概述
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产品名称 -
亲代细胞系 A431型 -
有机体 人类 -
突变描述 CRISPR/Cas9实现的淘汰; X=2 bp缺失; 移架:99.58% -
通道编号 <20 -
淘汰验证 免疫细胞化学(ICC)、下一代测序(NGS)、蛋白质印迹(WB) -
经过测试的应用程序 -
生物安全水平 1 -
一般注意事项 建议控制: 人野生型A-431细胞系( 约263975 ). 请注意,剔除细胞株订单中不会自动包含野生型细胞株,如果需要,请使用代码WILDTYPE-TMTK1免费添加推荐的野生型细胞系。 低温保存细胞培养基: 细胞冷冻介质-DMSO无血清培养基,在补充甲基纤维素的MEM中含有8.7%的DMSO。 培养基: DMEM(高糖)+10%FBS 初始处理指南: 到达后,小瓶应储存在液氮气相中,而不是-80°C。 在-80°C下储存可能会导致生存能力丧失。 1.将小瓶在37°C水浴中解冻约1-2分钟。 2.将细胞悬液(0.8 mL)转移到含有8.4 mL预热培养基的15 mL/50 mL锥形无菌聚丙烯离心管中,用额外的0.8 mL培养基(总体积10 mL)清洗小瓶以收集剩余细胞,并在室温下以201 x g(rcf)离心5分钟。 10 mL代表建议的最小稀释度。 20 mL代表建议的最大稀释度。 3.将细胞颗粒重新悬浮在5 mL预热培养基中,并使用血细胞仪或其他细胞计数方法进行计数。 根据细胞计数,将种子细胞置于密度为2x10的适当细胞培养瓶中 4 细胞/厘米 2 。播种密度仅供参考,应根据各个实验室的时间表进行调整。 4.在37°C培养箱中用5%CO培养 2 。应每天监测培养物。 亚文化指南: 所有播种密度应基于通过既定方法获得的细胞数。 引导播种密度为2x10 4 细胞/厘米 2 建议使用。 如果需要,在继代培养前24小时更换部分培养基可能有助于促进生长。 当细胞达到80-90%的汇合时,应进行传代。
本产品受The Broad Institute和ERS Genomics limited的有限使用许可,并采用专利技术开发。 有关有限使用许可证和相关专利的详细信息,请参阅我们的 有限使用许可证 和 专利页 . 我们将提供复苏时增殖的活细胞。
属性
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单元格数量 1 x 10 6 细胞/小瓶,1 mL -
粘附/悬浮 粘附剂 -
组织 皮肤 -
单元格类型 上皮的 -
疾病 表皮样癌 -
性别 女性 -
无支原体 是的 -
储存说明 采用干冰运输。 储存在液氮中。 -
存储缓冲区 成分:8.7%二甲基亚砜、2%纤维素、甲醚 -
研究领域
目标
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功能 可能作为肠上皮细胞(IECs)和粘膜上皮内淋巴细胞(IELs)之间的物理亲同性相互作用分子,提供免疫屏障,作为抵抗粘膜感染的第一道防线。 在胚胎干细胞增殖和分化中发挥作用。 上调FABP5、MYC和细胞周期蛋白A和E的表达。 -
组织特异性 由未分化而非分化的胚胎干细胞(ESC)高选择性表达。 一旦ESC分化(蛋白质水平),水平迅速降低。 几乎在所有上皮细胞膜上表达,但在中胚层或神经细胞膜上不表达。 发现于腺癌表面。 -
参与疾病 EPCAM中的缺陷是5型腹泻(DIAR5)的原因[MIM:613217]。 这是一种婴儿顽固性腹泻,特征是绒毛萎缩和无炎症,肠上皮细胞异型增生表现为十二指肠和空肠的局灶上皮簇。 EPCAM缺陷是遗传性非息肉病8型结直肠癌(HNPCC8)的原因[MIM:613244]。 HNPCC是一种与癌症易感性显著增加相关的疾病。 其特征是家族易患早发性结直肠癌(CRC)和胃肠道、泌尿系和女性生殖道的结肠外肿瘤。 据报道,HNPCC是西方世界最常见的遗传性结直肠癌。 临床上,HNPCC通常分为两个亚组。 I型的特点是遗传性易患结直肠癌,发病年龄小,在近端结肠中观察到癌症。 II型的特征是某些组织(如子宫、卵巢、乳腺、胃、小肠、皮肤和喉部以及结肠)的癌症风险增加。 经典型HNPCC的诊断基于阿姆斯特丹标准:3个或更多受结直肠癌影响的亲属,其中一个是其他两个的一级亲属; 2代或2代以上受影响; 一个或多个在50岁之前出现的结直肠癌; 排除遗传性息肉病综合征。 术语“疑似HNPCC”或“不完整HNPCC“可用于描述不符合或仅部分符合阿姆斯特丹标准,但强烈怀疑结肠癌遗传基础的家庭。 注=HNPCC8是由于EPCAM的3质点外显子和MSH2上游的基因间区域的杂合缺失导致的,导致表达EPCAM组织中MSH2的转录通读和表观遗传沉默。 -
序列相似性 属于EPCAM家族。 包含1个甲状腺球蛋白1型结构域。 -
翻译后 修改 与自体正常上皮相比,癌组织中高糖基化。 Asn-198的糖基化对蛋白质稳定性至关重要。 -
细胞定位 侧细胞膜。 细胞连接>紧密连接。 在侧细胞膜和紧密连接处与CLDN7共放大。 -
UniProt提供的信息
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KO细胞裂解物 -
相关产品 抗EpCAM抗体[E144]-BSA和无叠氮化合物( 约183178 ) 抗EpCAM抗体[VU-1D9]( 187372年 ) 抗EpCAM抗体[VU-1D9]-BSA和无叠氮化合物( 约212579 ) 抗EpCAM抗体[EPR20532-222]( 约213500 ) 抗EpCAM抗体[EPR20532-225]( 约223582 ) 抗EpCAM抗体[4A7]-C末端( 约224826 ) 抗EpCAM抗体[EPR20532-225]-无牛血清白蛋白和叠氮化物( 约225894 ) 抗细胞角蛋白19抗体[EPR1579Y]-BSA和无叠氮化合物( ab232566号 ) 抗EpCAM抗体[E144]( 约32392 ) 抗EpCAM抗体[323/A3]( ab85987 )
应用
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图像
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WT蛋白Cys47后2 bp缺失 -
所有车道: 抗EpCAM抗体[E144]( 约32392 )稀释1/2000 车道1: 野生型A431细胞裂解物 车道2: EPCAM敲除A431细胞裂解物 车道3: MCF7(人乳腺癌细胞系)全细胞裂解物 车道4: HeLa(宫颈腺癌人上皮细胞系)全细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 观察到的频带大小: 40千Da 为什么实际的频带大小与预测的不同? 1-4车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 约32392 在40 kDa时观察到。 红色-加载控制 约7291 (在55kDa下观察到小鼠抗α-管蛋白[DM1A]。 约32392 western blot显示与野生型A-431细胞中的EpCAM反应,在EpCAM-敲除细胞系ab261902(敲除细胞裂解物 约263942 ). 对野生型和EpCAM敲除的A-431细胞裂解物进行SDS-PAGE。 用荧光蛋白印迹(TBS)封闭溶液封闭膜,然后用 约32392 和 约7291 (小鼠抗α-微管蛋白[DM1A]在4°C下过夜,稀释度分别为1/2000和1/2000。将印迹与山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸收床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸收床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
流式细胞术重叠直方图显示野生型A-431(绿线)和EPCAM敲除的A-431细胞(ab261902) 约223582 (红线)。 细胞在含有10%正常山羊血清的1x PBS中孵育,以阻断非特异性蛋白-蛋白质相互作用,然后再接种抗体( ab223582年 )(1x10个 6 100μl,0.2μg/ml),在4°C下保持30分钟。 二级抗体山羊抗兔IgG H&L(Alexa Fluor ® 488,预吸附)( 约150081 )于2000年1月在4°C下使用30分钟。 同型对照抗体为兔IgG(单克隆)( 约172730 )在与主要抗体相同的浓度和条件下使用(野生型A-431-黑线;EPCAM敲除A-431–灰线)。 未标记样本也用作对照(为了简单起见,未显示此行)。 使用50 mW蓝光激光器(488nm)和525/40带通滤波器采集了超过5000个事件。 -
CRISPR/Cas9实现的淘汰; X=2 bp缺失; 移架:99.58% -
ab187372年 野生型A-431细胞(顶面)和EpCAM敲除A-431的细胞(ab261902)(底面)中的EpCAM染色。 用4%多聚甲醛固定细胞(10分钟),然后用0.1%PBS吐温透化5分钟,然后用1%BSA/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸在0.1%PBS吐温中封闭1小时。 然后将细胞与 ab187372年 0.1ug/ml浓度和 约6046 (兔多克隆到β-管蛋白),按1/1000稀释,4 o个 C,然后在室温下用山羊抗小鼠IgG二级抗体(Alexa Fluor)进一步孵育1小时 ® 488) ( ab150117号 )2 ug/ml(以绿色显示)和山羊对兔IgG的二级抗体(Alexa Fluor ® 594) ( 约150080 )2 ug/ml(以红色显示)。 核DNA用DAPI标记为蓝色。 这种抗体的表现与100%甲醇固定相似。 使用高含量分析仪(Operetta CLS、Perkin Elmer)采集图像,显示单个共焦截面。 -
所有车道: 抗EpCAM抗体[EPR20532-222]( 约213500 )稀释度为1/1000 车道1: 野生型A431全细胞裂解物 车道2: EPCAM敲除A431全细胞裂解物 车道3: HeLa全细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 1-3车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 约213500 在40 kDa时观察到。 红色-装载控制, 约7291 (在55kDa下观察到小鼠抗α-管蛋白[DM1A]。 约213500 Western blot显示与野生型A-431细胞中的EpCAM反应当EpCAM-敲除细胞系ab261902(敲除细胞裂解物 约263942 )已使用。 对野生型A-431和EpCAM敲除细胞裂解物进行SDS-PAGE。 TBS-T(0.1%吐温)中3%牛奶中的膜被堵塞 ® )在与孵育之前 约213500 和 约7291 (小鼠抗α-管蛋白[DM1A]在4°C下过夜,稀释率分别为1/1000和1/20000。用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸收床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸收床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
所有车道: 抗EpCAM抗体[4A7]-C末端( 约224826 )稀释1/400 车道1: 野生型A-431(人表皮样癌细胞系)全细胞裂解物 车道2: EPCAM敲除物A-431(人表皮样癌细胞系)全细胞裂解物 车道3: MCF7(人乳腺癌细胞系)全细胞裂解物 车道4: HeLa(宫颈腺癌人上皮细胞系)全细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 观察到的频带大小: 35千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? 1-4车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- ab224826年 在35 kDa时观察到。 红色-装载控制, 约52866 (兔抗α-管蛋白抗体[EP1332Y])在55kDa下观察到。 约224826 Western blot显示与野生型A-431细胞中的EpCAM反应当EpCAM-敲除细胞系ab261902(敲除细胞裂解物 约263942 )已使用。 对野生型A-431和EpCAM敲除细胞裂解物进行SDS-PAGE。 TBS-T(0.1%吐温)中3%牛奶中的膜被堵塞 ® )孵育前 约224826 和 约52866 (兔抗α-管蛋白抗体[EP1332Y])在4°C下过夜,分别以1/400和1/20000稀释。 用山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸收床( 约216772 )和山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸收床( ab216777号 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
所有车道: 抗EpCAM抗体[EPR20532-225]( 约223582 )稀释度为1/1000 车道1: 野生型A-431(人表皮样癌细胞系)全细胞裂解物 车道2: EPCAM敲除物A-431(人表皮样癌细胞系)全细胞裂解物 车道3: HeLa(宫颈腺癌人上皮细胞系)全细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 1-3车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 约223582 在40 kDa时观察到。 红色-装载控制, 约7291 (在55kDa下观察到小鼠抗α-管蛋白[DM1A]。 约223582 Western blot显示与野生型A-431细胞中的EpCAM反应当EpCAM-敲除细胞系ab261902(敲除细胞裂解物 约263942 )已使用。 对野生型A-431和EpCAM敲除细胞裂解物进行SDS-PAGE。 TBS-T(0.1%吐温)中3%牛奶中的膜被堵塞 ® )孵育前 约223582 和 约7291 (小鼠抗α-管蛋白[DM1A]在4°C下过夜,稀释率分别为1/1000和1/20000。用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸收床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸收床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
ab85987 对野生型A-431细胞(上图)和EpCAM敲除A-431细胞(ab261902)中的EpCAM进行染色(下图)。 用4%多聚甲醛固定细胞(10分钟),然后用0.1%PBS-Tween渗透5分钟,然后用1%BSA/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸在0.1%PBS-Tween中封闭1小时。 然后将细胞与 ab85987 0.1ug/ml浓度和 约6046 (兔多克隆到β-管蛋白)在4℃下以1/1000稀释过夜,然后在室温下用山羊抗小鼠IgG二级抗体(Alexa Fluor ® 488) ( ab150117号 )2 ug/ml(以绿色显示)和山羊对兔IgG的二级抗体(Alexa Fluor ® 594)( 约150080 )2 ug/ml(以红色显示)。 核DNA用DAPI标记为蓝色。 该抗体使用100%甲醇固定进行类似的操作。 使用高含量分析仪(Operetta CLS、Perkin Elmer)采集图像,显示单个共焦截面。 -
约223582 野生型A-431细胞(顶面)和EpCAM敲除A-431的细胞(ab261902)(底面)中的EpCAM染色。 用4%多聚甲醛固定细胞(10分钟),然后用0.1%PBS-Tween渗透5分钟,然后用1%BSA/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸在0.1%PBS-Tween中封闭1小时。 然后将细胞与 约223582 0.1ug/ml浓度和 约7291 (小鼠单克隆抗体到α-管蛋白),以1/1000稀释度隔夜,4 o个 C,然后在室温下用山羊的兔IgG二级抗体(Alexa Fluor)进一步孵育1小时 ® 488) ( 约150081 )2 ug/ml(以绿色显示)和山羊对小鼠IgG的二级抗体(Alexa Fluor ® 594) ( ab150120型 )2 ug/ml(以红色显示)。 核DNA用DAPI标记为蓝色。 这种抗体的表现与100%甲醇固定相似。 使用高含量分析仪(Operetta CLS、Perkin Elmer)采集图像,显示单个共焦截面。 -
ab187372年 野生型A-431细胞(顶面)和EpCAM敲除A-431的细胞(ab261902)(底面)中的EpCAM染色。 用100%甲醇固定细胞(5分钟),然后用0.1%PBS-Tween渗透5分钟,然后用1%BSA/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸在0.1%PBS-Tween中封闭1小时。 然后将细胞与 ab187372年 浓度为0.5μg/ml 约6046 (兔多克隆到β-管蛋白)在4°C下以1/1000稀释过夜,然后在室温下用山羊抗小鼠IgG二级抗体(Alexa Fluor ® 488) ( ab150117号 )以2μg/ml(绿色显示)和山羊对兔IgG的二级抗体(Alexa Fluor ® 594)( 约150080 )浓度为2μg/ml(以红色显示)。 核DNA用DAPI标记为蓝色。 使用共焦显微镜(Leica-Microsystems TCS SP8)拍摄图像。 -
约223582 野生型A-431细胞(顶面)和EpCAM敲除A-431的细胞(ab261902)(底面)中的EpCAM染色。 用100%甲醇固定细胞(5分钟),然后用0.1%PBS-Tween渗透5分钟,然后用1%BSA/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸在0.1%PBS-Tween中封闭1小时。 然后将细胞与 约223582 稀释1/5000 约7291 (鼠抗α-管蛋白单克隆抗体)在4°C下以1/1000稀释过夜,然后在室温下用山羊抗兔IgG二级抗体(Alexa Fluor ® 488) ( 约150081 )以2μg/ml(绿色显示)和山羊对小鼠IgG的二级抗体(Alexa Fluor ® 594)( ab150120型 )浓度为2μg/ml(以红色显示)。 核DNA用DAPI标记为蓝色。 使用共焦显微镜(Leica-Microsystems TCS SP8)拍摄图像。 -
ab85987 野生型A-431细胞(顶面)和EpCAM敲除A-431的细胞(ab261902)(底面)中的EpCAM染色。 用100%甲醇固定细胞(5分钟),然后用0.1%PBS-Tween渗透5分钟,然后用1%BSA/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸在0.1%PBS-Tween中封闭1小时。 然后将细胞与 ab85987 浓度为0.5μg/ml 约6046 (兔β-微管蛋白多克隆),在4°C下稀释1/1000过夜,然后在室温下与山羊抗小鼠IgG二级抗体(Alexa Fluor ® 488) ( ab150117号 )以2μg/ml(绿色显示)和山羊对兔IgG的二级抗体(Alexa Fluor ® 594)( 约150080 )浓度为2μg/ml(以红色显示)。 核DNA用DAPI标记为蓝色。 使用共焦显微镜(Leica-Microsystems TCS SP8)拍摄图像。 -
流式细胞术重叠直方图显示野生型A-431(绿线)和EPCAM敲除的A-431细胞(ab261902) ab187372年 (红线)。 细胞在含有10%正常山羊血清的1x PBS中孵育,以阻断非特异性蛋白-蛋白质相互作用,然后再接种抗体( ab187372年 )(1x10个 6 100μl,0.2μg/ml),在4°C下保持30分钟。 二级抗体山羊抗鼠IgG H&L(Alexa Fluor ® 488,预吸附)( ab150117号 )于2000年1月在4°C下使用30分钟。 同种对照抗体为小鼠IgG1κ( 约170190 )在与主要抗体相同的浓度和条件下使用(野生型A-431-黑线;EPCAM敲除A-431–灰线)。 未标记样本也用作对照(为了简单起见,未显示此行)。 使用50 mW蓝光激光器(488nm)和525/40带通滤波器采集了超过5000个事件。 -
流式细胞术重叠直方图显示野生型A-431(绿线)和EPCAM敲除的A-431细胞(ab261902) ab85987 (红线)。 细胞在含有10%正常山羊血清的1x PBS中孵育,以阻断非特异性蛋白-蛋白质相互作用,然后再接种抗体( ab85987 )(1x10个 6 100μl,0.2μg/ml),在4°C下保持30分钟。 二级抗体山羊抗鼠IgG H&L(Alexa Fluor ® 488,预吸附)( ab150117号 )于2000年1月在4°C下使用30分钟。 同种对照抗体为小鼠IgG1κ( 约170190 )在与主要抗体相同的浓度和条件下使用(野生型A-431-黑线;EPCAM敲除A-431–灰线)。 未标记样本也用作对照(为了简单起见,未显示此行)。 使用50 mW蓝光激光器(488nm)和525/40带通滤波器采集了超过5000个事件。
数据表和文件
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SDS下载 -
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