主要功能和细节
一次性90分钟协议 灵敏度:42 pg/ml 范围:0.23 ng/ml-15 ng/ml 样品类型:细胞培养提取物 检测方法:比色法 分析类型:三明治(定量) 反应对象:人类
概述
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产品名称 -
检测方法 比色法 -
精密度 批内分析 样品 n个 平均值 标准偏差 变异系数% HeLa裂解物 5 4.3% 内部通话 样品 n个 平均值 标准偏差 变异系数% HeLa裂解物 三 7% -
样品类型 细胞培养提取物 -
分析类型 三明治(定量) -
敏感 42微微克/毫升 -
范围 0.23纳克/毫升- 15纳克/毫升 -
恢复 样品特定回收率 样品类型 平均% 范围 细胞培养基 112 94% - 129% 胎牛血清 109 102% - 120% 牛血清白蛋白 97 93% - 106% -
化验时间 1小时 3000万 -
检测持续时间 一步分析法 -
物种反应性 与以下物质反应: 人类 -
产品概述 人HIF1a ELISA试剂盒(ab171577)是一种单洗90分钟夹心ELISA,设计用于定量测量人细胞提取物中的HIF1a蛋白。 它使用我们专有的SimpleStep ELISA®技术。 以42 pg/ml的灵敏度定量人HIF1a。 SimpleStep ELISA®技术使用与亲和标签结合的捕获抗体,亲和标签被用于覆盖SimpleStepELISA®板的单克隆抗体识别。 这种夹心ELISA方法允许在一个步骤中形成抗体分析夹心复合物,显著缩短了分析时间。 有关更多详细信息,请参阅图像部分中的SimpleStep ELISA®协议摘要。 我们的SimpleStep ELISA®技术具有以下优点: -单次刷洗方案将分析时间缩短至90分钟或更短 -高级抗体的高灵敏度、特异性和再现性 -在生物样品中充分验证 -96块钢板可分解成12 x 8个井带 384孔单步ELISA®微孔板( 约203359 )可作为SimpeStep ELISA®试剂盒提供的96-well微孔板的替代品使用。 -
笔记 低氧诱导因子1-α(HIF1α)是一种组成性表达的转录因子,在正常氧气张力下降解,但在氧气限制(缺氧)时稳定。 在缺氧条件下,稳定的HIF1α转位到细胞核,并促进一系列基因的转录,使细胞能够适应缺氧。 HIF1α介导的低氧反应的方面包括促进血管生成和从有氧呼吸转变为无氧糖酵解。 许多HIF1α应答基因编码促进糖酵解和/或抑制氧化磷酸化的蛋白质(称为Warburg效应)。 当前癌症研究的一个令人兴奋和发展中的领域是研究HIF介导的代谢重编程如何促进肿瘤生长和存活。 在大多数情况下,需要稳定HIF1α才能进行测量(在大多数细胞系中,非缺氧环境中HIF1α的稳态水平过低)。 这可以通过(a)创造缺氧环境(例如使用缺氧室)或(b)使用模拟缺氧的化学处理(例如氯化钴或去铁胺)来实现。 本试验方案中的样品数据是使用去铁胺(DFO)生成的。 DFO是一种铁螯合剂,可破坏脯氨酰羟化酶的功能,脯氨酸羟化酶可在常氧条件下降解HIF1α。 通过破坏降解HIF1α的酶,DFO增加了HIF1α蛋白的丰度。 Abcam没有也不打算为客户使用含有欧洲授权清单(附件十四)物质的产品申请REACH授权。 我们的客户有责任检查REACH授权和任何其他相关授权在其预期用途中应用的必要性。 -
站台 微孔板
属性
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储存说明 储存于+4°C。 请参阅协议。 -
组件 1 x 96测试 10X人HIF1a捕获抗体 1 x 600微升 10X人HIF1a检测抗体 1 x 600微升 10X清洗缓冲液PT(ab206977) 1 x 20毫升 50X细胞提取增强剂溶液(ab193971) 1 x 1毫升 5X细胞提取缓冲液PTR(ab193970) 1 x 10毫升 抗体稀释液5B 1 x 6毫升 HIF1a人冻干蛋白 2瓶 平板密封件 1台 样品稀释剂NS(ab193972) 1 x 12毫升 单步预涂96孔微孔板(ab206978) 1台 停止解决方案 1 x 12毫升 TMB开发解决方案 1 x 12毫升 -
研究领域 -
功能 作为缺氧适应性反应的主转录调节器发挥作用。 在缺氧条件下,激活40多个基因的转录,包括促红细胞生成素、葡萄糖转运蛋白、糖酵解酶、血管内皮生长因子和其他蛋白产物增加氧气输送或促进代谢适应缺氧的基因。 在胚胎血管生成、肿瘤血管生成和缺血性疾病的病理生理学中发挥重要作用。 与靶基因启动子缺氧反应元件(HRE)内的核心DNA序列5'-[AG]CGTG-3'结合。 激活需要招募转录辅激活物,如CREBPB和EP300。 活动通过与NCOA1或NCOA2两者的交互增强。 与氧化还原调节蛋白APEX的相互作用似乎激活了CTAD,并增强了NCOA1和CREBBP的激活。 -
组织特异性 在大多数组织中表达,在肾脏和心脏中表达水平最高。 由于肿瘤内缺氧以及编码癌蛋白和抑癌基因突变,在大多数常见人类癌症及其转移瘤中过度表达。 -
序列相似性 包含1个基本螺旋-环-螺旋(bHLH)域。 包含1个PAC(PAS-associated C-terminal)域。 包含2个PAS(PER-ARNT-SIM)域。 -
域 包含两个独立的C末端交易激活域,NTAD和CTAD,它们协同工作。 它们的转录活性受到干预抑制域(ID)的抑制。 -
翻译后 修改 在常氧条件下,通过EGLN1/PHD1和EGLN2/PHD2在氧依赖降解域(ODD)的Pro-402和Pro-564上羟基化。 EGLN3/PHD3也显示为羟基化Pro-564。 羟基脯氨酸促进与VHL的相互作用,启动快速泛素化和随后的蛋白酶体降解。 USP20脱去泛素。 缺氧时,脯氨酸羟基化受损,泛素化减弱,导致稳定。 在常氧条件下,HIF1AN在Asn-803上羟基化,从而消除与CREBBP和EP300的相互作用并阻止转录激活。 这种羟基化被Cu/Zn-亲水体Clioquinol抑制。 Cys-800的S-亚硝基化可能是HIF-1复合物转录活性所必需的p300共激活因子募集增加的原因。 DNA结合需要磷酸化。 磺酰化; 缺氧条件下SUMO1。 Sumoylation通过与RWDD3的相互作用而增强。 SENP1的去甲酰化导致HIF1A稳定性和转录活性增加。 泛素化; 在常压下,在羟基化和与VHL相互作用后。 Lys-532似乎是泛素化的主要位点。 Clioquinol是Cu/Zn的亲合物,通过阻止Asn-803的羟基化来抑制泛素化。 天冬酰胺的铁和2-酮戊二酸依赖性3-羟基化在HIF-CTAD结构域内具有(S)立体特异性。 -
手机定位 细胞质。 核心。 常氧状态下的细胞质,缺氧反应中的核移位。 低氧条件下,在细胞核中与SUMO1进行结肠酸化。 -
UniProt提供的信息 -
替代名称 ARNT相互作用蛋白 ARNT相互作用蛋白 碱性螺旋-环-螺旋PAS蛋白MOP1
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图像
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SimpleStep ELISA技术允许在一个步骤中形成抗体-抗原复合物,将检测时间缩短至90分钟。 将样品或标准品和抗体混合物一次性添加到微孔中,培养、清洗并添加最终基质。 有关详细的分步指南,请参阅协议。 -
HIF1阿尔法标准曲线示例。 绘制了背景数据值(平均值+/-SD)。 -
在分析的工作范围内滴定HeLa-DFO提取物。 绘制了从重复测量中减去的背景数据。 为了诱导HIF1α蛋白水平,用500µM去甲氧胺(DFO)处理HeLa细胞24小时。 -
去铁胺(DFO)对HeLa细胞中HIF1α的剂量依赖性诱导。 HeLa细胞在96孔组织培养板中培养,并且未经处理或暴露于不同剂量的DFO 24小时。 带有标准偏差的原始数据是根据一式三份的测量结果绘制的。 -
通过ELISA(barchart)和western blot(top)比较HeLa细胞提取物中HIF1α的表达(有无DFO处理)。 显示了从三种加载浓度中减去背景OD450 nm的数据。 HIF1α检测抗体用于印迹与ELISA分析的裂解物相同的裂解物(40µg负载/泳道)。 包括GAPDH印迹以显示每个裂解物的相对负载。 在HeLa细胞系中,需要DFO处理才能通过ELISA和western blot检测HIF1α蛋白。
协议
数据表和文件
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SDS下载 -
数据表下载
工具书类 (17)
法蒂玛K 等。 香芹醇通过抑制鸟氨酸脱羧酶和透明质酸酶活性阻止下咽癌细胞的增殖。 前螺母 9:857256 (2022). 公共医学:35464036 戈尔奇卡L 等。 低氧张力对胎盘溶质载体和ABC转运体的表达有不同的调节作用。 FEBS信函 595:811-827 (2021). 公共医学:32978975 康HT 等。 急性和慢性肝损伤动物模型中骨髓间充质干细胞的宏胶囊化。 胃肠肝素杂志 36:1997-2007 (2021). 公共医学:33554346 冯娥 等。 抑制HMGB1可能通过PI3K/AKT信号通路增强紫杉醇对心肌细胞的保护作用。 伊朗药物研究杂志 20:316-332 (2021). 公共医学:34567165 Lee山猫 等。 人胚胎干细胞衍生间充质干细胞(hES-MSCs)的最佳缺氧预处理及其特性。 国际J干细胞 14:221-228 (2021). 公共医学:33632987