主要功能和细节
重组生产(无动物),实现高批次一致性和长期供应安全 组蛋白H3(磷酸化S28)-ChIP级兔单克隆抗体[E191] 适用于:WB、IHC-P、Flow Cyt(Intra)、ChIP、Dot-blot、ICC/IF、IP 反应:老鼠,人类
相关共轭物和制剂
概述
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产品名称 -
描述 组蛋白H3(磷酸化S28)-ChIP级兔单克隆抗体[E191] -
寄主物种 兔子 -
特异性 当在丝氨酸28上磷酸化时,该抗体检测组蛋白H3和组蛋白H3.3。 当在丝氨酸31上磷酸化时,它不能检测到H3.3。 -
经过测试的应用程序 -
物种反应性 与以下物质反应: 老鼠,人类 预计用于: 大鼠、豚鼠 -
免疫原 人类组蛋白H3 aa 1-100(磷酸化S28)内的合成肽。 确切的顺序是专有的。 数据库链接: 问题16695 -
阳性对照 NIH 3T3细胞裂解物,淋巴瘤组织。 IHC-P:人正常结肠FFPE组织切片。 ChIP:由HeLa细胞制备的染色质。 IP:希拉
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一般注意事项 该产品是一种重组单克隆抗体,具有以下优点: -高批次一致性和再现性 -提高敏感性和特异性 -长期供应安全 -无动物制作
有关更多信息 请看这里 . 我们的RabMAb ® 该技术是一种基于杂交瘤的专利技术,用于制备兔单克隆抗体。 有关我们专利的详细信息,请参阅 RabMAb公司 ® 专利 .
属性
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表格 液体 -
储存说明 在4°C下装运。 短期储存在+4°C下(1-2周)。 交付时,等分。 储存于-20°C。 避免冷冻/解冻循环。 -
存储缓冲区 pH值:7.20 防腐剂:0.01%叠氮化钠 成分:49%PBS、50%甘油(甘油、甘油)、0.05%BSA -
浓度信息加载。。。 -
纯度 蛋白质A纯化 -
克隆性 单克隆 -
克隆编号 E191型 -
同位素 免疫球蛋白G -
研究领域
相关产品
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替代版本 -
兼容的辅助设备 -
同位素控制 -
阳性对照 -
重组蛋白
应用
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目标
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功能 核小体的核心成分。 核小体将DNA包裹并压缩成染色质,限制了需要DNA作为模板的细胞机制对DNA的访问。 因此,组蛋白在转录调控、DNA修复、DNA复制和染色体稳定性中发挥着核心作用。 DNA可及性是通过组蛋白的一系列复杂的翻译后修饰(也称为组蛋白密码)和核小体重塑来调节的。 -
序列相似性 属于组蛋白H3家族。 -
发育阶段 在S期表达,然后随着分化过程中细胞分裂减慢,表达强烈下降。 -
翻译后 修改 乙酰化通常与基因激活有关。 Lys-10(H3K9ac)上的乙酰化破坏Arg-9(H3R8me2s)的甲基化。 Lys-19(H3K18ac)和Lys-24(H3K24ac)上的乙酰化有利于Arg-18(H3R17me)上的甲基化。 PADI4在Arg-9(H3R8ci)和/或Arg-18(H3R17ci)处的瓜氨酸化会损害甲基化并抑制转录。 CARM1在Arg-18(H3R17me2a)处的不对称二甲基化与基因激活有关。 PRMT5在Arg-9(H3R8me2s)处的对称二甲基化与基因抑制有关。 PRMT6在Arg-3(H3R2me2a)处的不对称二甲基化与基因抑制有关,并且与H3 Lys-5甲基化(H3K4me2和H3K4me3)相互排斥。 H3R2me2a存在于基因的3'处,无论其转录状态如何,它在非活性启动子上富集,而在活性启动子中不存在。 Lys-5(H3K4me)、Lys-37(H3K36me)和Lys-80(H3K 79me)的甲基化与基因激活有关。 Lys-5(H3K4me)的甲基化促进H3和H4的后续乙酰化。 Lys-80甲基化(H3K79me)与DNA双链断裂(DSB)反应相关,是TP53BP1的特异靶点。 Lys-10(H3K9me)和Lys-28(H3K27me)的甲基化与基因抑制有关。 Lys-10(H3K9me)的甲基化是HP1蛋白(CBX1、CBX3和CBX5)的一个特定靶点,可防止随后Ser-11(H3S10ph)的磷酸化以及H3和H4的乙酰化。 Lys-5(H3K4me)和Lys-80(H3K 79me)的甲基化需要H2B在“Lys-120”的初步单泛素化。 赖氨酸-10(H3K9me)和赖氨酸-28(H3K27me)的甲基化在不活跃的X染色体染色质中富集。 前期GSG2/haspin在Thr-4(H3T3ph)下磷酸化,后期去磷酸化。 AURKB在Ser-11(H3S10ph)的磷酸化对有丝分裂和减数分裂期间的染色体凝聚和细胞周期进展至关重要。 此外,RPS6KA4和RPS6KA5在Ser-11(H3S10ph)处的磷酸化在间期很重要,因为它能够在外界刺激后转录基因,如丝裂原、应激、生长因子或紫外线照射,并导致基因的激活,如c-fos和c-jun, 与基因激活相关的赖氨酸阻止Lys-10(H3K9me)的甲基化但促进H3和H4的乙酰化。 AURKB在Ser-11(H3S10ph)的磷酸化介导HP1蛋白(CBX1、CBX3和CBX5)与异染色质的分离。 Ser-11的磷酸化(H3S10ph)也是肿瘤细胞转化的重要调节机制。 在有丝分裂期间或紫外线B照射下,MLTK亚型1、RPS6KA5或AURKB在Ser-29(H3S28ph)下磷酸化。 PRKCBB在Thr-7(H3T6ph)处的磷酸化是表观遗传转录激活的特异标记,可防止LSD1/KDM1A对Lys-5(H3K4me)的去甲基化。 在着丝粒处,DAPK3和PKN1在Thr-12(H3T11ph)从前期到后期的早期特异性磷酸化。 PKN1在Thr-12(H3T11ph)处的磷酸化是促进KDM4C/JMJD2C对Lys-10(H3K9me)去甲基化的表观遗传转录激活的特异标记。 JAK2在Tyr-42(H3Y41ph)处的磷酸化促进CBX5(HP1α)从染色质中排除。 RAG1在淋巴细胞中单泛素化,V(D)J重组需要单泛素(根据相似性)。 CUL4-DDB-RBX1复合物对紫外线照射的反应中泛素化。 这可能会削弱组蛋白和DNA之间的相互作用,并促进DNA可接近性以修复蛋白质。 -
手机定位 核心。 染色体。 -
UniProt提供的信息 -
数据库链接 Entrez基因: 8350 人类 Entrez基因: 8351 人类 Entrez基因: 8352 人类 Entrez基因: 8353 人类 Entrez基因: 8354 人类 Entrez基因: 8355 人类 Entrez基因: 8356 人类 Entrez基因: 8357 人类
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替代名称 H3组蛋白家族成员E假基因抗体 H3组蛋白家族成员A抗体 H3/A抗体
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图像
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免疫沉淀稀释度为1/60。 用ab32388以1/500稀释液(2.444μg/ml)对免疫沉淀物进行蛋白质印迹。 用于IP二级抗体(HRP)的VeriBlot( 阿布131366 )稀释度为1:1000。 阻塞/稀释缓冲液和浓度:5%NFDM/TBST。 所有车道: 车道1: 用0.5µM诺卡唑处理HeLa(人宫颈腺癌上皮细胞),在10µg条件下进行24小时全细胞裂解 车道2: 诺可唑处理的HeLa全细胞裂解液中的ab32388 IP 3号车道: 兔单克隆IgG( 约172730 )在诺卡唑处理的HeLa全细胞裂解液中代替ab32388 观察到的频带大小: 17千Da 为什么实际的频带大小与预测的不同? -
根据Abcam X-ChIP协议从HeLa细胞制备染色质。 用甲醛固定细胞10分钟。 使用25µg染色质、5µg ab32388(红色)和20µl蛋白A/g sepharose珠进行ChIP。 将兔正常IgG添加到珠子对照组(灰色)。 免疫沉淀DNA通过实时PCR(Sybr green方法)定量。 引物和探针位于转录区的第一kb。 -
4%对甲醛固定、0.1%tritonX-100透性HeLa(宫颈腺癌人上皮细胞系)细胞的免疫荧光分析,LP饥饿和无目标,用Ab32388在1/100稀释度下标记抗组蛋白H3(磷酸化S28),然后用山羊抗兔次级IgG AlexaFluor®488( 约150077 )稀释度为1/1000的二级抗体(绿色)。 共聚焦图像显示HeLa细胞M期核染色,LP处理后信号减弱。 对于pan抗体,LP处理后无显著差异。 数据主要显示细胞核染色 -
所有车道: 抗-Histone H3(磷酸化S28)抗体[E191]-ChIP等级(ab32388),1/1000稀释 车道1: HeLa(宫颈腺癌人上皮细胞系)全细胞裂解物 车道2: 用100ng/ml诺卡唑处理HeLa(宫颈腺癌人上皮细胞系)细胞的全细胞裂解液18小时 3号车道: 用100ng/ml诺卡唑处理HeLa(宫颈腺癌人上皮细胞系)细胞的全细胞裂解物18小时。 膜与磷酸酶孵育 每车道15µg的裂解液/蛋白质。 次要 所有车道: 山羊抗狂犬病IgG H&L(HRP)( ab97051型 )稀释1/20000 预测的带宽大小: 17千Da 观察到的频带大小: 17千Da 暴露时间: 15秒 阻塞/稀释缓冲液:2%BSA/TBST -
使用稀释度为1/100的ab32388进行斑点杂交。 通道1-未修饰的H3肽。 通道2-H3S28ph肽。 通道3-H3.3S28ph肽。 通道4-H3.3S31ph肽。 HRP结合的山羊抗兔(H+L)用作次级抗体,稀释度为1/2500。 暴露时间为3分钟,使用的稀释和封闭缓冲液为5%NFDM/TBST。 -
所有车道: 抗-Histone H3(磷酸化S28)抗体[E191]-ChIP等级(ab32388),1/2000稀释 车道1: NIH 3T3细胞裂解物-未经处理 车道2: NIH 3T3细胞裂解物-用FBS+CalA处理。 预测的带宽大小: 17千Da 观察到的频带大小: 17千Da -
在Leica Bond上进行的人类正常结肠福尔马林固定石蜡包埋组织切片中ab32388染色组蛋白H3的IHC图像。 用柠檬酸钠缓冲液(pH6,表位检索溶液1)进行热介导抗原检索预处理20分钟。 然后在室温下用ab32388(0.1 ug/ml)孵育切片15分钟,并使用HRP共轭紧凑聚合物系统进行检测。 DAB被用作显色剂。 然后用苏木精对切片进行复染,并用DPX固定。 阴性对照组未使用一级抗体(如插图所示)。 对于其他IHC染色系统(自动化和非自动化),客户应优化可变参数,如抗原回收条件、初级抗体浓度和抗体孵育时间。 *从人类研究组织库获得的组织,由NIHR剑桥生物医学研究中心支持 -
显示用ab32388染色的HeLa细胞的叠加直方图(红线)。 用80%甲醇固定细胞(5分钟),然后用0.1%PBS-Tween渗透20分钟。然后在1x PBS/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸中孵育细胞,以阻断非特异性蛋白质相互作用,然后在22°C下用抗体(ab32388,1/100稀释)孵育30分钟。 使用的二级抗体是Alexa Fluor ® 488山羊抗兔IgG(H+L)( 约150077 )在22°C下以1/2000稀释30分钟。 同型对照抗体(黑线)为兔IgG(单克隆)(1µg/1x10 6 细胞)在相同条件下使用。 未标记样本(蓝线)也用作对照。 使用20mW氩离子激光器(488nm)和525/30带通滤波器采集了超过5000个事件。 -
重叠直方图显示用ab32388染色的HeLa细胞(红线)。 细胞用4%多聚甲醛固定,然后用90%甲醇渗透。 然后将细胞在1x PBS/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸中孵育,以阻断非特异性蛋白质-蛋白质相互作用,然后在22°C下用抗体(ab32388,1/1200稀释,1.02µg/ml)孵育30分钟。 使用的二级抗体是Alexa Fluor ® 488山羊抗兔IgG(H+L)( 约150077 )在22°C下以1/2000稀释30分钟。 同型对照抗体(黑线)为兔IgG(单克隆)( 约172730 )(1微克/1x10 6 细胞)在相同条件下使用。 未标记样本(蓝线)也用作对照。 使用20mW氩离子激光器(488nm)和525/30带通滤波器采集了超过5000个事件。
协议
数据表和文件
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SDS下载 -
数据表下载
工具书类 (13)
李杰 等人。 使用基于CRISPR/Cas9的染色质激酶进行可编程人类组蛋白磷酸化和基因激活。 国家公社 12:896 (2021). 公共医学:33563994 博奇卡吉一世 等人。 H3.3K27M癌组蛋白影响儿童胶质瘤的复制应激结果并引起基因组不稳定。 公共科学图书馆-基因 17:e1009868(2021)。 公共医学:34752469 王尔德·S 等人。 用于表征基因毒物的机械蛋白质生物标记物的图像分析:Aneugens、clastogens和活性氧诱导物。 环境分子诱变剂 61:534-550(2020年)。 公共医学:32297368 金·S 等人。 PRMT6介导的H3R2me2a引导Aurora B进入染色体臂,以进行适当的染色体分离。 国家公社 11:612 (2020). 公共医学:32001712 阿玛切A 等人。 组蛋白H3.3磷酸化放大刺激诱导的转录。 自然 583:852-857 (2020). 公共医学:32699416