主要功能和细节
组蛋白H3(二甲基K4,三甲基K4)-ChIP级小鼠单克隆抗体[mAbcam 6000] 适用于:ICC/IF、WB、ChIP、Flow Cyt(Intra) 反应对象:奶牛、人类、大米 同种型:IgG2b
相关共轭物和制剂
概述
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产品名称 -
描述 组蛋白H3(二甲基K4,三甲基K4)-ChIP级小鼠单克隆抗体[mAbcam 6000] -
寄主物种 鼠标 -
特异性 当用于小牛胸腺组蛋白制备物的蛋白质印迹时,该抗体检测到一条适当大小的条带(见图)。 它被组蛋白H3的二甲基化K4和三甲基化的K4对应的肽特异性阻断。 在ELISA和Western Blot中观察到与单甲基K4肽的轻微交叉反应。 -
经过测试的应用程序 -
物种反应性 与以下物质反应: 奶牛、人类、大米 预计用于: 小鼠、大鼠、兔子、鸡、酿酒酵母、非洲爪蟾、拟南芥、秀丽隐杆线虫、黑腹果蝇、绒球裂殖酵母、粗糙神经孢菌、白色念珠菌 -
免疫原 -
阳性对照 ChIP:从U-2 OS细胞制备染色质。 流式细胞仪(内部):HeLa细胞。 WB:小牛胸腺组蛋白制剂核裂解物。
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一般注意事项 该抗体克隆由Abcam公司生产。 如果您需要为您的实验定制缓冲配方或共轭物,请联系 orders@abcam.com . 多年来,生命科学行业一直面临着再现性危机。 Abcam正在通过我们的一系列重组单克隆抗体和用于金标准验证的敲除编辑细胞系引领解决这一问题。 购买前请检查此产品是否满足您的需求。 如果您有任何问题、特殊要求或疑虑,请在购买前向我们发送询问和/或联系我们的支持团队。 以下是本产品的推荐替代品,以及出版物、客户评论和问答
属性
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表格 液体 -
储存说明 在4°C下装运。 短期储存在+4°C下(1-2周)。 交付时,等分。 储存于-20°C或-80°C。 避免冷冻/解冻循环。 -
存储缓冲区 pH值:7.40 防腐剂:0.02%叠氮化钠 成分:PBS,6.97%L-精氨酸 -
正在加载浓度信息。。。 -
纯度 蛋白质G纯化 -
克隆性 单克隆 -
克隆编号 单抗6000 -
骨髓瘤 Sp2/0-Ag14 -
同位素 IgG2b -
轻链型 卡帕 -
研究领域
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替代版本 -
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兼容的辅助设备 -
对应的未修饰肽 -
免疫肽(阻断) -
同位素控制 -
重组蛋白 -
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应用
目标
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功能 核小体的核心成分。 核小体将DNA包裹并压缩成染色质,限制了需要DNA作为模板的细胞机制对DNA的访问。 因此,组蛋白在转录调控、DNA修复、DNA复制和染色体稳定性中发挥着核心作用。 DNA可及性是通过组蛋白的一系列复杂的翻译后修饰(也称为组蛋白密码)和核小体重塑来调节的。 -
序列相似性 属于组蛋白H3家族。 -
发育阶段 在S期表达,然后随着分化过程中细胞分裂减慢,表达强烈下降。 -
翻译后 修改 乙酰化通常与基因激活有关。 Lys-10(H3K9ac)上的乙酰化破坏Arg-9(H3R8me2s)的甲基化。 Lys-19(H3K18ac)和Lys-24(H3K24ac)上的乙酰化有利于Arg-18(H3R17me)上的甲基化。 PADI4在Arg-9(H3R8ci)和/或Arg-18(H3R17ci)处的瓜氨酸化会损害甲基化并抑制转录。 CARM1在Arg-18(H3R17me2a)处的不对称二甲基化与基因激活有关。 PRMT5在Arg-9(H3R8me2s)处的对称二甲基化与基因抑制有关。 PRMT6在Arg-3(H3R2me2a)处的不对称二甲基化与基因抑制有关,并且与H3 Lys-5甲基化(H3K4me2和H3K4me3)相互排斥。 H3R2me2a存在于基因的3'处,无论其转录状态如何,它在非活性启动子上富集,而在活性启动子中不存在。 Lys-5(H3K4me)、Lys-37(H3K36me)和Lys-80(H3K 79me)的甲基化与基因激活有关。 Lys-5(H3K4me)的甲基化促进H3和H4的后续乙酰化。 Lys-80甲基化(H3K79me)与DNA双链断裂(DSB)反应相关,是TP53BP1的特异靶点。 Lys-10(H3K9me)和Lys-28(H3K27me)的甲基化与基因抑制有关。 Lys-10(H3K9me)的甲基化是HP1蛋白(CBX1、CBX3和CBX5)的一个特定靶点,可防止随后Ser-11(H3S10ph)的磷酸化以及H3和H4的乙酰化。 Lys-5(H3K4me)和Lys-80(H3K 79me)的甲基化需要H2B在“Lys-120”的初步单泛素化。 Lys-10(H3K9me)和Lys-28(H3K27me)的甲基化富集在非活性X染色体染色质中。 前期GSG2/haspin在Thr-4(H3T3ph)下磷酸化,后期去磷酸化。 AURKB在Ser-11(H3S10ph)的磷酸化对有丝分裂和减数分裂期间的染色体凝聚和细胞周期进展至关重要。 此外,RPS6KA4和RPS6KA5在Ser-11(H3S10ph)处的磷酸化在间期很重要,因为它能够在外界刺激后转录基因,如丝裂原、应激、生长因子或紫外线照射,并导致基因的激活,如c-fos和c-jun, 与基因激活相关,防止Lys-10(H3K9me)甲基化,但促进H3和H4的乙酰化。 AURKB在Ser-11(H3S10ph)的磷酸化介导HP1蛋白(CBX1、CBX3和CBX5)与异染色质的分离。 Ser-11的磷酸化(H3S10ph)也是肿瘤细胞转化的重要调节机制。 在有丝分裂期间或紫外线B照射下,MLTK亚型1、RPS6KA5或AURKB在Ser-29(H3S28ph)下磷酸化。 PRKCBB在Thr-7(H3T6ph)处的磷酸化是表观遗传转录激活的特异标记,可防止LSD1/KDM1A对Lys-5(H3K4me)的去甲基化。 在着丝粒处,DAPK3和PKN1在Thr-12(H3T11ph)从前期到后期的早期特异性磷酸化。 PKN1在Thr-12(H3T11ph)处的磷酸化是表观遗传转录激活的特异性标签,其促进KDM4C/JMJD2C对Lys-10(H3K9me)的去甲基化。 JAK2在Tyr-42(H3Y41ph)处的磷酸化促进CBX5(HP1α)从染色质中排除。 RAG1在淋巴细胞中单泛素化,V(D)J重组需要单泛素(根据相似性)。 CUL4-DDB-RBX1复合物对紫外线照射的反应中泛素化。 这可能会削弱组蛋白和DNA之间的相互作用,并促进DNA对修复蛋白质的可及性。 -
手机定位 核心。 染色体。 -
UniProt提供的信息 -
数据库链接 Entrez基因: 8350 人类 Entrez基因: 8351 人类 Entrez基因: 8352 人类 Entrez基因: 8353 人类 Entrez基因: 8354 人类 Entrez基因: 8355 人类 Entrez基因: 8356 人类 Entrez基因: 8357 人类
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替代名称 H3组蛋白家族成员E假基因抗体 H3组蛋白家族成员A抗体 H3/A抗体
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图像
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根据Abcam X-ChIP协议从U2OS细胞制备染色质。 用甲醛固定细胞10分钟。 使用25µg染色质、2µg ab6000(蓝色)和20µl蛋白A/g sepharose珠进行ChIP。 未向珠子对照组(黄色)添加抗体。 用实时PCR(Taqman方法)定量免疫沉淀DNA。 引物和探针位于转录区的第一kb。 -
ab6000对人类细胞(U2OS)的免疫荧光成像显示,弥漫性背景核染色对应于K4的全局二甲基化,具有多个较亮的染色灶。 核仁或细胞质染色背景的完全缺乏证实了该抗体在该应用中的高度特异性。 使用标准多聚甲醛技术进行IF (在PBS缓冲PFH 4%中固定5分钟,用0.5%triton-PBS渗透5分钟,再用5%牛奶/0.2%吐温封闭1小时。一级抗体在1/200的5%牛奶/0.2%tween中使用1小时,二级抗体Alexa 488使用30分钟。所有封闭和孵育步骤在37度下进行。 由于我们网站上图像的大小限制,不幸的是,我们无法显示更高质量的图像。 -
所有车道: 抗-Histone H3(二甲基K4,三甲基K4)抗体[mAbcam 6000]-ChIP等级(ab6000),1µg/ml 车道1: 小牛胸腺组蛋白制备核裂解物 车道2: 小牛胸腺组蛋白核裂解物的制备 人类组蛋白H3(未修饰)肽( 约7228 )0.5微克 3号车道: 用人组蛋白H3(单甲基K4)肽制备小牛胸腺组蛋白核裂解物( ab1340型 )0.5微克 车道4: 用人组蛋白H3(二甲基K4)肽制备小牛胸腺组蛋白核裂解物( 约7768 )0.5微克 车道5: 小牛胸腺组蛋白核裂解物的制备 人组蛋白H3(三甲基K4)肽( ab1342号 )0.5µg时 车道6: 用人组蛋白H3(单甲基K9)肽制备小牛胸腺组蛋白核裂解物( 公元1771年 )0.5微克 7号车道: 小牛胸腺组蛋白核裂解物的制备 人组蛋白H3(二甲基K9)肽( 公元1772年 )0.5微克 第8车道: 小牛胸腺组蛋白核裂解物的制备 人组蛋白H3(三甲基K9)肽( 公元1773年 )0.5微克 9号车道: 用人组蛋白H3(单甲基K27)肽制备小牛胸腺组蛋白核裂解物( 约1780年 )0.5微克 10号车道: 小牛胸腺组蛋白核裂解物的制备 人组蛋白H3(二甲基K27)肽( 公元1781年 )0.5微克 11号车道: 小牛胸腺组蛋白核裂解物的制备 人组蛋白H3(三甲基K27)肽( 公元1782年 )0.5微克 每车道0.5µg的裂解液/蛋白质。 次要 所有车道: 山羊抗鼠IgG H&L(HRP)预吸附( 约97040 )稀释度为1/10000 使用ECL技术开发。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 15.2千帕 观察到的频带大小: 17千Da 为什么实际的频带大小与预测的不同? 暴露时间: 20分钟 -
重叠直方图显示用ab6000染色的HeLa细胞(红线)。 将细胞用80%甲醇固定(5分钟),然后用0.1%PBS吐温透化20分钟。然后将细胞在1x PBS/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸中孵育,以阻断非特异性蛋白质-蛋白质相互作用,然后用抗体(ab6000,1µg/1x10 6 电池)在22ºC下保持30分钟。 使用的二级抗体是DyLight ® 488山羊抗鼠IgG(H+L)( 约96879 )1/500稀释30分钟,22ºC。 同型对照抗体(黑线)为小鼠IgG2b[PLPV219]( 约91366 ,2微克/1x10 6 电池)在相同条件下使用。 采集了超过5000个事件。 该抗体在用4%多聚甲醛(10分钟)固定/用0.1%PBS-Tween渗透20分钟的HeLa细胞中发出阳性信号。 -
左图显示用4%甲醛固定的人Hep细胞单层,用0.5%Triton X-100渗透,用5%FCS在PBS中封闭(20分钟),用ab6000培养1小时(在PBS中和1%FCS中稀释1/200)。 用抗鼠罗丹明标记的二级抗体检测。 未染色区域代表核仁和异染色质,根据右图中同一细胞的DAPI覆盖判断。 这张图片是Christian Schoefer提交的评论的一部分。
数据表和文件
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SDS下载 -
数据表下载
工具书类 (40)
Yu M公司 等。 ASH1L PHD手指识别甲基化组蛋白H3K4并促进前列腺癌细胞生长的结构洞察。 前Oncol 12:906807 (2022). 公共医学:36033518 冷X 等。 表观遗传修饰依赖性雄激素受体的占据促进前列腺癌细胞中TSPY1的异位表达。 癌症科学 112:691-702(2021)。 公共医学:33185915 萨利希M 等。 公鸡精液的冷冻保存:解冻精子表观遗传修饰的证据。 病因学 142:15-25 (2020). 公共医学:31574396 牧师M 等。 pFAR4小质粒异染色质形成减少,可在小鼠肝脏中持续表达转基因。 摩尔热核酸 21:28-36 (2020). 公共医学:32505001 费利西略一世 等。 热应激影响人类α卫星DNA重复序列的H3K9me3水平。 基因(巴塞尔) 11:不适用(2020年)。 公共医学:32570830