概述
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产品名称 -
亲代细胞系 希拉牌手表 -
有机体 人类 -
突变描述 利用CRISPR/Cas9实现基因敲除,外显子1缺失1 bp,外显基因1插入1 bp -
通道编号 <20 -
淘汰验证 Sanger测序,Western Blot(WB) -
经过测试的应用程序 -
生物安全水平 2 -
一般注意事项 建议控制: 人野生型HeLa细胞系( ab255928年 ). 请注意,剔除细胞株订单中不会自动包含野生型细胞株,如果需要,请使用代码WILDTYPE-TMTK1免费添加推荐的野生型细胞系。 低温保存细胞培养基: 细胞冷冻介质-DMSO无血清培养基,在补充甲基纤维素的MEM中含有8.7%的DMSO。 培养基: DMEM(高糖)+10%FBS 初始处理指南: 到达后,小瓶应储存在液氮气相中,而不是-80°C。 在-80°C下储存可能会导致生存能力丧失。 1.在37°C水浴中解冻小瓶约1-2分钟。 2.将细胞悬液(0.8 mL)转移到含有8.4 mL预热培养基的15 mL/50 mL锥形无菌聚丙烯离心管中,用额外的0.8 mL培养基(总体积10 mL)清洗小瓶以收集剩余细胞,并在室温下以201 x g(rcf)离心5分钟。 10 mL代表建议的最小稀释度。 20 mL代表建议的最大稀释度。 3.将细胞颗粒重新悬浮在5 mL预热培养基中,并使用血细胞仪或其他细胞计数方法进行计数。 根据细胞计数,将种子细胞置于密度为2x10的适当细胞培养瓶中 4 细胞/厘米 2 。播种密度仅供参考,应根据各个实验室的时间表进行调整。 4.在37°C培养箱中用5%CO培养 2 。应每天监测培养物。 亚文化指南: 所有播种密度应基于通过既定方法获得的细胞数。 引导播种密度为2x10 4 细胞/厘米 2 建议使用。 如果需要,在继代培养前24小时更换部分培养基可能有助于促进生长。 当细胞达到80-90%的汇合时,应进行传代。
本产品受The Broad Institute、ERS Genomics limited和Sigma-Aldrich Co.LLC的有限使用许可,并采用专利技术开发。 有关许可证和专利的详细信息,请参阅我们的 有限使用许可证 和 专利页 . 我们将提供复苏时增殖的活细胞。
属性
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单元格数量 1 x 10 6 细胞/小瓶,1 mL -
粘附/悬浮 坚持者 -
组织 子宫颈 -
单元格类型 上皮的 -
疾病 腺癌 -
性别 女性 -
STR分析 釉原蛋白X D5S818:11、12 D13S317:12、13.3 D7S820:8、12 D16S539:9、10 vWA:16、18 TH01:7型 TPOX:8、12 CSF1PO:9、10 -
无支原体 是的 -
储存说明 采用干冰运输。 储存在液氮中。 -
存储缓冲区 成分:8.7%二甲基亚砜、2%纤维素、甲醚 -
研究领域
目标
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功能 受体酪氨酸激酶结合EGF家族配体并激活几个信号级联,将细胞外信号转换为适当的细胞反应。 已知配体包括EGF、TGFA/TGF-alpha、双调节蛋白、表观蛋白/EPGN、BTC/β细胞壁蛋白、表调节蛋白/EREG和HBEGF/肝素结合EGF。 配体结合触发关键细胞质残基上的受体同源和/或异源二聚和自磷酸化。 磷酸化受体招募GRB2等适配蛋白,后者反过来激活复杂的下游信号级联。 激活至少4个主要下游信号级联,包括RAS-RAF-MEK-ERK、PI3激酶-AKT、PLCgamma-PKC和STATs模块。 也可能激活NF-kappa-B信号级联。 还可直接磷酸化其他蛋白质,如RGS16,激活其GTPase活性,并可能将EGF受体信号与G蛋白偶联受体信号耦合。 还磷酸化MUC1并增加其与SRC和CTNNB1/β-catenin的相互作用。 异构体2可能是EGF作用的拮抗剂。 -
组织特异性 普遍表达。 异构体2也在卵巢癌中表达。 -
参与疾病 肺癌 炎症性皮肤和肠道疾病,新生儿,2 -
序列相似性 属于蛋白激酶超家族。 酪氨酸蛋白激酶家族。 EGF受体亚家族。 包含1个蛋白激酶结构域。 -
翻译后 修改 Ser-695处的磷酸化是部分的,只有当Thr-693被磷酸化时才会发生。 PRKD1在Thr-678和Thr-693处的磷酸化抑制EGF诱导的MAPK8/JNK1活化。 PTPRJ的去磷酸化可防止内吞并稳定质膜上的受体。 Tyr-1197的自磷酸化由Arg-1199的甲基化刺激,并增强与PTPN6的相互作用。 Tyr-1092和/或Tyr-1110的自磷酸化招募STAT3。 通过PTPN1和PTPN2脱磷。 EGF刺激下的单泛素化和多泛素化; 它不影响酪氨酸激酶活性或信号传导能力,但可能在溶酶体靶向中发挥作用。 多泛素连接主要通过“Lys-63”进行,但也会通过“Lys-48”、“Lys-11”和“Lys-29”进行连接。 OTUD7B的去泛素作用可防止降解。 RNF115和RNF126泛素化。 甲基化。 PRMT5在Arg-1199的甲基化刺激Tyr-1197的磷酸化。 -
手机定位 分泌膜和细胞膜。 内质网膜。 高尔基体膜。 细胞核膜。 内体。 内体膜。 核心。 作为对EGF的反应,通过高尔基体和内质网从细胞膜转运到细胞核。经配体激活后内吞。 在雌激素激动剂诱导的癌症相关成纤维细胞(CAF)的细胞核中与GPER1共定位。 -
UniProt提供的信息
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KO细胞裂解物 -
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应用
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图像
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所有车道: 抗-EGFR抗体[E235]( 约32077 )稀释度为1/1000 车道1: 野生型A549细胞裂解物 车道2: EGFR敲除A549细胞裂解物 3号车道: 野生型HeLa细胞裂解物 车道4: EGFR敲除HeLa细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 预测的带宽大小: 134千帕 观察到的频带大小: 160千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? Western blot:抗-EGFR抗体[E235]( 约32077 )以1/1000稀释度染色,以绿色显示; 小鼠抗α-微管蛋白[DM1A]( 约7291 )以1/20000稀释度进行负荷控制染色,以红色显示。在Western blot中, 约32077 被证明与EGFR特异结合。 在野生型细胞裂解液中观察到160kDa的条带,在EGFR敲除细胞系中未观察到这种大小的信号。 要生成此图像,请使用野生型和EGFR剔除A549( 约286394 )并对HeLa(ab255385)细胞裂解物进行分析。 首先,样品在SDS-PAGE凝胶上运行,然后转移到硝化纤维素膜上。 在4°C下与一级抗体孵育过夜之前,在TBS-0.1%吐温®20(TBS-T)中的3%牛奶中封闭膜。 在TBS-T中清洗四次斑点,在室温下与二级抗体孵育1小时,再次清洗四次,然后成像。 二级抗体为羊抗兔IgG H&L 800CW和羊抗鼠IgG H&L 680RD,稀释度为1/20000。 -
所有车道: 抗-EGFR抗体[E234]( 约32198 )稀释度为1/1000 车道1: 野生型A549细胞裂解物 车道2: EGFR敲除A549细胞裂解物 3号车道: 野生型HeLa细胞裂解物 车道4: EGFR敲除HeLa细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 预测的带宽大小: 134千帕 观察到的频带大小: 160千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? Western blot:抗-EGFR抗体[E234]( 约32198 )以1/1000稀释度染色,以绿色显示; 小鼠抗α-微管蛋白[DM1A]( 约7291 )以1/20000稀释度进行负荷控制染色,以红色显示。在Western blot中, ab32198型 被证明与EGFR特异结合。 在野生型细胞裂解液中观察到160kDa的条带,在EGFR敲除细胞系中未观察到这种大小的信号。 要生成此图像,请使用野生型和EGFR剔除A549( 约286394 )并对HeLa(ab255385)细胞裂解物进行了分析。 首先,样品在SDS-PAGE凝胶上运行,然后转移到硝化纤维素膜上。 在4°C下与一级抗体孵育过夜之前,在TBS-0.1%吐温®20(TBS-T)中的3%牛奶中封闭膜。 在TBS-T中清洗四次斑点,在室温下与二级抗体孵育1小时,再次清洗四次,然后成像。 二级抗体为羊抗兔IgG H&L 800CW和羊抗鼠IgG H&L 680RD,稀释度为1/20000。 -
测序色谱图显示外显子1的序列编辑 -
等位基因1:外显子1缺失1 bp。 -
等位基因2:在外显子1中插入1 bp。
数据表和文件
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SDS下载 -
数据表下载