概述
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产品名称 -
亲代细胞系 希拉牌手表 -
有机体 人类 -
突变描述 利用CRISPR/Cas9实现基因敲除,外显子1中4 bp缺失和外显子1中插入选择盒 -
通道编号 <20 -
淘汰验证 Sanger测序,Western Blot(WB) -
经过测试的应用程序 -
生物安全等级 2 -
一般注意事项 建议控制: 人野生型HeLa细胞系( ab255448年 ). 请注意,剔除细胞株订单中不会自动包含野生型细胞株,如果需要,请使用代码WILDTYPE-TMTK1免费添加推荐的野生型细胞系。 低温保存细胞培养基: 细胞冷冻培养基DMSO无血清培养基,在补充有甲基纤维素的MEM中含有8.7%DMSO。 培养基: DMEM(高糖)+10%FBS 初始处理指南: 到达后,小瓶应储存在液氮气相中,而不是-80°C。 在-80°C下储存可能会导致生存能力丧失。 1.在37°C水浴中解冻小瓶约1-2分钟。 2.将细胞悬液(0.8 mL)转移到含有8.4 mL预热培养基的15 mL/50 mL锥形无菌聚丙烯离心管中,用额外的0.8 mL培养基(总体积10 mL)清洗小瓶以收集剩余细胞,并在室温下以201 x g(rcf)离心5分钟。 10 mL代表建议的最小稀释度。 20 mL代表建议的最大稀释度。 3.将细胞颗粒重新悬浮在5 mL预热培养基中,并使用血细胞仪或其他细胞计数方法进行计数。 根据细胞计数,将种子细胞置于密度为2x10的适当细胞培养瓶中 4 细胞/厘米 2 。播种密度仅供参考,应根据各个实验室的时间表进行调整。 4.在37°C培养箱中用5%CO培养 2 。应每天监测培养物。 亚文化指南: 所有播种密度应基于通过既定方法获得的细胞数。 引导播种密度为2x10 4 细胞/厘米 2 建议使用。 如果需要,在继代培养前24小时更换部分培养基可能有助于促进生长。 当细胞达到80-90%的融合时,应使其传代。
本产品受The Broad Institute、ERS Genomics limited和Sigma-Aldrich Co.LLC的有限使用许可,并采用专利技术开发。 有关许可证和专利的详细信息,请参阅我们的 有限使用许可证 和 专利页 . 我们将提供复苏时增殖的活细胞。
属性
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单元格数量 1 x 10 6 细胞/小瓶,1 mL -
粘附/悬浮 粘附剂 -
组织 子宫颈 -
单元格类型 上皮的 -
疾病 腺癌 -
性别 女性 -
STR分析 釉原蛋白X D5S818:11、12 D13S317:12、13.3 D7S820:8、12 D16S539:9、10 vWA:16、18 TH01:7型 TPOX:8、12 CSF1PO:9、10 -
无支原体 是的 -
储存说明 采用干冰运输。 储存在液氮中。 -
存储缓冲区 成分:8.7%二甲基亚砜、2%纤维素、甲醚 -
研究领域
目标
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功能 与叶酸和还原叶酸衍生物结合,并介导5-甲基四氢叶酸传递到细胞内部。 -
组织特异性 仅在上皮来源的组织中表达。 恶性组织中的表达增加。 表达于肾、肺和小脑。 -
参与疾病 FOLR1缺陷是大脑叶酸转运缺陷(NCFTD)导致神经变性的原因[MIM:613068]。 NCFTD是一种常染色体隐性遗传疾病,由生命早期脑特异性叶酸缺乏引起。 发病于婴儿晚期,伴有严重的发育衰退、运动障碍、癫痫和脑白质营养不良。 注意=对这种疾病的识别和诊断至关重要,因为叶酸治疗可以逆转临床症状,改善大脑异常和功能。 -
序列相似性 属于叶酸受体家族。 -
翻译后 修改 存在八个二硫键。 通过GPI锚的切割或/和金属蛋白酶催化的蛋白水解,分泌形式衍生自膜结合形式。 -
手机定位 细胞膜。 保密。 -
UniProt提供的信息
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KO细胞裂解物 -
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应用程序
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图像
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测序色谱图显示外显子1的序列编辑 -
所有车道: 抗叶酸结合蛋白/FBP抗体( ab67422号 )稀释1/500 车道1: 野生型HeLa细胞裂解物 车道2: FOLR1敲除HeLa细胞裂解物 3号车道: JAR细胞裂解物 车道4: MDA-MB-231细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 30千Da 观察到的频带大小: 38千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? 1-4车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- ab67422号 在38 kDa时观察到。 红色负载控制, 约7291 在52 kDa时观察到。 ab67422号 在野生型HeLa细胞中,抗叶酸结合蛋白/FBP抗体与叶酸结合蛋白质/FBP特异性反应。 当敲除细胞系ab264921(敲除细胞裂解物 约257270 )已使用。 野生型和叶酸结合蛋白/FBP敲除样品进行SDS-PAGE分析。 第67422页 和抗α-管蛋白抗体[DM1A]-负荷控制( 约7291 )分别在4°C、1/500稀释度和1/20000稀释度下培养过夜。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸附床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸附床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以万分之一的比例稀释1小时。 -
所有车道: 抗叶酸结合蛋白/FBP抗体[EPR20277]( 约221543 )稀释1/1000 车道1: 野生型HeLa细胞裂解物 车道2: FOLR1敲除HeLa细胞裂解物 3号车道: JAR细胞裂解物 车道4: MDA-MB-231细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 30千Da 观察到的频带大小: 38千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? 1-4车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 约221543 在38kDa处观察到。 红色负载控制, 约7291 在52 kDa时观察到。 约221543 在野生型HeLa细胞中,抗叶酸结合蛋白/FBP抗体[EPR20277]与叶酸结合蛋白质/FBP特异性反应。 当敲除细胞系ab264921(敲除细胞裂解物 约257270 )已使用。 野生型和叶酸结合蛋白/FBP敲除样品进行SDS-PAGE分析。 约221543 和抗α-管蛋白抗体[DM1A]-负荷控制( 约7291 )分别在4°C下以1/1000稀释度和1/20000稀释度培养过夜。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸附床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸附床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以万分之一的比例稀释1小时。 -
等位基因1:外显子1中4 bp缺失。 -
等位基因2:选择盒插入外显子1。 -
FOLR1敲除HeLa细胞的代表性图像,低融合度和高融合度实例(分别为左上和右上)和野生型HeLa细胞,低融合度和高融合度(分别为左下和右下)显示典型的粘附性上皮样形态。 使用EVOS XL Core显微镜以10倍放大率拍摄图像。
数据表和文件
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SDS下载 -
数据表下载