概述
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产品名称 人KRT14(细胞角蛋白14)敲除A-431细胞系 -
亲代细胞系 A431型 -
有机体 人类 -
突变描述 CRISPR/Cas9实现的淘汰; X=13 bp缺失; 帧移位=99.9% -
通道编号 <20 -
淘汰验证 免疫细胞化学(ICC)、新一代测序(NGS)、Western Blot(WB) -
经过测试的应用程序 -
生物安全水平 1 -
一般注意事项 建议控制: 人野生型A-431细胞系( 约263975 ). 请注意,剔除细胞株订单中不会自动包含野生型细胞株,如果需要,请使用代码WILDTYPE-TMTK1免费添加推荐的野生型细胞系。 低温保存细胞培养基: 细胞冷冻介质-DMSO无血清培养基,在补充甲基纤维素的MEM中含有8.7%的DMSO。 培养基: DMEM(高糖)+10%FBS 初始处理指南: 到达后,小瓶应储存在液氮气相中,而不是-80°C。 在-80°C下储存可能会导致丧失生存能力。 1.在37°C水浴中解冻小瓶约1-2分钟。 2.将细胞悬液(0.8 mL)转移到含有8.4 mL预热培养基的15 mL/50 mL锥形无菌聚丙烯离心管中,用额外的0.8 mL培养基(总体积10 mL)清洗小瓶以收集剩余细胞,并在室温下以201 x g(rcf)离心5分钟。 10 mL代表最低推荐稀释度。 20 mL代表建议的最大稀释度。 3.将细胞颗粒重新悬浮在5 mL预热培养基中,并使用血细胞仪或其他细胞计数方法进行计数。 根据细胞计数,将种子细胞置于密度为2x10的适当细胞培养瓶中 4 细胞/厘米 2 。播种密度仅供参考,应根据各个实验室的时间表进行调整。 4.在37°C培养箱中用5%CO培养 2 。应每天监测培养物。 亚文化指南: 所有播种密度应基于通过既定方法获得的细胞数。 引导播种密度为2x10 4 细胞/厘米 2 建议使用。 如果需要,在继代培养前24小时更换部分培养基可能有助于促进生长。 当细胞达到80-90%的汇合时,应进行传代。
本产品受The Broad Institute和ERS Genomics limited的有限使用许可,并采用专利技术开发。 有关有限使用许可证和相关专利的详细信息,请参阅我们的 有限使用许可证 和 专利页 . 我们将提供复苏时增殖的活细胞。
属性
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单元格数量 1 x 10 6 细胞/小瓶,1 mL -
粘附/悬浮 粘附剂 -
组织 皮肤 -
单元格类型 上皮的 -
疾病 表皮样癌 -
性别 女性 -
无支原体 是的 -
储存说明 采用干冰运输。 储存在液氮中。 -
存储缓冲区 成分:8.7%二甲基亚砜、2%纤维素、甲醚 -
研究领域
目标
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功能 非螺旋尾结构域参与促进KRT5-KRT14长丝自组织成大束,并增强体外角蛋白中间长丝弹性的机械性能。 -
组织特异性 在基底层中检测到,在更顶部的层中较低,特别是在棘层、颗粒层中,但在角质层中未检测到。 在生长卵泡的外根鞘中强烈表达,但在萌发基质、内根鞘或毛发中不表达。 在休止期的毛发周围的角质形成细胞中发现。 -
参与疾病 KRT14缺陷是单纯性大疱性表皮松解症(DM-EBS)的病因[MIM:131760]。 DM-EBS是一种严重的表皮内大疱性表皮松解症,其特征是全身疱疹样水疱、粟粒形成、指甲营养不良和粘膜受累。 KRT14缺陷是单纯性大疱性表皮松解症Weber-Cockayne型(WC-EBS)的病因[MIM:131800]。 WC-EBS是一种表皮内大疱性表皮松解症,其特征是仅限于手掌和足底皮肤区域出现水疱。 KRT14缺陷是单纯性大疱性表皮松解症Koebner型(K-EBS)的病因[MIM:131900]。 K-EBS是一种以全身性皮肤起泡为特征的表皮内大疱性表皮松解症。该表型与Dowling-Meara型没有根本区别,尽管其严重程度较轻。 KRT14缺陷是单纯性常染色体隐性遗传性大疱性表皮松解症(AREBS)的病因[MIM:601001]。 AREBS是一种表皮内大疱性表皮松解症,其特征是足部背面、侧面和足底表面出现局部起泡。 KRT14缺陷是内格列夫兰切什蒂-贾达松综合征(NFJS)的病因[MIM:161000]; 也称为Naegeli综合征。 NFJS是一种罕见的常染色体显性外胚层发育不良。 主要特征是没有皮纹(指纹)、网状皮肤色素沉着(大约从2岁开始,之前没有炎症阶段)、掌跖角化病、汗腺功能减退的少汗症和热引起的不适、指甲营养不良和牙釉质缺损。 KRT14缺陷是网状色素性皮肤病(DPR)的原因[MIM:125595]。 DPR是一种罕见的外胚层发育不良,其特征是终身持续的网状色素沉着、非瘢痕性脱发和指甲营养不良。 -
序列相似性 属于中间丝族。 -
手机定位 细胞质。 核心。 在两者中都表现为丝状图案。 -
UniProt提供的信息
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KO细胞裂解物 -
相关产品 抗细胞角蛋白14抗体[SP53]( 约119695 ) Alexa Fluor®488抗细胞角蛋白14抗体[EP1612Y]( ab192055年 ) Alexa Fluor®647抗细胞角蛋白14抗体[EP1612Y]( ab192056年 ) 抗细胞角蛋白14抗体[EPR17336]( 公元197893年 ) 抗细胞角蛋白19抗体[EPR1579Y]-BSA和无叠氮化合物( ab232566号 ) 抗细胞角蛋白14抗体[SP53]-不含BSA和叠氮化物( 邮编:236439 ) 抗-Lin8B抗体[EPR18717]-BSA和阿齐德不含( 约240326 ) 抗细胞角蛋白14抗体[EP1612Y]-BSA和无叠氮化合物( 约243907 ) 抗细胞角蛋白14抗体[EPR17336]-BSA和无叠氮化合物( ab251249号 ) 抗细胞角蛋白14抗体[LL002]-BSA和无叠氮化合物( 约264498 ) 抗细胞角蛋白14抗体[EP1612Y]( 约51054 ) 抗细胞角蛋白14抗体[LL002]( 约7800 )
应用
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图像
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CRISPR/Cas9实现的淘汰; X=13 bp缺失; 帧移位=99.9% -
所有车道: 抗细胞角蛋白14抗体[EP1612Y]( 约51054 )稀释度为1/10000 车道1: 野生型A431细胞裂解物 车道2: KRT14敲除A431细胞裂解物 3号车道: 人皮肤细胞裂解物 车道4: MCF7(人乳腺癌细胞系)全细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 52千Da 观察到的频带大小: 49千Da 为什么实际的频带大小与预测的不同? 车道1-4: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 约51054 在49 kDa时观察到。 红色-装载控制, 约8245 (小鼠抗GAPDH抗体[6C5])。 约51054 western blot显示与野生型A-431细胞中的细胞角蛋白14反应KRT14敲除细胞系ab261897(敲除细胞裂解物 约261706 )被使用。 对野生型A-431和KRT14敲除细胞裂解物进行SDS-PAGE分析。 TBS-T(0.1%吐温)中3%牛奶中的膜被堵塞 ® )孵育前 约51054 和 约8245 (小鼠抗GAPDH抗体[6C5])在4°C下过夜,分别以1/10000和1/20000稀释。 印迹与山羊抗兔IgG H&L(IRDye)孵育 ® 800CW)预吸收床( 邮编:216773 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸收床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
公元181595年 野生型A431细胞中的细胞角蛋白14染色(顶部面板)和KRT14敲除A431细胞(底部面板)。 用100%甲醇固定细胞(5分钟),然后用0.1%Triton X-100渗透5分钟,然后用1%BSA/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸在0.1%PBS-Tween中封闭1小时。 然后将细胞与 约181595 浓度为0.2μg/ml 约7291 (鼠抗α-管蛋白单克隆抗体)在4°C下以1/1000稀释过夜,然后在室温下用山羊抗兔IgG二级抗体(Alexa Fluor ® 488) ( 约150081 )2μg/ml(显示为绿色)和山羊抗小鼠IgG二级抗体(Alexa Fluor ® 594) ( 约150120 )浓度为2μg/ml(以红色显示)。 核DNA用DAPI标记为蓝色。 使用共焦显微镜(Leica-Microsystems TCS SP8)拍摄图像。 -
所有车道: 抗细胞角蛋白14抗体[EPR17336]( 公元197893年 )稀释1/50000 车道1: 野生型A-431(人表皮样癌细胞系)全细胞裂解物 车道2: KRT14敲除物A-431(人表皮样癌细胞系)全细胞裂解物 3号车道: 人皮肤全组织裂解物 车道4: MCF7(人乳腺癌细胞系)全细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 52千Da 观察到的频带大小: 52千Da 车道1-4: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 公元197893年 在52 kDa时观察到。 红色-装载控制, 约8245 (小鼠抗GAPDH抗体[6C5])。 公元197893年 Western blot显示与野生型A-431细胞中的KRT14反应。当KRT14敲除细胞系ab261897(敲除细胞裂解物 约261706 )被使用。 对野生型A-431和KRT14敲除细胞裂解物进行SDS-PAGE分析。 TBS-T(0.1%吐温)中3%牛奶中的膜被堵塞 ® )孵育前 公元197893年 和 约8245 (小鼠抗GAPDH抗体[6C5])在4°C下过夜,分别以1/50000和1/20000稀释。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸收床( 邮编:216773 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸收床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
所有车道: 抗细胞角蛋白14抗体[SP53]( 约119695 )稀释1/93 车道1: 野生型A-431(人表皮样癌细胞系)全细胞裂解物 车道2: KRT14敲除物A-431(人表皮样癌细胞系)全细胞裂解物 3号车道: 人皮肤全组织裂解物 车道4: MCF7(人乳腺癌细胞系)全细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 52千Da 观察到的频带大小: 52千Da 车道1-4: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- ab119695年 在52kDa处观察到。 红色-装载控制, 约8245 (小鼠抗GAPDH抗体[6C5])。 约119695 Western blot显示与野生型A-431细胞中的KRT14反应。当KRT14敲除细胞系ab261897(敲除细胞裂解物 约261706 )被使用。 对野生型A-431和KRT14敲除细胞裂解物进行SDS-PAGE分析。 TBS-T(0.1%吐温)中3%牛奶中的膜被堵塞 ® )孵育前 约119695 和 约8245 (小鼠抗GAPDH抗体[6C5])在4°C下过夜,稀释率分别为1:93和1/20000。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸收床( 邮编:216773 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸收床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
约119695 野生型A-431细胞中KRT14染色(顶面板)和KRT14敲除A-431的细胞(ab261897)(底面板)。 用100%甲醇固定细胞(5分钟),然后用0.1%Triton X-100渗透5分钟,然后用1%BSA/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸在0.1%PBS-Tween中封闭1小时。 然后将细胞与 约119695 5?时? g/ml浓度和 约7291 (小鼠单克隆抗体到α-管蛋白),以1/1000稀释度隔夜,4 o个 C,然后在室温下用山羊的兔IgG二级抗体(Alexa Fluor)进一步孵育1小时 ® 488) ( 约150081 )2?时? g/ml(以绿色显示)和山羊对小鼠IgG的二级抗体(Alexa Fluor ® 594) ( 约150120 )2?时? g/ml(以红色显示)。 核DNA用DAPI标记为蓝色。 使用共焦显微镜(Leica-Microsystems TCS SP8)拍摄图像。 -
约108417 野生型A-431细胞中KRT14染色(顶面板)和KRT14敲除A-431的细胞(ab261897)(底面板)。 用100%甲醇固定细胞(5分钟),然后用0.1%Triton X-100渗透5分钟,然后用1%BSA/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸在0.1%PBS-Tween中封闭1小时。 然后将细胞与 约108417 稀释度为1/100 约7291 (小鼠单克隆抗体到α-管蛋白),以1/1000稀释度隔夜,4 o个 C,然后在室温下与山羊抗兔IgG第二抗体(Alexa Fluor ® 488) ( 约150081 )在2? g/ml(显示为绿色)和山羊抗小鼠IgG的第二抗体(Alexa Fluor ® 594) ( 约150120 )2?时? g/ml(以红色显示)。 核DNA用DAPI标记为蓝色。 使用共焦显微镜(Leica-Microsystems TCS SP8)拍摄图像。 -
约51054 野生型A-431细胞中KRT14染色(顶面板)和KRT14敲除A-431的细胞(ab261897)(底面板)。 用100%甲醇固定细胞(5分钟),然后用0.1%Triton X-100渗透5分钟,然后用1%BSA/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸在0.1%PBS-Tween中封闭1小时。 然后将细胞与 约51054 稀释度为1/100 约7291 (小鼠单克隆抗体到α-管蛋白),以1/1000稀释度隔夜,4 o个 C,然后在室温下用山羊的兔IgG二级抗体(Alexa Fluor)进一步孵育1小时 ® 488) ( 约150081 )2 ug/ml(以绿色显示)和山羊对小鼠IgG的二级抗体(Alexa Fluor ® 594) ( 约150120 )2 ug/ml(以红色显示)。 核DNA用DAPI标记为蓝色。 使用共焦显微镜(Leica-Microsystems TCS SP8)拍摄图像。 -
约7800 野生型A-431细胞中KRT14染色(顶面板)和KRT14敲除A-431的细胞(ab261897)(底面板)。 用100%甲醇固定细胞(5分钟),然后用0.1%Triton X-100渗透5分钟,然后用1%BSA/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸在0.1%PBS-Tween中封闭1小时。 然后将细胞与 约7800 浓度为1ug/ml 约6046 (兔多克隆到β-管蛋白),按1/1000稀释,4 o个 C,然后在室温下用山羊抗小鼠IgG二级抗体(Alexa Fluor)进一步孵育1小时 ® 488) ( ab150117号 )2 ug/ml(以绿色显示)和山羊对兔IgG的二级抗体(Alexa Fluor ® 594) ( 约150080 )2 ug/ml(以红色显示)。 核DNA用DAPI标记为蓝色。 使用共焦显微镜(Leica-Microsystems TCS SP8)拍摄图像。
数据表和文件
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SDS下载 -
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