概述
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产品名称 ioSkeletal肌细胞-人iPSC-Derived骨骼肌细胞 -
亲代细胞系 iPSC公司 -
有机体 人类 -
经过测试的应用程序 -
生物安全水平 1 -
一般注意事项 引入ioSkeletal Myocytes,该细胞由人类诱导的多能干细胞(iPSCs)产生,使用opt-ox,这是一种精确的细胞重编程技术。 人类干细胞在几天内转化为稳定可靠的骨骼肌细胞,为研究、疾病建模和HTS提供了高质量的人体模型。 ioSkeletal肌细胞表现出肌丝关键蛋白(Desmin、Titin、Troponin、Myosin重链、Dytrophin)的强劲表达,以及以时间依赖的方式从未成熟(MYH3和MYH8)向成熟肌球蛋白重链亚型(MYH1)的转变。 复活后第10天,骨骼肌细胞形成条纹状多核肌细胞,对乙酰胆碱产生反应而收缩。 人类骨骼肌细胞可大规模获得,易于培养,并可在几天内进行实验,为肌肉、神经肌肉和相关代谢紊乱的研究提供了可靠的模型。 与bit.bio合作 核型: 正常 播种密度: 100000个细胞/厘米 2 播种兼容性: 6-、12-、24-和96-well兼容 质量控制: 不育、ICC和基因表达分析 研究应用: 肌肉研究、神经肌肉接头研究、代谢研究、药物开发、基因筛选(例如CRISPR筛选)、收缩分析 本产品受iPS Academia Japan Inc、TET Systems GmbH、ERS Genomics limited和Sigma-Aldrich Co.LLC的有限使用许可,并采用Bit Bio专利技术开发。 有关许可证和专利的详细信息,请参阅我们的 有限使用许可和专利页面 .
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相应抗体 -
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应用
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图像
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高纯度骨骼肌细胞表达肌丝蛋白。 复苏后第10天的免疫荧光染色显示收缩器的成分,如Desmin(左上)、Dytrophin(右上)、Myosin Heavy Chain(左下)以及肌肉转录因子Myogenin(左下方)的强劲表达。 细胞还显示肌钙蛋白表达,可见条纹纤维和多核(右下)。 -
细胞显示关键肌源性标记物的时间基因表达。 ioSkeletal肌细胞基因表达。 重编程后,生物骨骼肌细胞下调多能性标记物(A)的表达,并开始表达肌球蛋白重链亚型MYH3和MYH8(B)。 通过持续培养,ioSkeletal肌细胞显示成熟肌球蛋白亚型MYH7和MYH1以及DESMIN、DYSTROPHIN、MYOGENIN和TITIN(C)的表达。 通过RT-qPCR评估基因表达水平(相对于父母iPSC表达的数据,按PBGD标准化)。 数据表示解冻后的天数(Dx)。 -
ioSkeletal肌细胞有两种大小的小瓶,专门为满足您的实验需要而量身定制,浪费最少。 -建议ioSkeletal肌细胞的播种密度为100000个细胞/cm 2 . -一个小瓶(2.5 x 10 6 活细胞)可以至少电镀0.5 x 24孔板、0.75 x 96孔板或1 x 384孔板。 -一个大瓶(5 x 10 6 活细胞)可至少放置1 x 24孔板、1.5 x 96孔板或2 x 384孔板。 -
细胞表现出典型的肌细胞形态。 解冻后第1至10天; 4倍放大; 比例尺:800µm -
快速肌球蛋白骨骼重链的免疫荧光染色 约51263 ioSkeletal Myocytes-人iPSC-Derived骨骼肌细胞(ab277612),在诱导后3天(左侧面板)、5天(中间面板)和10天(右侧面板)分化。 用100%MeOH固定细胞(5min),然后用1%BSA/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸在0.1%PBS-Tween中封闭1h。 然后将细胞在+4°C下培养过夜 约51263 在5µg/mL和 约6046 ,兔多克隆至β-管蛋白,稀释度为1/1000。 然后将细胞与 第150117页 、山羊抗鼠IgG H&L(Alexa Fluor ® 488)以1/1000稀释度预吸附(以绿色显示)和 约150088 、山羊抗狂犬病IgG H&L(Alexa Fluor ® 594)以1/1000稀释度预吸附(以红色显示)。 用DAPI标记细胞核DNA(以蓝色显示)。 使用高含量分析仪(Operetta CLS、Perkin Elmer)采集图像,并显示共焦截面的最大强度投影。 在所有通道中,Gamma调整为1.5。 抗体 约51263 使用4%甲醛固定(10min)得出了可比较的结果。 -
心脏肌钙蛋白T的免疫荧光染色 ab8295标准 in ioSkeletal Myocytes-人iPSC衍生的骨骼肌细胞(ab277612),诱导后分化10天。 用4%甲醛固定细胞(10分钟),用0.1%PBS吐温透化5分钟,然后用1%BSA/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸在0.1%PBS吐温中封闭1小时。 然后将细胞在+4°C下培养过夜 ab8295标准 在5µg/mL和 约6046 ,兔多克隆至β-管蛋白,稀释度为1/1000。 然后将细胞与 第150117页 、山羊抗鼠IgG H&L(Alexa Fluor ® 488)以1/1000稀释度预吸附(以绿色显示)和 约150088 、山羊抗狂犬病IgG H&L(Alexa Fluor ® 594)以1/1000稀释度预吸附(以红色显示)。 用DAPI标记细胞核DNA(以蓝色显示)。 使用高含量分析仪(Operetta CLS、Perkin Elmer)采集图像,并显示共焦截面的最大强度投影。 在所有通道中,Gamma调整为1.5。 抗体 ab8295年 使用甲醇固定(100%,5分钟)得出了类似的结果。 -
肌生成素的免疫荧光染色 约124800 在诱导后3天分化的ioSkeletal肌细胞-人iPSC-Derived骨骼肌细胞(ab277612)。 用4%甲醛固定细胞(10分钟),用0.1%PBS吐温透化5分钟,然后用1%BSA/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸在0.1%PBS吐温中封闭1小时。 然后将细胞在+4°C下培养过夜 约124800 0.5µg/mL和 约7291 ,小鼠单克隆[DM1A]至α-管蛋白,稀释度为1/1000。 然后将细胞与 约150081 、山羊抗狂犬病IgG H&L(Alexa Fluor ® 488)以1/1000稀释度预吸附(以绿色显示)和 ab150120型 、山羊抗鼠IgG H&L(Alexa Fluor ® 594)以1/1000稀释度预吸附(以红色显示)。 用DAPI标记细胞核DNA(以蓝色显示)。 使用高含量分析仪(Operetta CLS、Perkin Elmer)采集图像,并显示共焦截面的最大强度投影。 在所有通道中,Gamma调整为1.5。 抗体 约124800 使用甲醇固定(100%,5分钟)得出了类似的结果。 -
肌生成素的免疫荧光染色 约1835年 在诱导后3天分化的ioSkeletal肌细胞-人iPSC-Derived骨骼肌细胞(ab277612)。 用4%甲醛固定细胞(10分钟),用0.1%PBS吐温透化5分钟,然后用1%BSA/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸在0.1%PBS吐温中封闭1小时。 然后将细胞在+4°C下培养过夜 公元1835年 在1µg/mL和 约6046 ,兔多克隆至β-管蛋白,稀释度为1/1000。 然后将细胞与 第150117页 、山羊抗鼠IgG H&L(Alexa Fluor ® 488)以1/1000稀释度预吸附(以绿色显示)和 约150088 、山羊抗狂犬病IgG H&L(Alexa Fluor ® 594)以1/1000稀释度预吸附(以红色显示)。 用DAPI标记细胞核DNA(以蓝色显示)。 使用高含量分析仪(Operetta CLS、Perkin Elmer)采集图像,并显示共焦截面的最大强度投影。 在所有通道中,Gamma调整为1.5。 抗体 约1835年 使用甲醇固定(100%,5分钟)得出了类似的结果。 -
肌动蛋白/ACTN1的免疫荧光染色 约68194 ioSkeletal Myocytes-人iPSC-Derived骨骼肌细胞(ab277612),在诱导后3天(左侧面板)、5天(中间面板)和10天(右侧面板)分化。 用100%MeOH固定细胞(5min),然后用1%BSA/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸在0.1%PBS-Tween中封闭1h。 然后将细胞在+4°C下培养过夜 约68194 0.5µg/mL和 约7291 ,小鼠单克隆[DM1A]至α-管蛋白,稀释度为1/1000。 然后将细胞与 约150081 、山羊抗狂犬病IgG H&L(Alexa Fluor ® 488)以1/1000稀释度预吸附(以绿色显示)和 ab150120型 、山羊抗鼠IgG H&L(Alexa Fluor ® 594)以1/1000稀释度预吸附(以红色显示)。 用DAPI标记细胞核DNA(以蓝色显示)。 使用高含量分析仪(Operetta CLS、Perkin Elmer)采集图像,并显示共焦截面的最大强度投影。 在所有通道中,Gamma调整为1.5。 -
肌动蛋白/ACTN1的免疫荧光染色 约68194 ioSkeletal Myocytes-人iPSC-Derived骨骼肌细胞(ab277612),在诱导后3天(左侧面板)、5天(中间面板)和10天(右侧面板)分化。 用4%甲醛固定细胞(10分钟),用0.1%PBS吐温透化5分钟,然后用1%BSA/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸在0.1%PBS吐温中封闭1小时。 然后将细胞在+4°C下培养过夜 约68194 0.5µg/mL和 约7291 ,小鼠单克隆[DM1A]至α-管蛋白,稀释度为1/1000。 然后将细胞与 约150081 、山羊抗狂犬病IgG H&L(Alexa Fluor ® 488)以1/1000稀释度预吸附(以绿色显示)和 ab150120型 、山羊抗鼠IgG H&L(Alexa Fluor ® 594)以1/1000稀释度预吸附(以红色显示)。 用DAPI标记细胞核DNA(以蓝色显示)。 使用高含量分析仪(Operetta CLS、Perkin Elmer)采集图像,并显示共焦截面的最大强度投影。 在所有通道中,Gamma调整为1.5。 -
肌动蛋白/ACTN1的免疫荧光染色 约18061 在诱导后10天内分化的生物骨骼肌细胞-人iPSC-Derived骨骼肌细胞(ab277612)。 用100%MeOH固定细胞(5min),然后用1%BSA/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸在0.1%PBS-Tween中封闭1h。 然后将细胞在+4°C下培养过夜 约18061 在5µg/mL和 约6046 ,兔多克隆至β-管蛋白,稀释度为1/1000。 然后将细胞与 第150117页 、山羊抗鼠IgG H&L(Alexa Fluor ® 488)以1/1000稀释度预吸附(以绿色显示)和 约150088 ,山羊抗兔IgG H&L(Alexa Fluor ® 594)以1/1000稀释度预吸附(以红色显示)。 用DAPI标记细胞核DNA(以蓝色显示)。 使用高含量分析仪(Operetta CLS、Perkin Elmer)采集图像,并显示共焦截面的最大强度投影。 在所有通道中,Gamma调整为1.5。 -
心脏肌钙蛋白T的免疫荧光染色 约10214 在诱导后10天内分化的生物骨骼肌细胞-人iPSC-Derived骨骼肌细胞(ab277612)。 用100%MeOH固定细胞(5min),然后用1%BSA/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸在0.1%PBS-Tween中封闭1h。 然后将细胞在+4°C下培养过夜 约10214 在1µg/mL和 约6046 ,兔多克隆至β-管蛋白,稀释度为1/1000。 然后将细胞与 第150117页 、山羊抗鼠IgG H&L(Alexa Fluor ® 488)以1/1000稀释度预吸附(以绿色显示)和 约150088 ,山羊抗兔IgG H&L(Alexa Fluor ® 594)以1/1000稀释度预吸附(以红色显示)。 用DAPI标记细胞核DNA(以蓝色显示)。 使用高含量分析仪(Operetta CLS、Perkin Elmer)采集图像,并显示共焦截面的最大强度投影。 在所有通道中,Gamma调整为1.5。 抗体 约10214 用4%甲醛固定(10min)进行阳性染色。 -
心脏肌钙蛋白T的免疫荧光染色 公元209813年 在诱导后10天内分化的生物骨骼肌细胞-人iPSC-Derived骨骼肌细胞(ab277612)。 用4%甲醛固定细胞(10分钟),用0.1%PBS吐温透化5分钟,然后用1%BSA/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸在0.1%PBS吐温中封闭1小时。 然后将细胞在+4°C下培养过夜 公元209813年 在0.02µg/mL和 约7291 ,小鼠单克隆[DM1A]至α-管蛋白,稀释度为1/1000。 然后将细胞与 约150081 、山羊抗狂犬病IgG H&L(Alexa Fluor ® 488)以1/1000稀释度预吸附(以绿色显示)和 ab150120型 、山羊抗鼠IgG H&L(Alexa Fluor ® 594)以1/1000稀释度预吸附(以红色显示)。 用DAPI标记细胞核DNA(以蓝色显示)。 使用高含量分析仪(Operetta CLS、Perkin Elmer)采集图像,并显示共焦截面的最大强度投影。 在所有通道中,Gamma调整为1.5。 抗体 公元209813年 使用MeOH固定法(100%,5分钟)也进行了阳性染色。 -
Desmin的免疫荧光染色 ab32362号 在诱导后10天内分化的生物骨骼肌细胞-人iPSC-Derived骨骼肌细胞(ab277612)。 用100%MeOH固定细胞(5分钟),然后用1%BSA/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸在0.1%PBS吐温中封闭1h。 然后将细胞在+4°C下培养过夜 ab32362号 0.02µg/mL和 约7291 ,小鼠单克隆[DM1A]至α-管蛋白,稀释度为1/1000。 然后将细胞与 约150081 、山羊抗狂犬病IgG H&L(Alexa Fluor ® 488)以1/1000稀释度预吸附(以绿色显示)和 ab150120型 、山羊抗鼠IgG H&L(Alexa Fluor ® 594)以1/1000稀释度预吸附(以红色显示)。 用DAPI标记细胞核DNA(以蓝色显示)。 使用高含量分析仪(Operetta CLS、Perkin Elmer)采集图像,并显示共焦截面的最大强度投影。 在所有通道中,Gamma调整为1.5。 抗体 ab32362号 使用4%甲醛固定(10min)得出了可比较的结果。 -
Desmin的免疫荧光染色 约15200 在诱导后10天内分化的生物骨骼肌细胞-人iPSC-Derived骨骼肌细胞(ab277612)。 用4%甲醛固定细胞(10分钟),用0.1%PBS吐温透化5分钟,然后用1%BSA/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸在0.1%PBS吐温中封闭1小时。 然后将细胞在+4°C下培养过夜 约15200 0.1µg/mL和 约7291 ,小鼠单克隆[DM1A]至α-管蛋白,稀释度为1/1000。 然后将细胞与 约150081 、山羊抗狂犬病IgG H&L(Alexa Fluor ® 488)以1/1000稀释度预吸附(以绿色显示)和 ab150120型 、山羊抗鼠IgG H&L(Alexa Fluor ® 594)以1/1000稀释度预吸附(以红色显示)。 用DAPI标记细胞核DNA(以蓝色显示)。 使用高含量分析仪(Operetta CLS、Perkin Elmer)采集图像,并显示共焦截面的最大强度投影。 在所有通道中,Gamma调整为1.5。 抗体 约15200 使用甲醇固定(100%,5分钟)得出了类似的结果。 -
数据显示胰岛素调节葡萄糖转运蛋白GLUT4的表达对代谢研究至关重要(第二部分) 复苏后第7天的免疫细胞化学显示,GLUT4在生物骨骼肌细胞的核周区域和纹状体中表达。 图片由Wellcome-MRC代谢科学研究所的Dougall Norris和Daniel Fazakerley提供。 -
数据显示胰岛素调节葡萄糖转运蛋白GLUT4的表达对代谢研究至关重要(第一部分) 复苏后第10天的RT-qPCR显示,与未分化的hiPSC和碘谷氨酸能神经元相比,生物骨骼肌细胞中GLUT4的表达。 -
GLUT4的免疫荧光染色 约33780 ioSkeletal Myocytes-人iPSC-Derived骨骼肌细胞(ab277612),在诱导后3天(左侧面板)、5天(中间面板)和10天(右侧面板)分化。 用100%MeOH固定细胞(5min),然后用1%BSA/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸在0.1%PBS-Tween中封闭1h。 然后将细胞在+4°C下培养过夜 约33780 在5µg/mL和 约7291 ,小鼠单克隆[DM1A]至α-管蛋白,稀释度为1/1000。 然后将细胞与 约150081 ,山羊抗兔IgG H&L(Alexa Fluor ® 488)以1/1000稀释度预吸附(以绿色显示)和 ab150120型 、山羊抗鼠IgG H&L(Alexa Fluor ® 594)以1/1000稀释度预吸附(以红色显示)。 用DAPI标记细胞核DNA(以蓝色显示)。 使用高含量分析仪(Operetta CLS、Perkin Elmer)采集图像,并显示共焦截面的最大强度投影。 在所有通道中,Gamma调整为1.5。 -
数据显示胰岛素调节葡萄糖转运蛋白GLUT4的表达对代谢研究至关重要(第三部分) 分化的3T3-L1脂肪细胞和成熟的ioSkeletal肌细胞的Western blotting显示GLUT4表达呈时间依赖性。 图片由Wellcome-MRC代谢科学研究所的Dougall Norris和Daniel Fazakerley提供。 -
ioSkeletal肌细胞到达准备板。 简单的单介质方案产生完全分化和成熟的骨骼肌细胞。 生成ioSkeletal肌细胞的3阶段协议: 1.诱导(在bit.bio进行) 2.多西环素稳定3天 3.骨骼肌细胞成熟的维持。
协议
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