概述
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产品名称 人RAB10敲除A549细胞系 -
亲代细胞系 A549型 -
有机体 人类 -
突变描述 CRISPR/Cas9实现的淘汰; X=1 bp插入; 帧移位=100% -
通道编号 <20 -
淘汰验证 免疫细胞化学(ICC)、新一代测序(NGS)、Western Blot(WB) -
经过测试的应用程序 -
生物安全水平 1 -
一般注意事项 建议控制: 人野生型A549细胞系( ab259777号 ). 请注意,剔除细胞株订单中不会自动包含野生型细胞株,如果需要,请使用代码WILDTYPE-TMTK1免费添加推荐的野生型细胞系。 低温保存细胞培养基: 细胞冷冻介质-DMSO无血清培养基,在补充甲基纤维素的MEM中含有8.7%的DMSO。 培养基: DMEM:哈姆斯F12+5%FBS 初始处理指南: 到达后,小瓶应储存在液氮气相中,而不是-80°C。 在-80°C下储存可能会导致生存能力丧失。 1.在37°C水浴中解冻小瓶约1-2分钟。 2.将细胞悬液(0.8 mL)转移到含有8.4 mL预热培养基的15 mL/50 mL锥形无菌聚丙烯离心管中,用额外的0.8 mL培养基(总体积10 mL)清洗小瓶以收集剩余细胞,并在室温下以201 x g(rcf)离心5分钟。 10 mL代表建议的最小稀释度。 20 mL代表建议的最大稀释度。 3.将细胞颗粒重新悬浮在5 mL预热培养基中,并使用血细胞仪或其他细胞计数方法进行计数。 根据细胞计数,在适当的细胞培养瓶中以2x10的密度播种细胞 三 -1x10个 4 细胞/厘米 2 。播种密度仅供参考,应根据各个实验室的时间表进行调整。 4.在37°C培养箱中用5%CO培养 2 。应每天监测培养物。 亚文化指南: 所有播种密度应基于通过既定方法获得的细胞数。 引导播种密度为6x10 4 细胞/厘米 2 建议使用。 如果需要,在继代培养前24小时更换部分培养基可能有助于促进生长。 当细胞达到80-90%的汇合时,应进行传代。 不要超过7x10 4 细胞/厘米 2 .
本产品受The Broad Institute、ERS Genomics limited和Sigma-Aldrich Co.LLC的有限使用许可,并采用专利技术开发。 有关许可证和专利的详细信息,请参阅我们的 有限使用许可证 和 专利页 . 我们将提供复苏时增殖的活细胞。
属性
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单元格数量 1 x 10 6 细胞/小瓶,1 mL -
粘附/悬浮 粘附剂 -
组织 肺 -
单元格类型 上皮的 -
疾病 癌 -
性别 男性 -
无支原体 是的 -
储存说明 采用干冰运输。 储存在液氮中。 -
存储缓冲区 成分:8.7%二甲基亚砜、2%纤维素、甲醚 -
研究领域
目标
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功能 小GTPases Rab是细胞内膜运输的关键调节器,从运输小泡的形成到与膜的融合。 Rabs在非活性GDP结合形式和活性GTP结合形式之间循环,后者能够将直接负责囊泡形成、运动、栓系和融合的不同下游效应器集招募到膜上(通过相似性)。 Rab主要参与蛋白质从高尔基体到质膜的生物合成运输。 例如,调节SLC2A4/GLUT4葡萄糖转运蛋白富集的囊泡向质膜的输送。 同时,它调节TLR4的转运,TLR4是一种类toll受体到质膜,因此可能对先天性免疫反应很重要。 在极化神经元和上皮细胞内的不对称蛋白运输到质膜中也发挥特殊作用。 在神经元中,它通过调节囊泡膜向轴突质膜的转运参与轴突发生,而在上皮细胞中,它调节高尔基体向基底外侧膜的转运。 此外,可能在基底外侧循环途径和吞噬体成熟中发挥作用。 根据PubMed:23263280,可能在内质网动力学和形态学中发挥作用,控制微管和小管融合沿线的小管化。 -
序列相似性 属于小GTPase超家族。 拉布家族。 -
手机定位 细胞质泡膜。 高尔基体膜。 高尔基体,转高尔基网络膜。 内体膜。 回收内体膜。 细胞质小泡,吞噬体膜。 细胞投射,纤毛。 内质网膜。 与SLC2A4/GLUT4储存囊泡相关(PubMed:22903088)。 局限于纤毛的基部(PubMed:20576682)。 暂时与吞噬体结合(通过相似性)。 定位于新小管生长区域的内质网(PubMed:23263280)。 -
UniProt提供的信息
相关产品
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KO细胞裂解物 -
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应用
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图像
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所有车道: 抗RAB10抗体[MJF-R23]( ab237703型 )稀释度为1/1000 车道1: 野生型A549(人肺癌细胞系)全细胞裂解物 车道2: RAB10敲除A549(人肺癌细胞系)全细胞裂解物 3号车道: HeLa(宫颈腺癌人上皮细胞系)全细胞裂解物 车道4: MCF7(人乳腺癌细胞系)全细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 观察到的频带大小: 25千Da 为什么实际的频带大小与预测的不同? 1-4车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- ab237703型 在25 kDa时观察到。 红色负载控制, 约8245 ,在37 kDa下观察到。 ab237703型 发现在野生型A549细胞中识别RAB10,因为在RAB10敲除细胞系ab261868(敲除细胞裂解物 约261677 ). 在野生型和敲除型样品中观察到其他交叉反应带。 对野生型和RAB10敲除样品进行SDS-PAGE分析。 Ab237703和 约8245 (小鼠抗GAPDH负荷对照)分别以1/1000和1/20000稀释度在4°C下培养过夜。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸收床 ab216773号 和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸收床 约216776 二级抗体在成像前在室温下以1/20000稀释1小时。 -
4%对甲醛固定、0.1%皂苷渗透的A549野生型和敲除细胞(ab261868)标记RAB10(红色)的免疫荧光分析 ab237703型 0.5μg/ml,然后以1/1000稀释度进行二次抗兔试验。 核反染为DAPI(蓝色)。 -
所有车道: 抗-RAB10抗体[EP13242]( 公元181367年 )稀释度为1/1000 车道1: 野生型A549(人肺癌细胞系)全细胞裂解物 车道2: RAB10敲除A549(人肺癌细胞系)全细胞裂解物 3号车道: HeLa(人宫颈腺癌上皮细胞系)全细胞裂解物 车道4: MCF7(人乳腺癌细胞系)全细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 观察到的频带大小: 25千Da 为什么实际的频带大小与预测的不同? 1-4车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 约181367 在25 kDa时观察到。 红色负载控制, 约8245 ,在37 kDa下观察到。 约181367 在野生型A549细胞中,当RAB10敲除细胞系ab261868(敲除细胞裂解物 约261677 ). 对野生型和RAB10敲除样品进行SDS-PAGE分析。 Ab181367和 约8245 (小鼠抗GAPDH负荷对照)分别以1/1000和1/20000稀释度在4°C下培养过夜。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸收 ab216773号 和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸收床 约216776 二级抗体在成像前在室温下以1/20000稀释1小时。 -
4%对甲醛固定、0.1%皂苷渗透的A549野生型和敲除细胞(ab261868)标记RAB10(红色)的免疫荧光分析 ab237703型 0.5μg/ml,然后以1/1000稀释度进行二次抗兔试验。 核反染为DAPI(蓝色)。 -
X=1 bp插入
数据表和文件
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SDS下载 -
数据表下载