概述
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产品名称 -
亲代细胞系 A549型 -
有机体 人类 -
突变描述 利用CRISPR/Cas9实现基因敲除,第2外显子14 bp缺失,第2外显子1 bp缺失和第2外显子4 bp缺失 -
通道编号 <20 -
淘汰验证 Sanger测序,Western Blot(WB) -
经过测试的应用程序 -
生物安全水平 2 -
一般注意事项 建议控制: 人野生型A549细胞系( 约255450 ). 请注意,剔除细胞株订单中不会自动包含野生型细胞株,如果需要,请使用代码WILDTYPE-TMTK1免费添加推荐的野生型细胞系。 低温保存细胞培养基: 细胞冷冻介质-DMSO无血清培养基,在补充甲基纤维素的MEM中含有8.7%的DMSO。 培养基: F-12K+10%FBS 初始处理指南: 到达后,小瓶应储存在液氮气相中,而不是-80°C。 在-80°C下储存可能会导致生存能力丧失。 1.在37°C水浴中解冻小瓶约1-2分钟。 2.将细胞悬液(0.8 mL)转移到含有8.4 mL预热培养基的15 mL/50 mL锥形无菌聚丙烯离心管中,用额外的0.8 mL培养基(总体积10 mL)清洗小瓶以收集剩余细胞,并在室温下以201 x g(rcf)离心5分钟。 10 mL代表建议的最小稀释度。 20 mL代表建议的最大稀释度。 3.将细胞颗粒重新悬浮在5 mL预热培养基中,并使用血细胞仪或其他细胞计数方法进行计数。 根据细胞计数,将种子细胞置于密度为2x10的适当细胞培养瓶中 三 -1x10个 4 细胞/厘米 2 。播种密度仅供参考,应根据各个实验室的时间表进行调整。 4.在37°C培养箱中用5%CO培养 2 。应每天监测培养物。 亚文化指南: 所有播种密度应基于通过既定方法获得的细胞数。 引导播种密度为6x10 4 细胞/厘米 2 建议使用。 如果需要,在继代培养前24小时更换部分培养基可能有助于促进生长。 当细胞达到80-90%的汇合时,应进行传代。 不要超过7x10 4 细胞/厘米 2 .
本产品受The Broad Institute和ERS Genomics limited的有限使用许可,并采用专利技术开发。 有关有限使用许可证和相关专利的详细信息,请参阅我们的 有限使用许可证 和 专利页 . 我们将提供复苏时增殖的活细胞。
属性
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单元格数量 1 x 10 6 细胞/小瓶,1 mL -
粘附/悬浮 粘附剂 -
组织 肺 -
单元格类型 上皮的 -
疾病 癌 -
性别 男性 -
STR分析 Amelogenin X、Y D5S818:11 D13S317:11号文件 D7S820:8,11 D16S539:11、12 vWA:14个 TH01:8、9.3 TPOX:8、11 CSF1PO:10、12 -
抗生素耐药性 嘌呤霉素1.00µg/ml -
无支原体 是的 -
储存说明 采用干冰运输。 储存在液氮中。 -
存储缓冲区 成分:8.7%二甲基亚砜、2%纤维素、甲醚 -
研究领域
目标
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功能 该蛋白结合cAMP反应元件(CRE)(共识:5'-GTGACGT[AC][AG]-3'),该序列存在于许多病毒和细胞启动子中。 用ATF位点抑制启动子的转录。 它可以通过稳定启动子上抑制性辅因子的结合来抑制转录。 异构体2可能通过将抑制性辅因子从启动子隔离开来来激活转录。 -
序列相似性 属于bZIP家族。 ATF子系列。 包含1个bZIP域。 -
手机定位 核心。 -
UniProt提供的信息
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KO细胞裂解物 -
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应用
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图像
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所有车道: 抗-ATF3抗体[EPR22610-19]-ChIP等级( 约254268 )稀释度为1/1000 车道1: 野生型A549细胞裂解物 车道2: ATF3敲除A549细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 21千帕 观察到的频带大小: 21千帕 1-2车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 约254268 在21 kDa时观察到。 红色-加载控制 约8245 在37kDa下观察到。 约254268 重组抗-ATF3抗体[EPR22610-19]在野生型A549细胞中与ATF3特异性反应。 敲除细胞系ab266955(敲除细胞裂解物 ab257075号 )已使用。 野生型和ATF3基因敲除样品进行SDS-PAGE分析。 约254268 和抗-GAPDH抗体[6C5]-负荷控制( 约8245 )分别以1000分之一和20000分之一的稀释度在4°C下培养过夜。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸附床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸附床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
所有车道: 抗-ATF3抗体[EPR19488]-ChIP等级( 约207434 )稀释度为1/1000 车道1: 野生型A549细胞裂解物 车道2: ATF3敲除A549细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 21千帕 观察到的频带大小: 21千帕 车道1-2: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 约207434 在21 kDa时观察到。 红色-加载控制 约8245 在37kDa下观察到。 约207434 抗-ATF3抗体[EPR19488]-ChIP等级在野生型A549细胞中与ATF3特异性反应。 敲除细胞系ab266955(敲除细胞裂解物 ab257075号 )已使用。 野生型和ATF3基因敲除样品进行SDS-PAGE分析。 约207434 和抗-GAPDH抗体[6C5]-负荷控制( 约8245 )分别以1000分之一和20000分之一的稀释度在4°C下培养过夜。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸附床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸附床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
等位基因-1:14bp外显子2缺失 -
等位基因2:第2外显子4 bp缺失。 -
等位基因3:第2外显子1 bp缺失。 -
ATF3敲除A549细胞的代表性图像,低汇合和高汇合示例(左上和右上)和野生型A549细胞,低汇流和高汇流示例(左下和右下)显示典型的粘附上皮样形态。 使用EVOS XL Core显微镜以10倍放大率拍摄图像。
数据表和文件
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SDS下载 -
数据表下载