主要功能和细节
兔多克隆到组蛋白H3(单甲基K9)-ChIP级 适用于:WB、ChIP、ICC/IF 反应对象:奶牛、人类 同位素:IgG
概述
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产品名称 -
描述 兔多克隆到组蛋白H3(单甲基K9)-ChIP级 -
寄主物种 兔子 -
特异性 针对组蛋白H3的单甲基赖氨酸9。 组蛋白H3的赖氨酸27没有交叉反应。 -
经过测试的应用程序 -
物种反应性 与以下物质反应: 奶牛,人类 预计用于: 秀丽隐杆线虫,多种其他物种,哺乳动物 -
免疫原 合成肽。 此信息为Abcam和/或其供应商专有。 (肽可用作 ab1771年 ) -
一般注意事项 多年来,生命科学行业一直面临着再现性危机。 Abcam正在通过我们的一系列重组单克隆抗体和用于金标准验证的敲除编辑细胞系引领解决这一问题。 购买前请检查此产品是否满足您的需求。 如果您有任何问题、特殊要求或疑虑,请在购买之前向我们发送查询和/或联系我们的支持团队。 以下是本产品的推荐替代品,以及出版物、客户评论和问答
属性
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表格 液体 -
储存说明 在4°C下装运。 短期储存在+4°C下(1-2周)。 交付时,等分。 储存于-20°C或-80°C。 避免冷冻/解冻循环。 -
存储缓冲区 pH值:7.40 防腐剂:0.02%叠氮化钠 成分:PBS 浓度<1mg/ml的该产品批次可以添加BSA作为稳定剂。 如果您想了解有关特定批次配方的信息,请联系我们的科学支持团队,他们将乐于提供帮助。 -
浓度信息加载。。。 -
纯度 免疫原亲和力纯化 -
克隆性 多克隆 -
同位素 免疫球蛋白G -
研究领域
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兼容的辅助设备 -
对应的未修饰肽 -
同位素控制 -
重组蛋白 -
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应用
目标
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功能 核小体的核心成分。 核小体将DNA包裹并压缩成染色质,限制了需要DNA作为模板的细胞机制对DNA的访问。 因此,组蛋白在转录调控、DNA修复、DNA复制和染色体稳定性中发挥着核心作用。 DNA可及性是通过组蛋白的一系列复杂的翻译后修饰(也称为组蛋白密码)和核小体重塑来调节的。 -
序列相似性 属于组蛋白H3家族。 -
发育阶段 在S期表达,然后随着分化过程中细胞分裂减慢,表达强烈下降。 -
翻译后 修改 乙酰化通常与基因激活有关。 Lys-10(H3K9ac)上的乙酰化破坏Arg-9(H3R8me2s)的甲基化。 Lys-19(H3K18ac)和Lys-24(H3K24ac)上的乙酰化有利于Arg-18(H3R17me)上的甲基化。 PADI4在Arg-9(H3R8ci)和/或Arg-18(H3R17ci)处的瓜氨酸化会损害甲基化并抑制转录。 CARM1在Arg-18(H3R17me2a)处的不对称二甲基化与基因激活有关。 PRMT5在Arg-9(H3R8me2s)处的对称二甲基化与基因抑制有关。 PRMT6在Arg-3(H3R2me2a)处的不对称二甲基化与基因抑制有关,并且与H3 Lys-5甲基化(H3K4me2和H3K4me3)相互排斥。 H3R2me2a存在于基因的3'处,无论其转录状态如何,它在非活性启动子上富集,而在活性启动子中不存在。 Lys-5(H3K4me)、Lys-37(H3K36me)和Lys-80(H3K 79me)的甲基化与基因激活有关。 Lys-5(H3K4me)的甲基化促进H3和H4的后续乙酰化。 Lys-80甲基化(H3K79me)与DNA双链断裂(DSB)反应相关,是TP53BP1的特异靶点。 Lys-10(H3K9me)和Lys-28(H3K27me)的甲基化与基因抑制有关。 Lys-10(H3K9me)的甲基化是HP1蛋白(CBX1、CBX3和CBX5)的一个特定靶点,可防止随后Ser-11(H3S10ph)的磷酸化以及H3和H4的乙酰化。 Lys-5(H3K4me)和Lys-80(H3K 79me)的甲基化需要H2B在“Lys-120”的初步单泛素化。 Lys-10(H3K9me)和Lys-28(H3K27me)的甲基化富集在非活性X染色体染色质中。 前期GSG2/haspin在Thr-4(H3T3ph)下磷酸化,后期去磷酸化。 AURKB在Ser-11(H3S10ph)的磷酸化对有丝分裂和减数分裂期间的染色体凝聚和细胞周期进展至关重要。 此外,RPS6KA4和RPS6KA5在Ser-11(H3S10ph)处的磷酸化在间期很重要,因为它能够在外界刺激后转录基因,如丝裂原、应激、生长因子或紫外线照射,并导致基因的激活,如c-fos和c-jun, 与基因激活相关,防止Lys-10(H3K9me)甲基化,但促进H3和H4的乙酰化。 AURKB在Ser-11(H3S10ph)的磷酸化介导HP1蛋白(CBX1、CBX3和CBX5)与异染色质的分离。 Ser-11的磷酸化(H3S10ph)也是肿瘤细胞转化的重要调节机制。 在有丝分裂期间或紫外线B照射下,MLTK亚型1、RPS6KA5或AURKB在Ser-29(H3S28ph)下磷酸化。 PRKCBB在Thr-7(H3T6ph)处的磷酸化是表观遗传转录激活的特异标记,可防止LSD1/KDM1A对Lys-5(H3K4me)的去甲基化。 在着丝粒处,DAPK3和PKN1在Thr-12(H3T11ph)从前期到后期的早期特异性磷酸化。 PKN1在Thr-12(H3T11ph)处的磷酸化是促进KDM4C/JMJD2C对Lys-10(H3K9me)去甲基化的表观遗传转录激活的特异标记。 JAK2在Tyr-42(H3Y41ph)处的磷酸化促进CBX5(HP1α)从染色质中排除。 RAG1在淋巴细胞中单泛素化,V(D)J重组需要单泛素(根据相似性)。 CUL4-DDB-RBX1复合物对紫外线照射的反应中泛素化。 这可能会削弱组蛋白和DNA之间的相互作用,并促进DNA可接近性以修复蛋白质。 -
手机定位 核心。 染色体。 -
UniProt提供的信息 -
数据库链接 Entrez基因: 8350 人类 Entrez基因: 8351 人类 Entrez基因: 8352 人类 Entrez基因: 8353 人类 Entrez基因: 8354 人类 Entrez基因: 8355 人类 Entrez基因: 8356 人类 Entrez基因: 8357 人类
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替代名称 H3组蛋白家族成员E假基因抗体 H3组蛋白家族成员A抗体 H3/A抗体
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图像
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根据Abcam X-ChIP协议从Hela细胞制备染色质。 用甲醛固定细胞10分钟。 使用25µg染色质、2µg ab8896(蓝色)和20µl蛋白A/g sepharose珠进行ChIP。 未向珠子对照组(黄色)添加抗体。 免疫沉淀DNA通过实时PCR(Taqman方法用于活性和非活性位点,Sybr green方法用于异色位点)进行定量。 引物和探针位于转录区的第一kb。 -
抗-Histone H3(单甲基K9)抗体-ChIP等级(ab8896),稀释度为1/300(在20°C下培养10分钟)。使用的稀释剂缓冲液为TBS中0.5%的牛奶,0.1%吐温。)+15µg的HUH-7细胞 次要 羊抗兔IgG(HRP)1/20000稀释 预测的带宽大小: 15千Da
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所有车道: 抗-Histone H3(单甲基K9)抗体-ChIP等级(ab8896),1µg/ml 车道1: 小牛胸腺组蛋白制备 车道2: 用人组蛋白H3(单甲基K9)肽制备小牛胸腺组蛋白( ab1771年 )0.5µg/ml 3号车道: 小牛胸腺组蛋白的制备 人组蛋白H3(二甲基K9)肽( 公元1772年 )0.5µg/ml 车道4: 小牛胸腺组蛋白的制备 人组蛋白H3(三甲基K9)肽( 公元1773年 )0.5µg/ml 车道5: 用人组蛋白H3(单甲基K27)肽制备小牛胸腺组蛋白( 约1780年 )0.5µg/ml 车道6: 小牛胸腺组蛋白的制备 人组蛋白H3(二甲基K27)肽( 公元1781年 )0.5µg/ml 7号车道: 小牛胸腺组蛋白制剂 人组蛋白H3(三甲基K27)肽( 公元1782年 )0.5µg/ml 第8车道: 用人组蛋白H3(单甲基K4)肽制备小牛胸腺组蛋白( ab1340型 )0.5µg/ml 9号车道: 小牛胸腺组蛋白的制备 人类组蛋白H3(未修饰)肽( 约7228 )0.5µg/ml 10号车道: 用人组蛋白H3(未修饰)肽制备小牛胸腺组蛋白( ab2623年 )0.5µg/ml 每车道0.5µg的裂解液/蛋白质。 次要 所有车道: 羊与兔IgG H&L(HRP)多克隆预吸附(1/10000稀释) 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 15千Da 观察到的频带大小: 17千Da 为什么实际的频带大小与预测的不同? ab8896在17kDa时特异性识别小牛胸腺裂解物中的单甲基K9(1区)。 使用免疫肽(通道2)成功阻断ab8896 公元1771年 ),但不是二甲基K9(车道3 公元1772年 ),三甲基K9(4车道 公元1773年 ),一甲基K27(车道5 约1780年 ),二甲基K27(6车道 公元1781年 ),三甲基K27(7号车道 公元1782年 ),一甲基K4(8号车道 ab1340型 )也不是相应的未修饰肽(通道9 约7228 ,车道10 约2623 ). 这意味着ab8896对单甲基K9具有特异性。 -
用ICC/IF(免疫细胞化学/免疫荧光)对HeLa(宫颈癌细胞系)细胞组蛋白H3(单甲基K9)进行Ab8896染色。 用多聚甲醛固定细胞,用0.3%Triton/TBS渗透,用2%血清在25℃下封闭30分钟。 样品与一级抗体在25°C下以1/100稀释培养1小时。 Alexa Fluor公司 ® 488-结合羊抗兔抗体作为次级抗体,稀释度为1/1000。 -
稀释剂:TBS+0.1%吐温20+5%BSA。在4°C下培养12小时+20µg的HeLa全细胞裂解物 次要 1/2000稀释度的抗抗体IgG、HRP-相关抗体 预测的带宽大小: 15千Da 暴露时间: 1分钟
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用ICC/IF(免疫细胞化学/免疫荧光)对HeLa细胞组蛋白H3(单甲基K9)进行Ab8896染色。 用多聚甲醛固定细胞,并用0.05%Triton X100在PBS中渗透。样品在22°C的PBS中与1/200稀释度的一级抗体孵育1小时。 Alexa Fluor公司 ® 488-结合羊抗兔抗体作为次级抗体,稀释度为1/200。 -
ab8896染色HeLa细胞的ICC/IF图像。 细胞被100%甲醇固定(5分钟),然后在1%BSA/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸和0.1%PBS-Tween中孵育1小时,以使细胞渗透并阻断非特异性蛋白-蛋白质相互作用。 然后将细胞与抗体ab8896以1µg/ml在+4°C下孵育过夜。 二级抗体(伪绿色)是一只山羊 抗兔Alexa Fluor®488 ( 约150081 )IgG(H+L)预吸附,以1/1000稀释度使用1h。 Alexa Fluor®594 WGA用于在室温下以1/200的稀释度标记质膜(伪彩色红色)1小时。 DAPI用于在室温下以1.43µM的浓度对细胞核(伪蓝色)染色1小时。 -
所有车道: 抗-Histone H3(单甲基K9)抗体-ChIP等级(ab8896),1/1000稀释 车道1: 从Hela细胞制备的核裂解物:未经处理的SiRNA 车道2: 用G9a-SiRNA处理Hela细胞制备核裂解物 每车道10µg的裂解液/蛋白质。 次要 所有车道: 碱性磷酸酶结合兔多克隆兔IgG(Fc)1/5000稀释 预测的带宽大小: 15千Da 观察到的频带大小: 16千Da 为什么实际的频带大小与预测的不同? 暴露时间: 10分钟
协议
数据表和文件
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数据表下载
工具书类 (59)
H女士RA 等人。 干扰素导致HCV表观基因组结疤,并在病毒清除后产生可瞄准的漏洞。 肝病学 75:983-996(2022)。 公共医学:34387871 Delaney CE公司 等人。 SETDB1-like MET-2独立于其H3K9me相关催化活性促进转录沉默和发育。 自然结构分子生物学 29:85-96 (2022). 公共医学:35102319 Whetstine JR&Van Rechem C公司 一种基于细胞分类的细胞周期小规模ChIP测序协议。 STAR协议 3:101243 (2022). 公共医学:35310076 刘浩 等人。 G蛋白偶联受体GPR17通过增加多梳抑制复合物1介导的活性氧的产生来抑制胶质瘤的发展。 细胞死亡病 12:610 (2021). 公共医学:34120140 胡毅 等人。 组蛋白去甲基化酶PHF8通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进非小细胞肺癌的细胞生长和转移。 组织病理学 36:869-877(2021)。 公共医学:34100557