原而不是标记抗体。标记的抗原和样品抗原(未标记的)竞争与初级抗体的结合。样本中的抗原量越低,由于微孔中标记的抗原越多,信号越强。
探索竞争性ELISA试剂盒和试剂
ELISA指南
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