主要功能和细节
组蛋白H3(二甲基K27,三甲基K27)的小鼠单克隆抗体[mAbcam 6147] 适用于:ICC/IF、ELISA、WB、Flow Cyt(Intra) 反应对象:老鼠、奶牛、人类 同位素:IgG1
概述
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产品名称 -
描述 组蛋白H3(二甲基K27,三甲基K27)的小鼠单克隆抗体[mAbcam 6147] -
寄主物种 鼠标 -
特异性 通过Western blot,该抗体被二甲基和三甲基K27肽强烈阻断,并且在Eed KO小鼠ES细胞裂解物中未检测到条带(该裂解物同时缺乏二甲基和三甲基K27)。 如ELISA所示,所有批次的ab6147与H3K27me2和H3K27me3都具有>40%的交叉反应性。 它与之反应的序列存在于所有哺乳动物和广泛的其他物种中,包括D.melanogaster、Arabidopsis、Chicken和Xenopus。 抗体将与存在修饰的任何上述物种发生反应。 pombe酵母和酿酒酵母的反应性尚不确定,因为等效蛋白质序列与上述物种略有不同。 -
经过测试的应用程序 -
物种反应性 与以下物质反应: 老鼠、奶牛、人类 预计用于: 大鼠、鸡、非洲爪蟾、拟南芥、秀丽隐杆线虫、黑腹果蝇 不与以下物质反应: 挑剔 -
免疫原 合成肽。 此信息为Abcam和/或其供应商专有。 (肽可用作 公元1782年 ) -
阳性对照 人类肺部
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一般注意事项 制备杂交瘤,并通过ELISA对免疫肽进行阳性筛选。 克隆对相应的未修饰肽和组蛋白H3的三甲基化K9对应的肽进行了阴性筛选。 该抗体克隆由Abcam公司生产。 如果您需要为您的实验定制缓冲配方或共轭物,请联系 orders@abcam.com . 多年来,生命科学行业一直面临着再现性危机。 Abcam正在通过我们的一系列重组单克隆抗体和用于金标准验证的敲除编辑细胞系引领解决这一问题。 购买前请检查此产品是否满足您的需求。 如果您有任何问题、特殊要求或疑虑,请在购买前向我们发送询问和/或联系我们的支持团队。 以下是本产品的推荐替代品,以及出版物、客户评论和问答
属性
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表格 液体 -
储存说明 在4°C下装运。 短期储存在+4°C下(1-2周)。 交付时,等分。 储存于-20°C或-80°C。 避免冷冻/解冻循环。 -
存储缓冲区 pH值:7.40 防腐剂:0.02%叠氮化钠 成分:PBS -
正在加载浓度信息。。。 -
纯度 蛋白质G纯化 -
克隆性 单克隆 -
克隆编号 单抗6147 -
同位素 IgG1 -
轻链型 卡帕 -
研究领域
相关产品
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兼容的辅助设备 -
免疫肽(阻断) -
同位素控制 -
重组蛋白
应用
目标
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功能 核小体的核心成分。 核小体将DNA包裹并压缩成染色质,限制了需要DNA作为模板的细胞机制对DNA的访问。 因此,组蛋白在转录调控、DNA修复、DNA复制和染色体稳定性中发挥着核心作用。 DNA可及性是通过组蛋白的一系列复杂的翻译后修饰(也称为组蛋白密码)和核小体重塑来调节的。 -
序列相似性 属于组蛋白H3家族。 -
发育阶段 在S期表达,然后随着分化过程中细胞分裂减慢,表达强烈下降。 -
翻译后 修改 乙酰化通常与基因激活有关。 Lys-10(H3K9ac)上的乙酰化破坏Arg-9(H3R8me2s)的甲基化。 Lys-19(H3K18ac)和Lys-24(H3K24ac)上的乙酰化有利于Arg-18(H3R17me)上的甲基化。 PADI4在Arg-9(H3R8ci)和/或Arg-18(H3R17ci)处的瓜氨酸化会损害甲基化并抑制转录。 CARM1在Arg-18(H3R17me2a)处的不对称二甲基化与基因激活有关。 PRMT5在Arg-9(H3R8me2s)处的对称二甲基化与基因抑制有关。 PRMT6在Arg-3(H3R2me2a)处的不对称二甲基化与基因抑制有关,并且与H3 Lys-5甲基化(H3K4me2和H3K4me3)相互排斥。 H3R2me2a存在于基因的3'处,无论其转录状态如何,它在非活性启动子上富集,而在活性启动子中不存在。 Lys-5(H3K4me)、Lys-37(H3K36me)和Lys-80(H3K 79me)的甲基化与基因激活有关。 Lys-5(H3K4me)的甲基化促进H3和H4的后续乙酰化。 Lys-80甲基化(H3K79me)与DNA双链断裂(DSB)反应相关,是TP53BP1的特异靶点。 Lys-10(H3K9me)和Lys-28(H3K27me)的甲基化与基因抑制有关。 Lys-10(H3K9me)的甲基化是HP1蛋白(CBX1、CBX3和CBX5)的一个特定靶点,可防止随后Ser-11(H3S10ph)的磷酸化以及H3和H4的乙酰化。 Lys-5(H3K4me)和Lys-80(H3K 79me)的甲基化需要H2B在“Lys-120”的初步单泛素化。 Lys-10(H3K9me)和Lys-28(H3K27me)的甲基化富集在非活性X染色体染色质中。 前期GSG2/haspin在Thr-4(H3T3ph)下磷酸化,后期去磷酸化。 AURKB在Ser-11(H3S10ph)的磷酸化对有丝分裂和减数分裂期间的染色体凝聚和细胞周期进展至关重要。 此外,RPS6KA4和RPS6KA5在Ser-11(H3S10ph)处的磷酸化在间期很重要,因为它能够在外界刺激后转录基因,如丝裂原、应激、生长因子或紫外线照射,并导致基因的激活,如c-fos和c-jun, 与基因激活相关,防止Lys-10(H3K9me)甲基化,但促进H3和H4的乙酰化。 AURKB在Ser-11(H3S10ph)的磷酸化介导HP1蛋白(CBX1、CBX3和CBX5)与异染色质的分离。 Ser-11的磷酸化(H3S10ph)也是肿瘤细胞转化的重要调节机制。 在有丝分裂期间或紫外线B照射下,MLTK亚型1、RPS6KA5或AURKB在Ser-29(H3S28ph)下磷酸化。 PRKCBB在Thr-7(H3T6ph)处的磷酸化是表观遗传转录激活的特异标记,可防止LSD1/KDM1A对Lys-5(H3K4me)的去甲基化。 在着丝粒处,DAPK3和PKN1在Thr-12(H3T11ph)从前期到后期的早期特异性磷酸化。 PKN1在Thr-12(H3T11ph)处的磷酸化是表观遗传转录激活的特异性标签,其促进KDM4C/JMJD2C对Lys-10(H3K9me)的去甲基化。 JAK2在Tyr-42(H3Y41ph)处的磷酸化促进CBX5(HP1α)从染色质中排除。 RAG1在淋巴细胞中单泛素化,V(D)J重组需要单泛素(根据相似性)。 CUL4-DDB-RBX1复合物对紫外线照射的反应中泛素化。 这可能会削弱组蛋白和DNA之间的相互作用,并促进DNA对修复蛋白质的可及性。 -
手机定位 核心。 染色体。 -
UniProt提供的信息 -
数据库链接 Entrez基因: 8350 人类 Entrez基因: 8351 人类 Entrez基因: 8352 人类 Entrez基因: 8353 人类 Entrez基因: 8354 人类 Entrez基因: 8355 人类 Entrez基因: 8356 人类 Entrez基因: 8357 人类
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替代名称 H3组蛋白家族成员E假基因抗体 H3组蛋白家族成员A抗体 H3/A抗体
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图像
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所有车道: 1µg/ml时抗-Histone H3(二甲基K27,三甲基K27)抗体[mAbcam 6147](ab6147) 车道1: 小牛胸腺组蛋白制备核裂解物 车道2: 用人组蛋白H3(未修饰)肽制备小牛胸腺组蛋白核裂解物( 约2623 )1µg 3号车道: 用人组蛋白H3(单甲基K4)肽制备小牛胸腺组蛋白核裂解物( ab1340型 )1µg 车道4: 用人组蛋白H3(二甲基K4)肽制备小牛胸腺组蛋白核裂解物( 约7768 )1µg 车道5: 小牛胸腺组蛋白核裂解物的制备 人组蛋白H3(三甲基K4)肽( ab1342号 )1µg 车道6: 用人组蛋白H3(单甲基K9)肽制备小牛胸腺组蛋白核裂解物( 公元1771年 )1µg 7号车道: 小牛胸腺组蛋白核裂解物的制备 人组蛋白H3(二甲基K9)肽( 公元1772年 )1µg 车道8: 小牛胸腺组蛋白核裂解物的制备 人组蛋白H3(三甲基K9)肽( 公元1773年 )1µg 9号车道: 用人组蛋白H3(单甲基K27)肽制备小牛胸腺组蛋白核裂解物( 约1780年 )1µg 10号车道: 小牛胸腺组蛋白核裂解物的制备 人组蛋白H3(二甲基K27)肽( 公元1781年 )1µg 11号车道: 小牛胸腺组蛋白核裂解物的制备 人组蛋白H3(三甲基K27)肽( 公元1782年 )1µg 每车道0.5µg的裂解液/蛋白质。 次要 所有车道: 山羊多克隆至小鼠IgG-H&L-Pre-Adsorbed(HRP),稀释度为1/5000 使用ECL技术开发。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 15千Da 观察到的频带大小: 17千Da 为什么实际的频带大小与预测的不同? 暴露时间: 1分钟 该印迹是在MES缓冲系统下使用4-12%双三凝胶产生的。 凝胶在200V下运行35分钟,然后在30V下转移到硝化纤维膜上70分钟。 然后使用2%牛血清白蛋白封闭膜一小时,然后在4°C下与ab6147孵育过夜。 使用ECL开发解决方案对抗体结合进行可视化 约133406 . -
ab6147染色的人HeLa细胞的ICC/IF图像。 细胞被PFA固定(10分钟),在TBS-T中渗透(20分钟),并在室温下与抗体(ab6147,1µg/ml)孵育1小时。 用1%BSA/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸淬灭自身荧光并阻断非特异性蛋白-蛋白质相互作用。 二级抗体(绿色)为Alexa Fluor®488山羊抗鼠IgG(H+L),以1/1000稀释度使用1h。 Alexa Fluor®594 WGA用于标记质膜(红色)。 DAPI染色细胞核(蓝色)。 -
所有车道: 1µg/ml时抗-Histone H3(二甲基K27,三甲基K27)抗体[mAbcam 6147](ab6147) 车道1: HeLa(人上皮癌细胞系)核裂解物 车道2: HeLa(人上皮癌细胞系)全细胞裂解液 3号车道: EED-/-小鼠ES全细胞裂解物 车道4: WT小鼠ES全细胞裂解液 每条泳道10µg的裂解物/蛋白质。 次要 所有车道: 山羊多克隆至小鼠IgG-H&L-Pre-Adsorbed(HRP),稀释度为1/5000 使用ECL技术开发。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 15千Da 观察到的频带大小: 17千Da 为什么实际的频带大小与预测的不同? 暴露时间: 10秒 该印迹是在MES缓冲系统下使用4-12%双三凝胶产生的。 凝胶在200V下运行35分钟,然后在30V下转移到硝化纤维膜上70分钟。 然后使用2%牛血清白蛋白将膜封闭一小时,然后与ab6147在4°C下孵育过夜。 使用ECL开发解决方案对抗体结合进行可视化 约133406 . -
对所有批次的ab6147进行ELISA测试,以对抗不同组蛋白H3修饰的肽。 结果显示与组蛋白H3-三甲基K27免疫肽有很强的结合( 公元1782年 )和组蛋白H3-二甲基K27,表明该抗体特异性识别组蛋白H3三甲基K27和二甲基K29修饰。 检测到组蛋白H3-二甲基K27修饰物的结合(>40%)( 公元1781年 ). 约2623 -组蛋白H3-未修饰 ab1340型 -组蛋白H3-单甲基K4 约7768 -组蛋白H3-二甲基K4 ab1342号 -组蛋白H3-三甲基K4 公元1771年 -组蛋白H3-单甲基K9 公元1772年 -组蛋白H3-二甲基K9 公元1773年 -组蛋白H3-三甲基K9 约1780年 -组蛋白H3-单甲基K27 公元1781年 -组蛋白H3-二甲基K27 公元1782年 -组蛋白H3-三甲基K27 -
ab6147染色小鼠2细胞胚胎的ICC/IF图像。 细胞用甲醛固定,用0.5%Triton渗透,并用ab6147在1/50的温度下在37°C孵育2小时。 在37°C下,在5%FCS血清中进行30分钟的阻断。 二级抗体(绿色)为Alexa Fluor®488山羊抗鼠IgG,稀释度为1/250。 PI染色DNA(红色)。 -
免疫荧光分析 秀丽线虫 生殖细胞和性腺,用ab6147染色组蛋白H3(三甲基K27)。 用甲醇固定细胞,在液氮中冷冻并裂解,在20°C下用0.5%牛血清白蛋白封闭1小时。 样品与一级抗体(稀释液中的1/500)在4°C下孵育14小时。 以FITC-偶联的驴抗鼠多克隆IgG(1/300)作为二级抗体。 -
重叠直方图显示用ab6147染色的HeLa细胞(红线)。 用80%甲醇固定细胞(5分钟),然后用0.1%PBS-Tween渗透20分钟。然后在1x PBS/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸中培养细胞,以阻断非特异性蛋白-蛋白质相互作用,然后用抗体(ab6147,1µg/1x10 6 电池)在22ºC下保持30分钟。 使用的二级抗体是山羊 防鼠DyLight®488 (IgG;H+L)( 约96879 )1/500稀释30分钟,22ºC。 同型对照抗体(黑线)为小鼠IgG1[ICIGG1]( ab91353型 ,2微克/1x10 6 电池)在相同条件下使用。 采集了超过5000个事件。 该抗体在用4%多聚甲醛(10分钟)固定/用0.1%PBS-Tween渗透20分钟的HeLa细胞中发出阳性信号。
数据表和文件
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SDS下载 -
数据表下载
工具书类 (31)
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