概述
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产品名称 -
亲代细胞系 希拉牌手表 -
有机体 人类 -
突变描述 利用CRISPR/Cas9实现基因敲除,第7外显子2 bp缺失,第7外显子370 bp缺失 -
通道编号 <20 -
淘汰验证 Sanger测序,Western Blot(WB) -
经过测试的应用程序 -
生物安全水平 2 -
一般注意事项 建议控制: 人野生型HeLa细胞系( 约255928 ). 请注意,剔除细胞株订单中不会自动包含野生型细胞株,如果需要,请使用代码WILDTYPE-TMTK1免费添加推荐的野生型细胞系。 低温保存细胞培养基: 细胞冷冻介质-DMSO无血清培养基,在补充甲基纤维素的MEM中含有8.7%的DMSO。 培养基: DMEM(高糖)+10%FBS 初始处理指南: 到达后,小瓶应储存在液氮气相中,而不是-80°C。 在-80°C下储存可能会导致生存能力丧失。 1.在37°C水浴中解冻小瓶约1-2分钟。 2.将细胞悬液(0.8 mL)转移到含有8.4 mL预热培养基的15 mL/50 mL锥形无菌聚丙烯离心管中,用额外的0.8 mL培养基(总体积10 mL)清洗小瓶以收集剩余细胞,并在室温下以201 x g(rcf)离心5分钟。 10 mL代表建议的最小稀释度。 20 mL代表建议的最大稀释度。 3.将细胞颗粒重新悬浮在5 mL预热培养基中,并使用血细胞仪或其他细胞计数方法进行计数。 根据细胞计数,将种子细胞置于密度为2x10的适当细胞培养瓶中 4 细胞/厘米 2 。播种密度仅供参考,应根据各个实验室的时间表进行调整。 4.将培养物在37°C培养箱中与5%CO一起培养 2 。应每天监测培养物。 亚文化指南: 所有播种密度应基于通过既定方法获得的细胞数。 引导播种密度为2x10 4 细胞/厘米 2 建议使用。 如果需要,在继代培养前24小时更换部分培养基可能有助于促进生长。 当细胞达到80-90%的汇合时,应进行传代。
本产品受The Broad Institute和ERS Genomics limited的有限使用许可,并采用专利技术开发。 有关有限使用许可证和相关专利的详细信息,请参阅我们的 有限使用许可证 和 专利页 . 我们将提供复苏时增殖的活细胞。
属性
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单元格数量 1 x 10 6 细胞/小瓶,1 mL -
粘附/悬浮 粘附剂 -
组织 子宫颈 -
单元格类型 上皮的 -
疾病 腺癌 -
性别 女性 -
STR分析 釉原蛋白X D5S818:11、12 D13S317:12、13.3 D7S820:8、12 D16S539:9、10 vWA:16、18 TH01:7型 TPOX:8、12 CSF1PO:9、10 -
抗生素耐药性 嘌呤霉素1.00µg/ml -
无支原体 是的 -
储存说明 采用干冰运输。 储存在液氮中。 -
存储缓冲区 成分:8.7%二甲基亚砜、2%纤维素、甲醚 -
研究领域
目标
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功能 组蛋白甲基转移酶,特别是常染色质中组蛋白H3(分别为H3K9me1和H3K9 me2)的单酯和二甲酯“Lys-9”。 H3K9me通过向甲基化组蛋白招募HP1蛋白,代表表观遗传转录抑制的一个特定标记。 还介导组蛋白H3(H3K56me1)的“Lys-56”在G1期的单甲基化,从而促进组蛋白H4和PCNA之间的相互作用并调节DNA复制。 组蛋白H3(H3K27me)的弱甲基化“Lys-27”。 DNA甲基化也需要组蛋白甲基转移酶活性,而DNA甲基化不需要组蛋白甲转移酶活性。这表明这两种活性独立发挥作用。 可能由不同的DNA结合蛋白如E2F6、MGA、MAX和/或DP1靶向组蛋白H3。 也可能甲基化组蛋白H1。 除了组蛋白甲基转移酶活性外,还甲基化非组蛋白:介导p53/TP53的“Lys-373”的二甲基化。 还甲基化CDYL、WIZ、ACIN1、DNMT1、HDAC1、ERCC6、KLF12及其本身。 -
组织特异性 在所有受检组织中均有表达,在胎肝、胸腺、淋巴结、脾脏和外周血白细胞中含量较高,而在骨髓中含量较低。 -
序列相似性 属于V类SAM-结合甲基转移酶超家族。 组蛋白赖氨酸甲基转移酶家族。 Suvar3-9亚家族。 包含7个ANK重复。 包含1个postSET域。 包含1个预设置域。 包含1个SET域。 -
域 SET域调解与WIZ的交互。 ANK重复结合H3K9me1和H3K9 me2。 -
翻译后 修改 Lys-185甲基化; 自动甲基化。 -
手机定位 核心。 染色体。 与常染色区域相关。 与异染色质无关。 -
UniProt提供的信息
相关产品
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KO细胞裂解物 -
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应用
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图像
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所有车道: 抗-EHMT2/G9A抗体[EPR18894]-ChIP级( 约185050 )稀释度为1/1000 车道1: 野生型HeLa细胞裂解物 车道2: EHMT2/G9A敲除HeLa细胞裂解物 3号车道: HEK-293细胞裂解物 车道4: HepG2细胞裂解物 每条泳道20µg的裂解物/蛋白质。 次要 所有车道: 山羊抗兔IgG H&L(IRDye®800CW)预吸附( ab216773号 )稀释1/20000 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 132千帕 观察到的频带大小: 160千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? 1-4车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 约185050 在160 kDa时观察到。 红色-加载控制 约8245 在37 kDa时观察到。 约185050 在野生型HeLa细胞中,抗-EHMT2/G9A抗体[EPR18894]与EHMT2/G9A特异性反应。 当敲除细胞系ab265149(敲除细胞裂解物 ab257080号 )已使用。 对野生型和EHMT2/G9A敲除样品进行SDS-PAGE分析。 约185050 和抗-GAPDH抗体[6C5]-负荷控制( 约8245 )分别在4°C下以1/1000稀释度和1/20000稀释度培养过夜。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸附床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸附床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
所有车道: 抗-EHMT2/G9A抗体[EPR4019(2)]-ChIP级( 约133482 )稀释度为1/1000 车道1: 野生型HeLa细胞裂解物 车道2: EHMT2/G9A敲除HeLa细胞裂解物 3号车道: HEK-293细胞裂解物 车道4: HepG2细胞裂解物 每条泳道20µg的裂解物/蛋白质。 次要 所有车道: 山羊抗兔IgG H&L(IRDye®800CW)预吸附( ab216773号 )稀释1/20000 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 132千帕 观察到的频带大小: 160千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? 1-4车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 约133482 在160 kDa时观察到。 红色-加载控制 约8245 在37 kDa时观察到。 约133482 在野生型HeLa细胞中,抗-EHMT2/G9A抗体[EPR4019(2)]显示与EHMT2/G9A特异性反应。 当敲除细胞系ab265149(敲除细胞裂解物 ab257080号 )已使用。 对野生型和EHMT2/G9A敲除样品进行SDS-PAGE分析。 约133482 和抗-GAPDH抗体[6C5]-负荷控制( 约8245 )分别在4°C下以1/1000稀释度和1/20000稀释度培养过夜。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸附床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸附床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
等位基因1:第7外显子2 bp缺失。 -
等位基因2:第7外显子370 bp缺失。 -
EHMT2敲除HeLa细胞的代表性图像,低汇合和高汇合示例(分别位于左上和右上)和野生型HeLa电池,低汇流和高汇流示例(分别于左下和右下)显示了典型的粘附上皮样形态。 使用EVOS XL Core显微镜以10倍放大率拍摄图像。
数据表和文件
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SDS下载 -
数据表下载