概述
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产品名称 人MYC(c-MYC)基因敲除HEK-293T细胞系 -
亲代细胞系 hek293吨 -
有机体 人类 -
突变描述 利用CRISPR/Cas9实现敲除,纯合子(4N):1bp T插入(2N); 8 bp缺失和C-T插入(1N); 外显子2 4 bp缺失(1N) -
通道编号 <20 -
淘汰验证 免疫细胞化学(ICC)、Sanger测序、Western Blot(WB) -
经过测试的应用程序 -
生物安全水平 2 -
一般注意事项 建议控制: 人野生型HEK293T细胞系( 约255449 ). 请注意,剔除细胞株订单中不会自动包含野生型细胞株,如果需要,请使用代码WILDTYPE-TMTK1免费添加推荐的野生型细胞系。 低温保存细胞培养基: 细胞冷冻介质-DMSO无血清培养基,在补充甲基纤维素的MEM中含有8.7%的DMSO。 培养基: DMEM(高糖)+10%FBS 初始处理指南: 到达后,小瓶应储存在液氮气相中,而不是-80°C。 在-80°C下储存可能会导致生存能力丧失。 1.在37°C水浴中解冻小瓶约1-2分钟。 2.将细胞悬液(0.8 mL)转移到含有8.4 mL预热培养基的15 mL/50 mL锥形无菌聚丙烯离心管中,用额外的0.8 mL培养基(总体积10 mL)清洗小瓶以收集剩余细胞,并在室温下以201 x g(rcf)离心5分钟。 10 mL代表建议的最小稀释度。 20 mL代表建议的最大稀释度。 3.将细胞沉淀重新悬浮在5mL预热的培养基中,并使用血细胞仪或替代细胞计数方法进行计数。 根据细胞计数,将种子细胞置于密度为2x10的适当细胞培养瓶中 4 细胞/厘米 2 。播种密度仅供参考,应根据各个实验室的时间表进行调整。 4.在37°C培养箱中用5%CO培养 2 。应每天监测培养物。 亚文化指南: 所有播种密度应基于通过既定方法获得的细胞计数。 引导播种密度为2x10 4 细胞/厘米 2 建议使用。 如果需要,在继代培养前24小时部分更换培养基可能有助于促进生长。 当细胞达到80-90%的汇合时,应进行传代。
本产品受The Broad Institute、ERS Genomics limited和Sigma-Aldrich Co.LLC的有限使用许可,并采用专利技术开发。 有关许可证和专利的详细信息,请参阅我们的 有限使用许可证 和 专利页 . 我们将提供复苏时增殖的活细胞。
属性
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单元格数量 1 x 10 6 细胞/小瓶,1 mL -
粘附/悬浮 坚持者 -
组织 肾 -
单元格类型 上皮的 -
STR分析 釉原蛋白X D5S818:8、9 D13S317:12、14 D7S820:11 第16天第539页:第9页,第13页 vWA:16、19 TH01:7、9.3 TPOX:11个 CSF1PO:11、12 -
无支原体 是的 -
储存说明 采用干冰运输。 储存在液氮中。 -
存储缓冲区 成分:8.7%二甲基亚砜、2%纤维素、甲醚 -
研究领域
目标
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功能 参与基因转录的调节。 以非特异性方式结合DNA,同时也特异性识别核心序列5'-CAC[GA]TG-3'。 似乎激活了生长相关基因的转录。 -
参与疾病 注:MYC的过度表达与多种造血肿瘤的病因有关。 注:涉及MYC的染色体畸变可能是一种B细胞慢性淋巴细胞白血病的病因。 用BTG1移位t(8;12)(q24;q22)。 MYC缺陷是Burkitt淋巴瘤(BL)的原因[MIM:113970]。 一种未分化的恶性淋巴瘤,通常表现为颌骨或腹部的大型溶骨性病变。注=涉及MYC的染色体畸变通常在伯基特淋巴瘤中发现。 将MYC并列到重链或轻链免疫球蛋白基因位点之一的易位t(8;14)、t(8,22)或t(2;8)。 -
序列相似性 包含1个基本螺旋-环-螺旋(bHLH)域。 -
翻译后 修改 通过PRKDC进行磷酸化。 GSK3在Thr-58和Ser-62处的磷酸化是蛋白酶体泛素化和降解所必需的。 当在Thr-58和Ser-62磷酸化时,SCF(FBXW7)复合物泛素化,导致其被蛋白酶体降解。 在核质中,泛素化被USP28抵消,USP28与FBXW7(FBW7alpha)的亚型1相互作用,导致其去泛素化并防止降解。 然而,在核仁中,由于FBXW7亚型4(FBW7gamma)和USP28之间缺乏相互作用,USP28不能抵消泛素化,这解释了核仁中选择性MYC降解的原因。 DCX(TRUSS)复合物也具有多泛素化作用。 -
手机定位 细胞核>核质。 核仁>核仁。 -
UniProt提供的信息 -
表格 c-Myc也在细胞质中表达。
相关产品
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KO细胞裂解物 -
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应用
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图像
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约32072 野生型HEK293细胞中的MYC染色(顶部面板)和MYC敲除的HEK299细胞(ab256500)(底部面板)。 用4%多聚甲醛固定细胞(10分钟),然后用0.1%Triton X-100渗透5分钟,然后用1%BSA/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸在0.1%PBS-Tween中封闭1小时。 然后将细胞与 约32072 浓度为5μg/ml 约7291 (鼠抗α-管蛋白单克隆抗体)在4°C下以1/1000稀释过夜,然后在室温下用山羊抗兔IgG二级抗体(Alexa Fluor ® 488) ( 约150081 )以2μg/ml(绿色显示)和山羊对小鼠IgG的二级抗体(Alexa Fluor ® 594) ( ab150120型 )浓度为2μg/ml(以红色显示)。 核DNA用DAPI标记为蓝色。 使用共焦显微镜(Leica-Microsystems TCS SP8)拍摄图像。 -
所有车道: 抗-Myc标签抗体[Myc.A7]( 约18185年 )稀释度为1/1000 车道1: 野生型HEK-293T细胞裂解物 车道2: MYC敲除HEK-293T细胞裂解物 3号车道: Jurkat细胞裂解物 车道4: SH-SY5Y细胞裂解液 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 48千Da Western blot假彩色图像:抗Myc标签抗体[Myc.A7]在1/1000稀释度下染色,以绿色显示; 兔抗GAPDH抗体[EPR16891]( 约181602 )以1/20000稀释度进行负荷控制染色,以红色显示。在Western blot中, 约18185年 显示为专门绑定到Myc标签。 在野生型HEK-293T细胞裂解液中在57 kDa处观察到一条带,而在MYC敲除细胞系ab256500(敲除细胞裂解液 约263850 ). 在57kDa以下的敲除裂解物通道中观察到的条带可能代表Myc标记的截断形式。 这还没有进一步研究,基因产物的功能特性也没有确定。 为了生成此图像,分析了野生型和MYC敲除HEK-293T细胞裂解物。 首先,样品在SDS-PAGE凝胶上运行,然后转移到硝化纤维素膜上。 TBS-0.1%吐温中3%牛奶中的膜被堵塞 ® 20(TBS-T),然后与一级抗体在4°C下孵育过夜。 在TBS-T中清洗四次斑点,在室温下与二级抗体孵育1小时,再次清洗四次,然后成像。 使用的二级抗体是山羊抗小鼠IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸收床( 约216772 )和山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸收床( ab216777型 )稀释1/20000。 -
所有车道: 抗-Myc标签抗体[9E10]( ab32型 )稀释1/200 车道2: MYC敲除HEK-293T细胞裂解物 3号车道: Jurkat细胞裂解物 车道4: SH-SY5Y细胞裂解液 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 48千Da Western blot假彩色图像:1/200稀释的抗-Myc标签抗体[9E10]染色,以绿色显示; 兔抗GAPDH抗体[EPR16891]( 约181602 )以1/20000稀释度进行负荷控制染色,以红色显示。在Western blot中, ab32型 显示为专门绑定到Myc标签。 在野生型HEK-293T细胞裂解物中观察到57kDa的条带,而在MYC敲除细胞系ab256500(敲除细胞裂解物 约263850 ). 在57kDa以下的敲除裂解物泳道中观察到的条带可能代表Myc标签的截短形式。 这还没有进一步研究,基因产物的功能特性也没有确定。 为了生成此图像,分析了野生型和MYC敲除HEK-293T细胞裂解物。 首先,样品在SDS-PAGE凝胶上运行,然后转移到硝化纤维素膜上。 TBS-0.1%吐温中3%牛奶中的膜被堵塞 ® 20(TBS-T),然后与一级抗体在4°C下孵育过夜。 在TBS-T中清洗四次斑点,在室温下与二级抗体孵育1小时,再次清洗四次,然后成像。 使用的二级抗体是山羊抗小鼠IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸收床( 约216772 )和山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸收床( ab216777型 )稀释1/20000。 -
所有车道: 抗-c-Myc抗体[Y69]-ChIP级( 约32072 )稀释度为1/1000 车道1: 野生型HEK-293T细胞裂解物 车道2: MYC敲除HEK-293T细胞裂解物 3号车道: Jurkat细胞裂解物 车道4: SH-SY5Y细胞裂解液 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 48千Da Western blot假彩色图像:抗-c-Myc抗体[Y69]在1/1000稀释度下染色,以绿色显示; 小鼠抗GAPDH抗体[6C5]( 约8245 )以1/20000稀释度进行负荷控制染色,以红色显示。在Western blot中, 约32072 显示与c-Myc特异结合。 在野生型HEK-293T细胞裂解物的45/57 kDa处观察到一条带,在MYC敲除细胞系ab256500(敲除细胞裂解物 约263850 ). 在45/57 kDa以下的敲除裂解物通道中观察到的条带可能代表c-Myc的截断形式。 这还没有进一步研究,基因产物的功能特性也没有确定。 为了生成此图像,分析了野生型和MYC敲除HEK-293T细胞裂解物。 首先,样品在SDS-PAGE凝胶上运行,然后转移到硝化纤维素膜上。 TBS-0.1%吐温中5%牛奶中的膜被堵塞 ® 20(TBS-T),然后与一级抗体在4°C下孵育过夜。 在TBS-T中清洗四次斑点,在室温下与二级抗体孵育1小时,再次清洗四次,然后成像。 使用的二级抗体是山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸收床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸收床( 约216776 )稀释1/20000。 -
所有车道: 抗-c-Myc抗体[Y69]-ChIP级( 约32072 )稀释度为1/1000 车道1: Jurkat细胞裂解物 车道2: HeLa细胞裂解物 3号车道: 野生型HEK-293T细胞裂解物 车道4: MYC敲除HEK-293T细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 次要 所有车道: 山羊抗兔IgG H&L(IRDye®800CW)预吸附( ab216773号 )稀释1/20000 预测的带宽大小: 48千Da 其他波段位于: 37 kDa(可能的负载控制) 1-4车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 约32072 在57 kDa时观察到。 红色-装载控制, 约8245 在37 kDa时观察到。 约32072 在野生型HEK-293T细胞中显示与MYC反应。 当敲除细胞系ab256500(敲除细胞裂解物 约263850 )已使用。 对野生型和MYC基因敲除样品进行SDS-PAGE分析。 约32072 和抗-GAPDH抗体[6C5]-负荷控制( 约8245 )分别以1/1000稀释度和1/2000稀释度在4°C下孵育过夜。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸附床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸附床( 约216776 )在成像前在室温下以1/2000稀释1小时的二次抗体。 -
纯合子:外显子2插入1 bp
数据表和文件
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