概述
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产品名称 -
亲代细胞系 希拉牌手表 -
有机体 人类 -
突变描述 利用CRISPR/Cas9实现基因敲除,第5外显子11 bp缺失,第5内显子5 5 bp插入,第5外显子插入选择盒 -
通道编号 <20 -
淘汰验证 Sanger测序,Western Blot(WB) -
经过测试的应用程序 -
生物安全水平 2 -
一般注意事项 建议控制: 人野生型HeLa细胞系( 约255928 ). 请注意,剔除细胞株订单中不会自动包含野生型细胞株,如果需要,请使用代码WILDTYPE-TMTK1免费添加推荐的野生型细胞系。 低温保存细胞培养基: 细胞冷冻介质-DMSO无血清培养基,在补充甲基纤维素的MEM中含有8.7%的DMSO。 培养基: DMEM(高糖)+10%FBS 初始处理指南: 到达后,小瓶应储存在液氮气相中,而不是-80°C。 在-80°C下储存可能会导致生存能力丧失。 1.将小瓶在37°C水浴中解冻约1-2分钟。 2.将细胞悬液(0.8 mL)转移到含有8.4 mL预热培养基的15 mL/50 mL锥形无菌聚丙烯离心管中,用额外的0.8 mL培养基(总体积10 mL)清洗小瓶以收集剩余细胞,并在室温下以201 x g(rcf)离心5分钟。 10 mL代表建议的最小稀释度。 20 mL代表建议的最大稀释度。 3.将细胞颗粒重新悬浮在5 mL预热培养基中,并使用血细胞仪或其他细胞计数方法进行计数。 根据细胞计数,将种子细胞置于密度为2x10的适当细胞培养瓶中 4 细胞/厘米 2 。播种密度仅供参考,应根据各个实验室的时间表进行调整。 4.将培养物在37°C培养箱中与5%CO一起培养 2 。应每天监测培养物。 亚文化指南: 所有播种密度应基于通过既定方法获得的细胞数。 引导播种密度为2x10 4 细胞/厘米 2 建议使用。 如果需要,在继代培养前24小时更换部分培养基可能有助于促进生长。 当细胞达到80-90%的汇合时,应进行传代。
本产品受The Broad Institute、ERS Genomics limited和Sigma-Aldrich Co.LLC的有限使用许可,并采用专利技术开发。 有关许可证和专利的详细信息,请参阅我们的 有限使用许可证 和 专利页 。 我们将提供复苏时增殖的活细胞。
属性
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单元格数量 1 x 10 6 细胞/小瓶,1 mL -
粘附/悬浮 粘附剂 -
组织 子宫颈 -
单元格类型 上皮的 -
疾病 腺癌 -
性别 女性 -
STR分析 釉原蛋白X D5S818:11、12 D13S317:12、13.3 D7S820:8、12 第16天第539页:第9页,第10页 vWA:16、18 TH01:7型 TPOX:8、12 CSF1PO:9、10 -
无支原体 是的 -
储存说明 采用干冰运输。 储存在液氮中。 -
存储缓冲区 成分:8.7%二甲基亚砜、2%纤维素、甲醚 -
研究领域
目标
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功能 肿瘤抑制剂。 作为一种双特异性蛋白磷酸酶,对酪氨酸、丝氨酸和苏氨酸磷酸化蛋白进行去磷酸化。 也可作为脂质磷酸酶,从磷脂酰肌醇3,4,5-三磷酸、磷脂酰肌糖醇3,4-二磷酸、磷脂酰基肌醇3-磷酸和肌醇1,3,4,15-四磷酸中去除肌醇环D3位置的磷酸,其顺序为体外PtdIns(3,4_5)P3>PtdIns(3,4) P2>PtdIns3P>Ins(1,3,4,5)P4。 脂质磷酸酶活性对其抑癌功能至关重要。 通过去磷酸化磷脂酰肌醇拮抗PI3K-AKT/PKB信号通路,从而调节细胞周期进展和细胞存活。 未磷酸化的形式与AIP1协同作用以抑制AKT1的活化。 去磷酸化酪氨酸磷酸化的黏着斑激酶,抑制细胞迁移、整合素介导的细胞扩散和黏着斑状形成。 作为AKT-mTOR信号通路的关键调节剂,在成年神经发生过程中控制新生神经元整合过程的速度,包括正确的神经元定位、树突状发育和突触形成。 可能是脂肪组织中胰岛素信号和葡萄糖代谢的负调控因子。 核单泛素形式具有更大的凋亡潜能,而细胞质非泛素形式诱导的肿瘤抑制能力较小。 在运动细胞中,抑制侧伪足的形成,从而促进细胞极化和定向运动。 同工酶α:功能性激酶,如同工酶1,可拮抗PI3K-AKT/PKB信号通路。 通过与亚型1协同增加PINK1蛋白水平,促进COX活性和ATP生成,在线粒体能量代谢中发挥作用。 -
组织特异性 在所有成年组织中以相对较高的水平表达,包括心脏、大脑、胎盘、肺、肝脏、肌肉、肾脏和胰腺。 -
参与疾病 考登综合征1 勒米特-杜克洛斯病 Bannayan-Riley-Ruvalcaba综合征 头颈部鳞状细胞癌 子宫内膜癌 在变形综合征(一种遗传异质性疾病)患者的子集中发现PTEN突变。 PTEN突变阳性病例的分子诊断将变形综合征患者归类为PTEN错构瘤综合征谱的一部分。 因此,在变形综合征早期存活的患者可能有更大的恶性肿瘤风险。 胶质瘤2 VACTERL与脑积水的相关性 前列腺癌 巨头/自闭症综合征 涉及BMPR1A和PTEN的10q23染色体微缺失是10q23缺失综合征的原因,该综合征表现出以下三种疾病的重叠特征:Bannayan-Zonana综合征、Cowden病和青少年息肉病综合征。 -
序列相似性 包含1个C2张力蛋白型域。 包含1个磷酸酶-张力蛋白型结构域。 -
域 C2结构域在体外以钙非依赖性的方式结合磷脂膜; 这种结合对其抑癌功能很重要。 -
翻译后 修改 在正常条件下由CK2组成磷酸化。 通过MAST1、MAST2、MAST3和STK11在体外磷酸化。 磷酸化导致对PIP3的抑制活性。 磷酸化可以抑制或促进PDZ结合。 FRK/PTK5在Tyr-336处的磷酸化可能通过抑制其与NEDD4的结合来保护该蛋白免受泛素介导的降解。 ROCK1的磷酸化对其稳定性和活性至关重要。 PLK3的磷酸化促进其稳定性并防止其被蛋白酶体降解。 单泛素化; 在维甲酸存在下,单泛素化增加。 USP7脱泛素; 导致其核排斥。 Lys-13和Lys-289氨基酸之一的单泛素化足以调节PTEN区隔化。 XIAP/BIRC4实现了泛素化。 -
手机定位 保密。 可通过经典信号肽分泌,并在多聚精氨酸基序和细胞质的帮助下重新进入细胞。 核心。 核,PML体。 单泛素形式是核。 非泛素形式是细胞质。 在PML核体中与PML和USP7共定位。 XIAP/BIRC4促进其核本地化。 -
UniProt提供的信息
相关产品
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KO细胞裂解物 -
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应用
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图像
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所有车道: 抗-PTEN抗体[EPR9941]( 约154812 )稀释度为1/10000 车道1: 野生型HeLa细胞裂解物 车道2: PTEN敲除HeLa细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 47千Da 观察到的波段大小: 47千Da 1-2车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 约154812 在47kDa处观察到。 红色-抗-GAPDH抗体[6C5]-负荷控制( 约8245 )在37 kDa时观察到。 约154812 在蛋白质印迹中显示与野生型HeLa细胞中的PTEN反应。 当敲除细胞系ab255419(敲除细胞裂解物 约263829 )已使用。 对野生型HeLa和PTEN敲除HeLa细胞裂解物进行SDS-PAGE分析。 在室温下,将膜在0.1%的TBST和3%的脱脂奶粉中封闭1小时。 约154812 和抗-GAPDH抗体[6C5]-负荷控制( 约8245 )在4°C下过夜,分别以1/10000和1/20000稀释。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸附床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸附床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
所有车道: 抗-PTEN抗体[EPR4408-76]( 约133532 )稀释度为1/10000 车道1: 野生型HeLa细胞裂解物 车道2: PTEN敲除HeLa细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 47千Da 观察到的波段大小: 47千Da 1-2车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 约133532 在47 kDa时观察到。 124 kDa时观察到的红色抗V蛋白抗体[VIN-54]。 约133532 western blot显示与野生型HeLa细胞中的PTEN反应。 当敲除细胞系ab255419(敲除细胞裂解物 约263829 )已使用。 对野生型HeLa和PTEN敲除HeLa细胞裂解物进行SDS-PAGE分析。 在室温下,将膜在0.1%的TBST和3%的脱脂奶粉中封闭1小时。 约133532 和抗-Vinculin抗体[VIN-54]在4°C下过夜,分别以1/10000和1/20000稀释。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸附床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸附床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
所有车道: 抗-PTEN抗体[EPR4408-76]( 约133532 )稀释度为1/10000 车道1: 野生型HeLa细胞裂解物 车道2: PTEN敲除HeLa细胞裂解物 3号车道: HAP1细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 47千Da 观察到的波段大小: 47千Da 1-3车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 约133532 在47 kDa时观察到。 红色-装载控制, 约8245 (小鼠抗GAPDH抗体[6C5])。 约133532 western blot显示与野生型HeLa细胞中的PTEN反应。 PTEN敲除细胞株ab255419(PTEN敲脱细胞裂解物 约263829 )低于47 kDa可能代表截断形式和劈开碎片。 尚未对此进行进一步调查。 对HeLa野生型和PTEN敲除细胞裂解物进行SDS-PAGE分析。 将膜封闭在3%的TBS-T牛奶中(0.1%吐温 ® )孵育前 约133532 和 约8245 (小鼠抗GAPDH抗体[6C5])在4°C下过夜,分别以1/10000和1/20000稀释。 印迹与山羊抗兔IgG H&L(IRDye)孵育 ® 800CW)预吸收床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸收床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
等位基因1:第5外显子11 bp缺失。 -
等位基因-2:5bp插入外显子5。 -
等位基因3:选择盒插入第5外显子。
数据表和文件
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SDS下载 -
数据表下载