概述
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产品名称 -
亲代细胞系 希拉牌手表 -
有机体 人类 -
突变描述 利用CRISPR/Cas9实现基因敲除,第5外显子缺失1 bp,第5外显子插入1 bp -
通道编号 <20 -
淘汰验证 Sanger测序,Western Blot(WB) -
经过测试的应用程序 -
生物安全水平 2 -
一般注意事项 建议控制: 人野生型HeLa细胞系( 约255928 ). 请注意,剔除细胞株订单中不会自动包含野生型细胞株,如果需要,请使用代码WILDTYPE-TMTK1免费添加推荐的野生型细胞系。 低温保存细胞培养基: 细胞冷冻介质-DMSO无血清培养基,在补充甲基纤维素的MEM中含有8.7%的DMSO。 培养基: DMEM(高糖)+10%FBS 初始处理指南: 到达后,小瓶应储存在液氮气相中,而不是-80°C。 在-80°C下储存可能会导致丧失生存能力。 1.在37°C水浴中解冻小瓶约1-2分钟。 2.将细胞悬液(0.8 mL)转移到含有8.4 mL预热培养基的15 mL/50 mL锥形无菌聚丙烯离心管中,用额外的0.8 mL培养基(总体积10 mL)清洗小瓶以收集剩余细胞,并在室温下以201 x g(rcf)离心5分钟。 10 mL代表最低推荐稀释度。 20 mL代表建议的最大稀释度。 3.将细胞颗粒重新悬浮在5 mL预热培养基中,并使用血细胞仪或其他细胞计数方法进行计数。 根据细胞计数,将种子细胞置于密度为2x10的适当细胞培养瓶中 4 细胞/厘米 2 。播种密度仅供参考,应根据各个实验室的时间表进行调整。 4.在37°C培养箱中用5%CO培养 2 。应每天监测培养物。 亚文化指南: 所有播种密度应基于通过既定方法获得的细胞数。 引导播种密度为2x10 4 细胞/厘米 2 建议使用。 如果需要,在继代培养前24小时更换部分培养基可能有助于促进生长。 当细胞达到80-90%的汇合时,应进行传代。
本产品受The Broad Institute、ERS Genomics limited和Sigma-Aldrich Co.LLC的有限使用许可,并采用专利技术开发。 有关许可证和专利的详细信息,请参阅我们的 有限使用许可证 和 专利页 . 我们将提供复苏时增殖的活细胞。
属性
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单元格数量 1 x 10 6 细胞/小瓶,1 mL -
粘附/悬浮 粘附剂 -
组织 子宫颈 -
单元格类型 上皮的 -
疾病 腺癌 -
性别 女性 -
STR分析 釉原蛋白X D5S818:11,12 D13S317:12、13.3 D7S820:8、12 第16天第539页:第9页,第10页 vWA:16、18 TH01:7型 TPOX:8、12 CSF1PO:9、10 -
无支原体 是的 -
储存说明 采用干冰运输。 储存在液氮中。 -
存储缓冲区 成分:8.7%二甲基亚砜、2%纤维素、甲醚 -
研究领域
目标
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功能 一种已知的转录辅抑制因子,可抑制几种sumoylated转录因子的转录潜能。 下调基础转录和激活转录。 通过与MCSR1和PML的相互作用,将其招募到核仁或PML/POD/ND10核体等亚核小室,从而调节其转录抑制活性。 似乎与PML一起调节PML/POD/ND10核小体中的转录,从而可能影响TNFRSF6依赖的凋亡。 通过直接蛋白质相互作用抑制PAX3和ETS1的转录激活。 调节PAX5活性; 该功能似乎涉及CREBBP。 作为MDM2-DAXX-USP7复合物中的适配器蛋白,通过调节环填充E3连接酶MDM2泛素化活性。 在非应激条件下,与去泛素USP7结合,防止MDM2的自泛素化,增强MDM2对TP53的固有E3连接酶活性,从而促进TP53的泛素化和随后的蛋白酶体降解。 DNA损伤后,其与MDM2和USP7的关联被破坏,导致MDM2自动泛素化增加,从而导致MDM2-降解,导致TP53稳定。 作为组蛋白伴侣,促进组蛋白H3.3的沉积。 作为染色质重塑复合物ATRX:DAXX的靶向成分,该复合物具有ATP依赖的DNA转座子活性,并催化组蛋白H3.3在S期和端粒外的中心周围DNA重复序列中的复制非依赖性沉积,以及含H3.3核小体的体外重塑。 不影响ATRX的ATP酶活性,但减轻其转录抑制活性。 神经元激活后,与选定的即刻早期基因的调节元件相关,促进组蛋白H3.3的沉积,这可能与这些基因的转录诱导有关。 组蛋白H3.3:H4二聚体向PML核小体(PML-NBs)募集所需; 该过程独立于ATRX,并由ASF1A促进; PML-NB被认为是新合成组蛋白H3.3并入染色质的调节位点。 在着丝粒组蛋白变异体CENPA(如在各种肿瘤中发现的)过度表达的情况下,它与染色体定位错误有关; 异位定位涉及含有CENPA、组蛋白H3.3和H4的异型四聚体,并减少CTCF与染色质的结合。 建议通过MAP3K5调节JNK通路的激活和凋亡,以响应TNFRSF6和TGFBR2的信号。 与HSPB1/HSP27的相互作用可能阻止与TNFRSF6和MAP3K5的相互作用,并阻断DAXX介导的凋亡。 相反,在淋巴细胞中,JNC激活和TNFRSF6介导的凋亡可能不涉及DAXX。 显示对人巨细胞病毒(HCMV)的限制活性。 -
组织特异性 无处不在的。 -
序列相似性 属于DAXX家族。 -
域 相扑相互作用基序介导相扑结合,并且是相扑酰化和与相扑酰化靶标结合所必需的。 -
翻译后 修改 用SUMO1对多个赖氨酸残基进行氨酰化。 葡萄糖剥夺后HIPK1磷酸化。 多泛素化; 由CUL3和SPOP促进,导致蛋白酶体降解。 MDM2泛素化; 诱导其降解。 通过USP7脱二脲; 从而使其稳定下来。 -
手机定位 核心。 弥散的核分布模式,亚型1和细胞质没有可比的点状积累。 细胞核,核质。 核,PML体。 细胞核,核仁。 染色体,着丝粒。 散布于整个核质、PML/POD/ND10核体和核仁中(可能)。 与组蛋白H3.3、ATRX、HIRA和ASF1A在PML核小体上进行结肠镜检(PubMed:12953102,PubMed:14990586,PubMet:23222847,PubMed:24200965)。 用间期着丝粒子集进行染色,但在有丝分裂着丝粒中不存在(PubMed:9645950)。 在细胞质点状结构中检测到(PubMed:11842083)。 葡萄糖缺乏或氧化应激时从细胞核转移到细胞质(PubMed:12968034)。 在细胞核中用RASSF1进行结肠镜检(PubMed:18566590)。 用USP7在核浆中进行结肠化,并在斑点结构中累积(PubMed:16845383)。 -
UniProt提供的信息
相关产品
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KO细胞裂解物 -
相关产品
应用
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图像
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所有车道: 抗-Daxx抗体[E94]( 约32140 )稀释1/5000 车道1: 野生型HeLa细胞裂解物 车道2: DAXX敲除HeLa细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 81千Da 观察到的频带大小: 100千Da 为什么实际的频带大小与预测的不同? 1-2车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 约32140 在100kDa下观察到。 红色-抗-GAPDH抗体[6C5]-负荷控制( 约8245 )在37 kDa时观察到。 约32140 western blot显示与野生型HeLa细胞中的Daxx反应。 当敲除细胞系ab265233(敲除细胞裂解物 ab257408号 )被使用。 对野生型HeLa和DAXX敲除HeLa细胞裂解物进行SDS-PAGE分析。 将膜在室温下用3%脱脂奶粉在0.1%TBST中封闭1小时。 约32140 和抗-GAPDH抗体[6C5]-负荷控制( 约8245 )在4°C下过夜,稀释率分别为1/5000和1/20000。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸附( 邮编:216773 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸附床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
等位基因1:第5外显子1 bp缺失。 -
等位基因2:第5外显子插入1 bp。
数据表和文件
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SDS下载 -
数据表下载