概述
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产品名称 -
产品概述 CRISPR/Cas9实现的敲除细胞裂解物。 -
亲代细胞系 HEK293吨 -
有机体 人类 -
突变描述 利用CRISPR/Cas9实现敲除,纯合子(4N):1bp T插入(2N); 8 bp缺失和C-T插入(1N); 外显子2 4 bp缺失(1N) -
通道编号 <20 -
淘汰验证 Sanger测序,Western Blot(WB) -
重组说明 为了用作白细胞对照,将冻干液重新悬浮在50µL LDS*样品缓冲液中,使最终浓度达到2 mg/ml。对于还原条件,我们建议最终浓度为0.1 M DTT。 *不建议将SDS样品缓冲液用于这些冻干溶血物。 -
笔记 裂解液制备: 我们的裂解产物是使用RIPA缓冲液制成的,我们在其中添加了蛋白酶抑制剂鸡尾酒和磷酸酶抑制剂鸡尾液(比例:300:100:10)。 这意味着感兴趣的蛋白质变性了。 如果您需要天然形式的蛋白质,请使用活细胞版本-找到 在这里 。请参阅我们的裂解协议,了解我们裂解产物的制备方法的更多详细信息。 用户存储说明: 冻干液可在4°C下储存。 复原后,在-20°C下短期保存或-80°C下长期保存。 获取数千种由常用癌症细胞系产生的敲除细胞裂解物。 有关敲除细胞裂解物的更多信息,请参阅此处。 Abcam没有也不打算申请客户使用含有欧洲授权清单(附件十四)物质的产品的REACH授权。 我们的客户有责任检查REACH授权和任何其他相关授权在其预期用途中应用的必要性。 本产品受The Broad Institute、ERS Genomics limited和Sigma-Aldrich Co.LLC的有限使用许可,并采用专利技术开发。 有关许可证和专利的详细信息,请参阅我们的 有限使用许可证 和 专利页 . -
经过测试的应用程序
属性
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储存说明 储存于-80°C。 请参阅协议。 -
组件 1套 ab256769-人MYC敲除HEK293T细胞裂解物 1 x 100微克 ab255553-人类野生型HEK293T细胞裂解物 1 x 100微克 -
研究领域 -
单元格类型 上皮的 -
STR分析 釉原蛋白X D5S818:8、9 D13S317:12、14 D7S820:11 D16S539:9、13 vWA:16、19 TH01:7、9.3 TPOX:11个 CSF1PO:11、12
目标
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功能 参与基因转录的调节。 以非特异性方式结合DNA,同时也特异性识别核心序列5'-CAC[GA]TG-3'。 似乎激活了生长相关基因的转录。 -
参与疾病 注:MYC的过度表达与多种造血肿瘤的病因有关。 注:涉及MYC的染色体畸变可能是一种B细胞慢性淋巴细胞白血病的病因。 用BTG1移位t(8;12)(q24;q22)。 MYC缺陷是伯基特淋巴瘤(BL)的一个原因[MIM:113970]。 一种未分化恶性淋巴瘤,通常表现为颌骨中的大溶骨性病变或腹部肿块。注:涉及MYC的染色体畸变通常见于Burkitt淋巴瘤。 将MYC并列到重链或轻链免疫球蛋白基因位点之一的易位t(8;14)、t(8,22)或t(2;8)。 -
序列相似性 包含1个基本螺旋-环-螺旋(bHLH)域。 -
翻译后 修改 通过PRKDC进行磷酸化。 GSK3在Thr-58和Ser-62处的磷酸化是蛋白酶体泛素化和降解所必需的。 当在Thr-58和Ser-62磷酸化时,SCF(FBXW7)复合物泛素化,导致其被蛋白酶体降解。 在核质中,泛素化被USP28抵消,USP28与FBXW7(FBW7alpha)的亚型1相互作用,导致其去泛素化并防止降解。 然而,在核仁中,由于FBXW7亚型4(FBW7gamma)和USP28之间缺乏相互作用,USP28不能抵消泛素化,这解释了核仁中选择性MYC降解的原因。 DCX(TRUSS)复合物也具有多泛素化作用。 -
手机定位 细胞核>核质。 核仁>核仁。 -
UniProt提供的信息 -
表格 c-Myc也在细胞质中表达。 -
备选名称 AU016757型 禽骨髓细胞瘤病病毒癌基因同源物 bHLHe39号机组
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应用
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图像
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车道1: 野生型HEK-293T细胞裂解物20μg 车道2: MYC敲除HEK-293T细胞裂解物20μg 3号车道: Jurkat细胞裂解物20μg 车道4: SH-SY5Y细胞裂解液20μg Western blot假彩色图像:抗Myc标签抗体[Myc.A7]在1/1000稀释度下染色,以绿色显示; 兔抗GAPDH抗体[EPR16891]( 约181602 )以1/20000稀释度进行负荷控制染色,以红色显示。在Western blot中, 约18185年 显示为专门绑定到Myc标签。 在野生型HEK-293T细胞裂解液中观察到57kDa的带,在MYC敲除细胞系中未观察到该大小的信号 约256500 (敲除细胞裂解物ab263850)。 在57kDa以下的敲除裂解物通道中观察到的条带可能代表Myc标记的截断形式。 这还没有进一步研究,基因产物的功能特性也没有确定。 为了生成此图像,分析了野生型和MYC敲除HEK-293T细胞裂解物。 首先,样品在SDS-PAGE凝胶上运行,然后转移到硝化纤维素膜上。 TBS-0.1%吐温中3%牛奶中的膜被堵塞 ® 20(TBS-T),然后在4°C下与一级抗体孵育过夜。 在TBS-T中清洗四次斑点,在室温下与二级抗体孵育1小时,再次清洗四次,然后成像。 使用的二级抗体是预先吸收的山羊抗小鼠IgG H&L(IRDye®800CW)( 约216772 )和山羊抗兔IgG H&L(IRDye®680RD)预吸收( ab216777号 )稀释1/20000。 -
车道1: 野生型HEK-293T细胞裂解物20μg 车道2: MYC CRISPR-Cas9编辑的HEK-293T细胞裂解物20μg 3号车道: Jurkat细胞裂解物20μg 车道4: SH-SY5Y细胞裂解液20μg Western blot假彩色图像:抗Myc标签抗体[Myc.A7]在1/1000稀释度下染色,以绿色显示; 兔抗GAPDH抗体[EPR16891]( 约181602 )以1/20000稀释度进行负荷控制染色,以红色显示。在Western blot中, 约18185年 显示为专门绑定到Myc标签。 在野生型HEK-293T细胞裂解液中观察到57kDa的带,在MYC CRISPR-Cas9编辑的细胞系中未观察到该大小的信号 约256500 (CRISPR-Cas9编辑的细胞裂解物ab263850)。 在CRISPR-Cas9编辑的低于57kDa的裂解物通道中观察到的条带可能代表Myc标签的截断形式。 这还没有进一步研究,基因产物的功能特性也没有确定。 为了生成该图像,分析了野生型和MYC CRISPR-Cas9编辑的HEK-293T细胞裂解物。 首先,样品在SDS-PAGE凝胶上运行,然后转移到硝化纤维素膜上。 TBS-0.1%吐温中3%牛奶中的膜被堵塞 ® 20(TBS-T),然后在4°C下与一级抗体孵育过夜。 在TBS-T中清洗四次斑点,在室温下与二级抗体孵育1小时,再次清洗四次,然后成像。 使用的二级抗体是山羊抗鼠IgG H&L(IRDye®800CW)预吸收抗体( 约216772 )和山羊抗兔IgG H&L(IRDye®680RD)预吸收( ab216777号 )稀释1/20000。 -
车道1: 野生型HEK-293T细胞裂解物20μg 车道2: MYC敲除HEK-293T细胞裂解物20μg 3号车道: Jurkat细胞裂解物20μg 车道4: SH-SY5Y细胞裂解液20μg Western blot假彩色图像:1/200稀释的抗-Myc标签抗体[9E10]染色,以绿色显示; 兔抗GAPDH抗体[EPR16891]( 约181602 )以1/20000稀释度进行负荷控制染色,以红色显示。在Western blot中, ab32型 显示为专门绑定到Myc标签。 在野生型HEK-293T细胞裂解物中观察到57kDa的条带,在MYC敲除细胞系中没有观察到该大小的信号 约256500 (敲除细胞裂解物ab263850)。 在57kDa以下的敲除裂解物通道中观察到的条带可能代表Myc标记的截断形式。 这还没有进一步研究,基因产物的功能特性也没有确定。 为了生成此图像,分析了野生型和MYC敲除HEK-293T细胞裂解物。 首先,样品在SDS-PAGE凝胶上运行,然后转移到硝化纤维素膜上。 TBS-0.1%吐温中3%牛奶中的膜被堵塞 ® 20 (TBS-T),然后在4°C下与一级抗体孵育过夜。 在TBS-T中清洗四次斑点,在室温下与二级抗体孵育1小时,再次清洗四次,然后成像。 使用的二级抗体是山羊抗鼠IgG H&L(IRDye®800CW)预吸收抗体( 约216772 )和山羊抗兔IgG H&L(IRDye®680RD)预吸收( ab216777号 )稀释1/20000。 -
车道1: 野生型HEK-293T细胞裂解物20μg 车道2: MYC CRISPR-Cas9编辑的HEK-293T细胞裂解物20μg 3号车道: Jurkat细胞裂解物20μg 车道4: SH-SY5Y细胞裂解液20μg Western blot假彩色图像:1/200稀释的抗-Myc标签抗体[9E10]染色,以绿色显示; 兔抗GAPDH抗体[EPR16891]( 约181602 )以1/20000稀释度进行负荷控制染色,以红色显示。在Western blot中, ab32型 显示为专门绑定到Myc标签。 在野生型HEK-293T细胞裂解液中观察到57kDa的带,在MYC CRISPR-Cas9编辑的细胞系中未观察到该大小的信号 约256500 (CRISPR-Cas9编辑的细胞裂解物ab263850)。 在CRISPR-Cas9编辑的低于57kDa的裂解物通道中观察到的条带可能代表Myc标签的截断形式。 这还没有进一步研究,基因产物的功能特性也没有确定。 为了生成该图像,分析了野生型和MYC CRISPR-Cas9编辑的HEK-293T细胞裂解物。 首先,样品在SDS-PAGE凝胶上运行,然后转移到硝化纤维素膜上。 TBS-0.1%吐温中3%牛奶中的膜被堵塞 ® 20(TBS-T),然后在4°C下与一级抗体孵育过夜。 在TBS-T中清洗四次斑点,在室温下与二级抗体孵育1小时,再次清洗四次,然后成像。 使用的二级抗体是山羊抗鼠IgG H&L(IRDye®800CW)预吸收抗体( 约216772 )和山羊抗兔IgG H&L(IRDye®680RD)预吸收( ab216777号 )稀释1/20000。 -
车道1: 野生型HEK-293T细胞裂解物20μg 车道2: MYC敲除HEK-293T细胞裂解物20μg 3号车道: Jurkat细胞裂解物20μg 车道4: SH-SY5Y细胞裂解液20μg Western blot假彩色图像:抗-c-Myc抗体[Y69]在1/1000稀释度下染色,以绿色显示; 小鼠抗GAPDH抗体[6C5]( 约8245 )以1/20000稀释度进行负荷控制染色,以红色显示。在Western blot中, 约32072 显示与c-Myc特异结合。 在野生型HEK-293T细胞裂解物的45/57 kDa处观察到一条带,在MYC敲除细胞系中未观察到该大小的信号 约256500 (敲除细胞裂解物ab263850)。 在45/57 kDa以下的敲除裂解物通道中观察到的条带可能代表c-Myc的截断形式。 这还没有进一步研究,基因产物的功能特性也没有确定。 为了生成此图像,分析了野生型和MYC敲除HEK-293T细胞裂解物。 首先,样品在SDS-PAGE凝胶上运行,然后转移到硝化纤维素膜上。 TBS-0.1%吐温中5%牛奶中的膜被堵塞 ® 20(TBS-T),然后在4°C下与一级抗体孵育过夜。 在TBS-T中清洗四次斑点,在室温下与二级抗体孵育1小时,再次清洗四次,然后成像。 使用的二级抗体是山羊抗兔IgG H&L(IRDye®800CW)预吸收抗体( 邮编:216773 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye®680RD)预吸收床( 约216776 )稀释1/20000。 -
车道1: 野生型HEK-293T细胞裂解物20μg 车道2: MYC CRISPR-Cas9编辑的HEK-293T细胞裂解物20μg 3号车道: Jurkat细胞裂解物20μg 车道4: SH-SY5Y细胞裂解液20μg Western blot假彩色图像:抗-c-Myc抗体[Y69]在1/1000稀释度下染色,以绿色显示; 小鼠抗GAPDH抗体[6C5]( 约8245 )以1/20000稀释度进行负荷控制染色,以红色显示。在Western blot中, 约32072 显示与c-Myc特异性结合。 在野生型HEK-293T细胞裂解液中观察到45/57 kDa的带,在MYC CRISPR-Cas9编辑的细胞系中未观察到该大小的信号 约256500 (CRISPR-Cas9编辑的细胞裂解物ab263850)。 在CRISPR-Cas9编辑的45/57 kDa以下裂解物通道中观察到的条带可能代表c-Myc的截断形式。 这还没有进一步研究,基因产物的功能特性也没有确定。 为了生成该图像,分析了野生型和MYC CRISPR-Cas9编辑的HEK-293T细胞裂解物。 首先,样品在SDS-PAGE凝胶上运行,然后转移到硝化纤维素膜上。 TBS-0.1%吐温中5%牛奶中的膜被堵塞 ® 20(TBS-T),然后在4°C下与一级抗体孵育过夜。 在TBS-T中清洗四次斑点,在室温下与二级抗体孵育1小时,再次清洗四次,然后成像。 使用的二级抗体是山羊抗兔IgG H&L(IRDye®800CW)预吸收抗体( 邮编:216773 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye®680RD)预吸收床( 约216776 )稀释1/20000。 -
车道1: Jurkat细胞裂解物(20µg) 车道2: HeLa细胞裂解物(20µg) 3号车道: 野生型HEK-293T细胞裂解物(20µg) 车道4: MYC敲除HEK-293T细胞裂解物(20µg) 车道1-4: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 约32072 在57 kDa时观察到。 红色-装载控制, 约8245 在37 kDa时观察到。 约32072 在野生型HEK-293T细胞中显示与MYC反应。 敲除细胞系时观察到信号丢失 约256500 使用敲除细胞裂解物ab263850。 对野生型和MYC基因敲除样品进行SDS-PAGE分析。 约32072 和抗-GAPDH抗体[6C5]-负荷控制( 约8245 )分别在4°C下以1/1000稀释度和1/20000稀释度培养过夜。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸附( 邮编:216773 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸附床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
纯合子:外显子2插入1 bp
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