概述
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产品名称 -
亲代细胞系 希拉牌手表 -
有机体 人类 -
突变描述 通过使用CRISPR/Cas9,外显子1中插入1 bp和外显子一中插入选择盒实现敲除 -
通道编号 <20 -
淘汰验证 免疫细胞化学(ICC)、Sanger测序、Western Blot(WB) -
经过测试的应用程序 -
生物安全水平 2 -
一般注意事项 建议控制: 人野生型HeLa细胞系( ab255448年 ). 请注意,剔除细胞株订单中不会自动包含野生型细胞株,如果需要,请使用代码WILDTYPE-TMTK1免费添加推荐的野生型细胞系。 低温保存细胞培养基: 细胞冷冻介质-DMSO无血清培养基,在补充甲基纤维素的MEM中含有8.7%的DMSO。 培养基: DMEM(高糖)+10%FBS 初始处理指南: 到达后,小瓶应储存在液氮气相中,而不是-80°C。 在-80°C下储存可能会导致生存能力丧失。 1.在37°C水浴中解冻小瓶约1-2分钟。 2.将细胞悬液(0.8 mL)转移到含有8.4 mL预热培养基的15 mL/50 mL锥形无菌聚丙烯离心管中,用额外的0.8 mL培养基(总体积10 mL)清洗小瓶以收集剩余细胞,并在室温下以201 x g(rcf)离心5分钟。 10 mL代表建议的最小稀释度。 20 mL代表建议的最大稀释度。 3.将细胞颗粒重新悬浮在5 mL预热培养基中,并使用血细胞仪或其他细胞计数方法进行计数。 根据细胞计数,将种子细胞置于密度为2x10的适当细胞培养瓶中 4 细胞/厘米 2 。播种密度仅供参考,应根据各个实验室的时间表进行调整。 4.将培养物在37°C培养箱中与5%CO一起培养 2 。应每天监测培养物。 亚文化指南: 所有播种密度应基于通过既定方法获得的细胞数。 引导播种密度为2x10 4 细胞/厘米 2 建议使用。 如果需要,在继代培养前24小时更换部分培养基可能有助于促进生长。 当细胞达到80-90%的汇合时,应进行传代。
本产品受The Broad Institute、ERS Genomics limited和Sigma-Aldrich Co.LLC的有限使用许可,并采用专利技术开发。 有关许可证和专利的详细信息,请参阅我们的 有限使用许可证 和 专利页 . 我们将提供复苏时增殖的活细胞。
属性
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单元格数量 1 x 10 6 细胞/小瓶,1 mL -
粘附/悬浮 粘附剂 -
组织 子宫颈 -
单元格类型 上皮的 -
疾病 腺癌 -
性别 女性 -
STR分析 釉原蛋白X D5S818:11、12 D13S317:12、13.3 D7S820:8、12 D16S539:9、10 vWA:16、18 TH01:7型 TPOX:8、12 CSF1PO:9、10 -
无支原体 是的 -
储存说明 采用干冰运输。 储存在液氮中。 -
存储缓冲区 成分:8.7%二甲基亚砜、2%纤维素、甲醚 -
研究领域
目标
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功能 可能在小泡膜内起支架蛋白的作用。 直接与G蛋白α亚单位相互作用,并能在功能上调节其活性(通过相似性)。 参与T细胞受体(TCR)介导的T细胞激活所必需的共刺激信号。 其与DPP4的结合以T细胞受体/CD3依赖的方式诱导T细胞增殖和NF-kappa-B活化。 招募CTNNB1到小窝膜,并可能通过Wnt途径调节CTNNB1介导的信号传导。 -
组织特异性 在肌肉和肺中表达,在肝脏、大脑和肾脏中表达较少。 -
参与疾病 CAV1缺陷是先天性全身性脂肪营养不良3型(CGL3)的病因[MIM:612526]; 也称为Berardinelli-Seip先天性脂肪营养不良3型(BSCL3)。 先天性全身性脂肪营养不良是一种常染色体隐性遗传疾病,其特征是脂肪组织几乎缺失、胰岛素抵抗严重、高甘油三酯血症、肝脂肪变性和糖尿病早期发病。 -
序列相似性 属于卡沃林家族。 -
翻译后 修改 β亚型的引发剂蛋氨酸在翻译过程中或翻译后被去除。 然后将新的N-末端氨基酸N-乙酰化。 -
手机定位 高尔基体膜。 细胞膜。 膜>小窝。 薄膜筏。 在膜筏中用DPP4染色。 膜中潜在的发夹状结构。 小窝膜蛋白。 -
UniProt提供的信息
相关产品
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KO细胞裂解物 -
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应用
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图像
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所有车道: HRP抗Caveolin-1抗体[E249]-Caveolae标记( 公元193893年 )稀释1/5000 车道1: 野生型HeLa细胞裂解物 车道2: CAV1敲除HeLa细胞裂解物 3号车道: A431细胞裂解物 车道4: A549细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 20千帕 观察到的频带大小: 20千帕 暴露时间: 90秒 1-4车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 公元193893年 在20 kDa时观察到。 红色-加载控制 约8245 (小鼠抗GAPDH抗体[6C5])。 公元193893年 Western blot显示与野生型HeLa细胞中的Caveolin-1反应,在CAV1基因敲除细胞系ab255371(CAV1敲除细胞裂解物 约263806 ). 对野生型HeLa和CAV1敲除细胞裂解物进行SDS-PAGE分析。 TBS-T(0.1%吐温)中3%牛奶中的膜被堵塞 ® )孵育前 公元193893年 和 约8245 (小鼠抗GAPDH抗体[6C5])在4°C下过夜,分别以1/5000和1/20000稀释。 印迹与山羊抗鼠IgG H&L(IRDye)孵育 ® 680RD)预吸收床( 约216776 )二级抗体在20000份中稀释1份,室温下保存1小时。 使用Optiblot ECL试剂开发印迹( 约133456 )在成像之前。 -
公元17052年 野生型HeLa细胞Caveolin-1染色(顶面板)和CAV1敲除HeLa的细胞(ab255371)(底面板)。 用100%甲醇固定细胞(5分钟),然后用0.1%Triton X-100渗透5分钟,然后用1%BSA/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸在0.1%PBS-Tween中封闭1小时。 然后将细胞与 约17052 稀释1/500 约6046 (兔多克隆到β-管蛋白)在4°C下以1/1000稀释过夜,然后在室温下用山羊抗小鼠IgG二级抗体(Alexa Fluor ® 488) ( 第150117页 )2μg/ml(以绿色显示)和山羊对兔IgG的二级抗体(Alexa Fluor ® 594) ( 约150080 )浓度为2μg/ml(以红色显示)。 核DNA用DAPI标记为蓝色。 使用共焦显微镜(Leica-Microsystems TCS SP8)拍摄图像。 -
所有车道: 抗Caveolin-1抗体[EPR15554]-N端( 约192869年 )稀释度为1/10000 车道1: A431细胞裂解物 车道2: A549细胞裂解物 3号车道: 野生型HeLa细胞裂解物 车道4: CAV1敲除HeLa细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 次要 所有车道: 山羊抗兔IgG H&L(IRDye®800CW)预吸附( ab216773号 )稀释1/20000 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 20千帕 其他波段位于: 37 kDa(可能的负载控制) 1-4车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 约192869年 在20kDa下观察到。 红色-装载控制, 约8245 在37 kDa时观察到。 约192869年 在野生型HeLa中显示与Caveolin-1反应。 敲除细胞系ab255371(敲除细胞裂解物 约263806 )已使用。 对野生型和Caveolin-1基因敲除样品进行SDS-PAGE分析。 约192869年 和抗GAPDH抗体[6C5]-负载对照( 约8245 )分别在4°C下以1比10000和1比20000稀释培养过夜。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸附床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸附床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
流式细胞术重叠直方图显示野生型HeLa(绿线)和CAV1基因敲除的HeLa细胞(ab255371) 约192869年 (红线)。 用80%甲醇固定细胞(5分钟),然后用0.1%PBS-Triton X-100渗透15分钟。然后将细胞培养在含有10%正常山羊血清的1x PBS中,以阻断非特异性蛋白-蛋白质相互作用,然后再接种抗体( 约192869年 )(1x10个 6 100μl,0.04μg/ml),在22°C下保持30分钟。 二级抗体山羊抗兔IgG H&L(Alexa Fluor ® 488,预吸附)( 约150081 )于2000年1月在22°C下使用30分钟。 同型对照抗体为兔IgG(单克隆)( 约172730 )在与主要抗体相同的浓度和条件下使用(野生型HeLa-黑线CAV1敲除HeLa–灰线)。 未标记样本也用作对照(为了简单起见,未显示此行)。 使用50 mW蓝光激光器(488nm)和525/40带通滤波器采集了超过5000个事件。 -
所有车道: 抗Caveolin-1抗体[E249]-Caveolae标记( ab32577磅 )稀释1/1000 车道1: A431细胞裂解物 车道2: A549细胞裂解物 3号车道: 野生型HeLa细胞裂解物 车道4: CAV1敲除HeLa细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 次要 所有车道: 山羊抗兔IgG H&L(IRDye®800CW)预吸附( ab216773号 )稀释1/20000 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 20千帕 其他波段位于: 37 kDa(可能的负载控制) 1-4车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 约32577 在20 kDa时观察到。 红色-装载控制, 约8245 在37 kDa时观察到。 约32577 在野生型HeLa细胞中显示与Caveolin-1反应。 敲除细胞系ab255371(敲除细胞裂解物 约263806 )已使用。 对野生型和Caveolin-1基因敲除样品进行SDS-PAGE分析。 约32577 和抗GAPDH抗体[6C5]-负载对照( 约8245 )分别在4°C下以1/1000稀释度和1/20000稀释度培养过夜。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸附床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸附床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
约192869年 在野生型HeLa细胞中染色Caveolin-1(上图)和CAV1敲除HeLa细胞(ab255371)(下图)。 用100%甲醇固定细胞(5分钟),然后用0.1%Triton X-100渗透5分钟,然后用1%BSA/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸在0.1%PBS-Tween中封闭1小时。 然后将细胞与 约192869年 稀释1/500 约7291 (鼠抗α-管蛋白单克隆抗体)在4°C下以1/1000稀释过夜,然后在室温下用山羊抗兔IgG二级抗体(Alexa Fluor ® 488) ( 约150081 )2μg/ml(以绿色显示)和山羊对小鼠IgG的二级抗体(Alexa Fluor ® 594) ( ab150120型 )浓度为2μg/ml(以红色显示)。 核DNA用DAPI标记为蓝色。 使用共焦显微镜(Leica-Microsystems TCS SP8)拍摄图像。 -
等位基因-1:1bp插入外显子1。 -
等位基因2:选择盒插入外显子1。
数据表和文件
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SDS下载 -
数据表下载