概述
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产品名称 -
亲代细胞系 希拉牌手表 -
有机体 人类 -
突变描述 通过使用CRISPR/Cas9,外显子2插入1 bp和外显子2中插入选择盒实现敲除 -
通道编号 <20 -
淘汰验证 免疫细胞化学(ICC)、Sanger测序、Western Blot(WB) -
经过测试的应用程序 -
生物安全水平 2 -
一般注意事项 建议控制: 人野生型HeLa细胞系( ab255448年 ). 请注意,剔除细胞株订单中不会自动包含野生型细胞株,如果需要,请使用代码WILDTYPE-TMTK1免费添加推荐的野生型细胞系。 低温保存细胞培养基: 细胞冷冻介质-DMSO无血清培养基,在补充甲基纤维素的MEM中含有8.7%的DMSO。 培养基: DMEM(高糖)+10%FBS 初始处理指南: 到达后,小瓶应储存在液氮气相中,而不是-80°C。 在-80°C下储存可能会导致生存能力丧失。 1.在37°C水浴中解冻小瓶约1-2分钟。 2.将细胞悬液(0.8 mL)转移到含有8.4 mL预热培养基的15 mL/50 mL锥形无菌聚丙烯离心管中,用额外的0.8 mL培养基(总体积10 mL)清洗小瓶以收集剩余细胞,并在室温下以201 x g(rcf)离心5分钟。 10 mL代表建议的最小稀释度。 20 mL代表建议的最大稀释度。 3.将细胞颗粒重新悬浮在5 mL预热培养基中,并使用血细胞仪或其他细胞计数方法进行计数。 根据细胞计数,在适当的细胞培养瓶中以2x10的密度播种细胞 4 细胞/厘米 2 。播种密度仅供参考,应根据各个实验室的时间表进行调整。 4.将培养物在37°C培养箱中与5%CO一起培养 2 。应每天监测培养物。 亚文化指南: 所有播种密度应基于通过既定方法获得的细胞数。 引导播种密度为2x10 4 细胞/厘米 2 建议使用。 如果需要,在继代培养前24小时更换部分培养基可能有助于促进生长。 当细胞达到80-90%的汇合时,应进行传代。
本产品受The Broad Institute、ERS Genomics limited和Sigma-Aldrich Co.LLC的有限使用许可,并采用专利技术开发。 有关许可证和专利的详细信息,请参阅我们的 有限使用许可证 和 专利页 . 我们将提供复苏时增殖的活细胞。
属性
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单元格数量 1 x 10 6 细胞/小瓶,1 mL -
粘附/悬浮 粘附剂 -
组织 子宫颈 -
单元格类型 上皮的 -
疾病 腺癌 -
性别 女性 -
STR分析 釉原蛋白X D5S818:11、12 D13S317:12、13.3 D7S820:8、12 D16S539:9、10 vWA:16、18 TH01:7型 TPOX:8、12 CSF1PO:9、10 -
抗生素耐药性 嘌呤霉素1.00µg/ml -
无支原体 是的 -
储存说明 采用干冰运输。 储存在液氮中。 -
存储缓冲区 成分:8.7%二甲基亚砜、2%纤维素、甲醚 -
研究领域
目标
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功能 ICAM蛋白是白细胞粘附蛋白LFA-1(整合素α-L/β-2)的配体。 在白细胞跨内皮细胞迁移过程中,ICAM1的参与通过ARHGEF26/SGEF和RHOG的激活促进内皮细胞心尖杯的组装。 在鼻病毒感染的情况下,充当病毒的细胞受体。 -
序列相似性 属于免疫球蛋白超家族。 ICAM系列。 包含5个Ig样C2型(免疫球蛋白样)结构域。 -
翻译后 修改 单泛素化,由MARCH9促进并导致内吞。 -
手机定位 膜。 -
UniProt提供的信息
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KO细胞裂解物 -
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应用
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图像
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所有车道: 抗ICAM1抗体[EP1442Y]( 2013年5月13日 )稀释1/1000 车道1: 野生型HeLa细胞裂解物 车道2: ICAM1敲除HeLa细胞裂解物 3号车道: A549细胞裂解物 车道4: Ramos细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 57千帕 观察到的频带大小: 90千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? Western blot假彩色图像:抗ICAM1抗体[EP1442Y]在1/1000稀释度下染色,以绿色显示; 小鼠抗α-管蛋白[DM1A]( 约7291 )以1/20000稀释度进行负荷控制染色,以红色显示。在Western blot中, 约53013 显示与ICAM1特异性结合。 在野生型HeLa细胞裂解液中在90 kDa处观察到一条带,在Icam1敲除细胞系ab261742(敲除细胞裂解液 约256947 ). 在低于90kDa的敲除裂解物通道中观察到的条带(该抗体未观察到)可能代表ICAM1的截断形式。 这还没有进一步研究,基因产物的功能特性也没有确定。 为了生成此图像,分析了野生型和Icam1敲除HeLa细胞裂解物。 首先,样品在SDS-PAGE凝胶上运行,然后转移到硝化纤维素膜上。 TBS-0.1%吐温中3%牛奶中的膜被堵塞 ® 20(TBS-T),然后在4°C下与一级抗体孵育过夜。 在TBS-T中清洗四次斑点,在室温下与二级抗体孵育1小时,再次清洗四次,然后成像。 使用的二级抗体是山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸收床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸收床( 约216776 )稀释1/20000。 -
所有车道: 抗ICAM1抗体[EPR4776]( 澳大利亚银行109361 )稀释1/1000 车道1: 野生型HeLa细胞裂解物 车道2: ICAM1敲除HeLa细胞裂解物 3号车道: A549细胞裂解物 车道4: Ramos细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 57千帕 观察到的频带大小: 90千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? Western blot假彩色图像:稀释1/1000的抗ICAM1抗体[EPR4776]染色,以绿色显示; 小鼠抗α-管蛋白[DM1A]( 约7291 )以1/20000稀释度进行负荷控制染色,以红色显示。在Western blot中, 澳大利亚银行109361 显示与ICAM1特异结合。 在野生型HeLa细胞裂解液中在90 kDa处观察到一条带,在Icam1敲除细胞系ab261742(敲除细胞裂解液 约256947 ). 在低于90kDa的敲除裂解物通道中观察到的条带可能代表ICAM1的截断形式。 这还没有进一步研究,基因产物的功能特性也没有确定。 为了生成此图像,分析了野生型和Icam1敲除HeLa细胞裂解物。 首先,样品在SDS-PAGE凝胶上运行,然后转移到硝化纤维素膜上。 TBS-0.1%吐温中3%牛奶中的膜被堵塞 ® 20(TBS-T),然后在4°C下与一级抗体孵育过夜。 在TBS-T中清洗四次斑点,在室温下与二级抗体孵育1小时,再次清洗四次,然后成像。 使用的二级抗体是山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸收床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸收床( 约216776 )稀释1/20000。 -
4%对甲醛固定、0.1%Triton X-100渗透ICAM1 KO-HeLa细胞(ab261742)的免疫荧光分析 约282575 稀释1/500(1.082µg/ml),然后 约150081 山羊抗狂犬病IgG H&L(Alexa Fluor ® 488)预吸附抗体,稀释度为1/1000(绿色)。 共聚焦图像显示野生型HeLa细胞中有膜染色,而ICAM1敲除的HeLa电池中没有染色。 约195889年 抗α-微管蛋白小鼠单克隆抗体-微管标记物(Alexa Fluor ® 594)用于在1/200稀释度下对微管蛋白进行复染(红色)。 核染色为DAPI(蓝色)。 仅二级抗体对照:二级抗体为 约150081 山羊抗狂犬病IgG H&L(Alexa Fluor ® 488)以1/1000稀释度预吸附。 -
所有车道: 车道1: 野生型HeLa(人宫颈腺癌上皮细胞)全细胞裂解物 车道2: ICAM1敲除HeLa全细胞裂解物 3号车道: Ramos(人类伯基特淋巴瘤B淋巴细胞)全细胞裂解物 次要 所有车道: 山羊抗狂犬病IgG H&L(IRDye®800CW)( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye®680RD)( 约216776 )稀释度为1/10000 预测的带宽大小: 57千帕 阻隔和稀释缓冲液和浓度:截留 ® (TBS)用等体积0.1%TBS稀释的封闭缓冲液 1-3车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 约282575 在90kDa时观察到。 红色-加载控制 约8245 在36 kDa时观察到。 约282575 Western blot显示,抗ICAM1抗体[EPR24639-3]与野生型Hela细胞中的ICAM1反应。 当敲除细胞系ab261742(敲除细胞裂解物 约256947 )已使用。 对野生型和ICAM1敲除样品进行SDS-PAGE分析。 约282575 和抗GAPDH抗体[6C5]-负载对照( 约8245 )在4点孵化 o个 C隔夜,稀释度分别为1000分之一和20000分之一。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸附床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸附( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以万分之一的比例稀释1小时。 -
所有车道: 抗ICAM1抗体[EP1442Y]( 约53013 )稀释1/1000 车道1: 野生型HeLa细胞裂解物 车道2: ICAM1敲除HeLa细胞裂解物 3号车道: Raji细胞裂解物 车道4: Ramos细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 次要 所有车道: 山羊抗兔IgG H&L(IRDye®800CW)预吸附( ab216773号 )稀释度为1/10000 预测的带宽大小: 57千帕 1-4车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 约53013 在90 kDa时观察到。 红色-加载控制 约8245 在36 kDa时观察到。 约53013 抗ICAM1抗体[EP1442Y]显示与野生型HeLa细胞中的ICAM1特异性反应。 敲除细胞系ab261742(敲除细胞裂解物 约256947 )已使用。 对野生型和ICAM1敲除样品进行SDS-PAGE分析。 约53013 和抗GAPDH抗体[6C5]-负载对照( 约8245 )分别在4°C下以1/1000稀释度和1/20000稀释度培养过夜。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸附床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸附床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
等位基因1:选择盒插入外显子2。 -
等位基因2:外显子2插入1 bp。
数据表和文件
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SDS下载 -
数据表下载