概述
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产品名称 -
亲代细胞系 希拉牌手表 -
有机体 人类 -
突变描述 通过使用CRISPR/Cas9在外显子3中插入1 bp和在外显字3中插入选择盒实现敲除 -
通道编号 <20 -
淘汰验证 免疫细胞化学(ICC)、Sanger测序、Western Blot(WB) -
经过测试的应用程序 -
生物安全水平 2 -
一般注意事项 建议控制: 人野生型HeLa细胞系( 约255448 ). 请注意,剔除细胞株订单中不会自动包含野生型细胞株,如果需要,请使用代码WILDTYPE-TMTK1免费添加推荐的野生型细胞系。 低温保存细胞培养基: 细胞冷冻介质-DMSO无血清培养基,在补充甲基纤维素的MEM中含有8.7%的DMSO。 培养基: DMEM(高糖)+10%FBS 初始处理指南: 到达后,小瓶应储存在液氮气相中,而不是-80°C。 在-80°C下储存可能会导致生存能力丧失。 1.在37°C水浴中解冻小瓶约1-2分钟。 2.将细胞悬液(0.8 mL)转移到含有8.4 mL预热培养基的15 mL/50 mL锥形无菌聚丙烯离心管中,用额外的0.8 mL培养基(总体积10 mL)清洗小瓶以收集剩余细胞,并在室温下以201 x g(rcf)离心5分钟。 10 mL代表建议的最小稀释度。 20 mL代表建议的最大稀释度。 3.将细胞颗粒重新悬浮在5 mL预热培养基中,并使用血细胞仪或其他细胞计数方法进行计数。 根据细胞计数,将种子细胞置于密度为2x10的适当细胞培养瓶中 4 细胞/厘米 2 。播种密度仅供参考,应根据各个实验室的时间表进行调整。 4.在37°C培养箱中用5%CO培养 2 。应每天监测培养物。 亚文化指南: 所有播种密度应基于通过既定方法获得的细胞数。 引导播种密度为2x10 4 细胞/厘米 2 建议使用。 如果需要,在继代培养前24小时更换部分培养基可能有助于促进生长。 当细胞达到80-90%的汇合时,应进行传代。
本产品受The Broad Institute、ERS Genomics limited和Sigma-Aldrich Co.LLC的有限使用许可,并采用专利技术开发。 有关许可证和专利的详细信息,请参阅我们的 有限使用许可证 和 专利页 . 我们将提供复苏时增殖的活细胞。
属性
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单元格数量 1 x 10 6 细胞/小瓶,1 mL -
粘附/悬浮 坚持者 -
组织 子宫颈 -
单元格类型 上皮的 -
疾病 腺癌 -
性别 女性 -
STR分析 釉原蛋白X D5S818:11、12 D13S317:12,13.3 D7S820:8、12 D16S539:9、10 vWA:16、18 TH01:7型 TPOX:8、12 CSF1PO:9、10 -
无支原体 是的 -
储存说明 采用干冰运输。 储存在液氮中。 -
存储缓冲区 成分:8.7%二甲基亚砜、2%纤维素、甲醚 -
研究领域
目标
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通路 氨基酸生物合成; L-精氨酸生物合成; 从L-鸟氨酸和氨甲酰磷酸盐中提取L-精氨酸:步骤2/3。 氮代谢; 尿素循环; 从L-天冬氨酸和L-瓜氨酸中提取的(N(omega)-L-精氨酸)琥珀酸:步骤1/1。 -
参与疾病 ASS1缺陷是1型瓜氨酸血症(CTLN1)的原因[MIM:215700]。 瓜氨酸血症属于尿素循环障碍。 这是一种常染色体隐性疾病,主要特征是血清和尿液瓜氨酸水平升高。 氨中毒是另一种表现。 CTLN1通常在出生后的头几天出现。 受影响的婴儿出生时看起来正常,但随着体内氨的积累,他们会出现嗜睡、喂养不良、呕吐、癫痫发作和失去意识等症状。 较温和的CTLN1型可在儿童或成人后期发展,但这种情况并不常见。 -
序列相似性 属于精氨琥珀酸合成酶家族。 类型1子家族。 -
UniProt提供的信息
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KO细胞裂解物 -
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应用
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图像
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所有车道: 抗-ASS1抗体[EPR12398]( 约170952 )稀释度为1/1000 车道1: 野生型HeLa细胞裂解物 车道2: ASS1敲除HeLa细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 47千Da 观察到的频带大小: 47千Da 1-2车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 公元170952年 在47 kDa时观察到。 红色-抗GAPDH抗体[6C5]-负载控制( 约8245 )在37 kDa时观察到。 约170952 western blot显示与野生型HeLa细胞中的ASS1反应。 当敲除细胞系ab264989(敲除细胞裂解物 ab257143号 )已使用。 对野生型HeLa和ASS1敲除HeLa细胞裂解物进行SDS-PAGE分析。 在室温下,将膜在0.1%的TBST和3%的脱脂奶粉中封闭1小时。 公元170952年 和抗GAPDH抗体[6C5]-负载对照( 约8245 )在4°C下过夜,稀释率分别为1/1000和1/20000。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸附床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸附床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
约170952 野生型HeLa细胞中的ASS1染色(顶部面板)和ASS1敲除HeLa电池(ab264989)(底部面板)。 用100%甲醇固定细胞(5分钟),然后用0.1%Triton X-100渗透5分钟,然后用1%BSA/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸在0.1%PBS-Tween中封闭1小时。 然后将细胞与 约170952 稀释度为1/100 约7291 (小鼠对α-微管蛋白的单克隆抗体),在4°C下稀释1/1000过夜,然后在室温下与山羊对兔IgG的第二抗体(Alexa Fluor ® 488) ( 约150081 )以2μg/ml(绿色显示)和山羊对小鼠IgG的二级抗体(Alexa Fluor ® 594) ( ab150120型 )浓度为2μg/ml(以红色显示)。 核DNA用DAPI标记为蓝色。 使用共焦显微镜(Leica-Microsystems TCS SP8)拍摄图像。 -
所有车道: 抗-ASS1抗体[EPR12399(B)]-C端( 约170900 )稀释度为1/1000 车道1: 野生型HeLa细胞裂解物 车道2: ASS1敲除HeLa细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 47千Da 观察到的频带大小: 47千Da 1-2车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 约170900 在47 kDa时观察到。 红色-抗GAPDH抗体[6C5]-负载控制( 约8245 )在37 kDa时观察到。 约170900 western blot显示与野生型HeLa细胞中的ASS1反应。 当敲除细胞系ab264989(敲除细胞裂解物 ab257143号 )已使用。 对野生型HeLa和ASS1敲除HeLa细胞裂解物进行SDS-PAGE分析。 在室温下,将膜在0.1%的TBST和3%的脱脂奶粉中封闭1小时。 约170900 和抗GAPDH抗体[6C5]-负载对照( 约8245 )在4°C下过夜,稀释率分别为1/1000和1/20000。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸附床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸附床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
约124465 野生型HeLa细胞中的ASS1染色(顶部面板)和ASS1敲除HeLa电池(ab264989)(底部面板)。 用100%甲醇固定细胞(5分钟),然后用0.1%Triton X-100渗透5分钟,然后用1%BSA/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸在0.1%PBS-Tween中封闭1小时。 然后将细胞与 约124465 稀释度为1/1000 约6046 (兔多克隆到β-管蛋白)在4°C下以1/1000稀释过夜,然后在室温下用山羊抗小鼠IgG二级抗体(Alexa Fluor ® 488) ( ab150117号 )以2μg/ml(绿色显示)和山羊对兔IgG的二级抗体(Alexa Fluor ® 594) ( 约150080 )浓度为2μg/ml(以红色显示)。 核DNA用DAPI标记为蓝色。 使用共焦显微镜(Leica-Microsystems TCS SP8)拍摄图像。 -
等位基因1:在外显子3中插入1 bp。 -
等位基因2:选择盒插入外显子3。 -
ASS1敲除HeLa细胞、低汇合和高汇合示例(左上和右上)以及野生型HeLa电池、低汇聚和高汇聚示例(左下和右下)的代表性图像显示了典型的粘附、上皮样形态。 使用EVOS XL Core显微镜以10倍放大率拍摄图像。
数据表和文件
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SDS下载 -
数据表下载