主要功能和细节
小鼠单克隆[H1alpha67]到HIF-1α 适用于:IP、ICC/IF、WB、Flow Cyt(Intra) 反应对象:人类 同位素:IgG2b
相关共轭物和制剂
概述
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产品名称 -
描述 小鼠单克隆[H1alpha67]到HIF-1α -
寄主物种 鼠标 -
经过测试的应用程序 -
物种反应性 与以下物质反应: 人类 预计使用: 老鼠,老鼠 -
免疫原 重组片段。 此信息为Abcam和/或其供应商专有。 -
阳性对照 -
一般注意事项 对于WB,我们建议使用阳性对照样品,如DFO或经氯化钴处理的核细胞裂解物,如 约180880 .确保细胞在缺氧状态下迅速溶解(2分钟内)。 装载大量样品(>50µg)并添加蛋白酶抑制剂(例如。 ab65621型 )也可以增强检测能力。 该抗体克隆由Abcam公司生产。 如果您需要为您的实验定制缓冲配方或共轭物,请联系 orders@abcam.com . 多年来,生命科学行业一直面临着再现性危机。 Abcam正在通过我们的一系列重组单克隆抗体和用于金标准验证的敲除编辑细胞系引领解决这一问题。 购买前请检查此产品是否满足您的需求。 如果您有任何问题、特殊要求或疑虑,请在购买之前向我们发送查询和/或联系我们的支持团队。 以下是本产品的推荐替代品,以及出版物、客户评论和问答
属性
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表格 液体 -
储存说明 在4°C下装运。 短期储存在+4°C下(1-2周)。 交付时,等分。 储存于-20°C。 避免冷冻/解冻循环。 -
存储缓冲区 pH值:7.40 防腐剂:0.02%叠氮化钠 成分:PBS,6.97%L-精氨酸 -
浓度信息加载。。。 -
纯度 蛋白质G纯化 -
克隆性 单克隆的 -
克隆编号 H1alpha67型 -
同位素 IgG2b -
研究领域
相关产品
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替代版本 -
检测试剂盒 -
ChIP相关产品 -
兼容的辅助设备 -
同种型对照 -
阳性对照 -
重组蛋白 -
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应用程序
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目标
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功能 作为缺氧适应性反应的主转录调节器发挥作用。 在缺氧条件下,激活40多个基因的转录,包括促红细胞生成素、葡萄糖转运蛋白、糖酵解酶、血管内皮生长因子和其他蛋白产物增加氧气输送或促进代谢适应缺氧的基因。 在胚胎血管生成、肿瘤血管生成和缺血性疾病的病理生理学中发挥重要作用。 与靶基因启动子缺氧反应元件(HRE)内的核心DNA序列5'-[AG]CGTG-3'结合。 激活需要招募转录辅激活物,如CREBPB和EP300。 活动通过与NCOA1或NCOA2两者的交互增强。 与氧化还原调节蛋白APEX的相互作用似乎激活了CTAD,并增强了NCOA1和CREBBP的激活。 -
组织特异性 在肾脏和心脏中含量最高的大多数组织中表达。 由于肿瘤内缺氧以及编码癌蛋白和抑癌基因突变,在大多数常见人类癌症及其转移瘤中过度表达。 -
序列相似性 包含1个基本螺旋-环-螺旋(bHLH)域。 包含1个PAC(PAS-associated C-terminal)域。 包含2个PAS(PER-ARNT-SIM)域。 -
域 包含两个独立的C末端交易激活域,NTAD和CTAD,它们协同工作。 它们的转录活性受到干预抑制域(ID)的抑制。 -
翻译后 修改 在常氧条件下,通过EGLN1/PHD1和EGLN2/PHD2在氧依赖降解域(ODD)的Pro-402和Pro-564上羟基化。 EGLN3/PHD3也显示为羟基化Pro-564。 羟基脯氨酸促进与VHL的相互作用,启动快速泛素化和随后的蛋白酶体降解。 USP20脱去泛素。 缺氧时,脯氨酸羟基化受损,泛素化减弱,导致稳定。 在常氧条件下,HIF1AN在Asn-803上羟基化,从而消除与CREBBP和EP300的相互作用并阻止转录激活。 这种羟基化被Cu/Zn-亲水体Clioquinol抑制。 Cys-800的S-亚硝基化可能是增加HIF-1复合物转录活性所必需的p300辅活化子的募集的原因。 DNA结合需要磷酸化。 磺酰化; 缺氧条件下SUMO1。 Sumoylation通过与RWDD3的相互作用而增强。 SENP1的去甲酰化导致HIF1A稳定性和转录活性增加。 泛素化; 在常压下,在羟基化和与VHL相互作用后。 Lys-532似乎是泛素化的主要位点。 铜/锌螯合剂氯喹啉通过阻止Asn-803的羟基化来抑制泛素化。 天冬酰胺的铁和2-酮戊二酸依赖性3-羟基化在HIF-CTAD结构域内具有(S)立体特异性。 -
手机定位 细胞质。 核心。 常氧状态下的细胞质,缺氧反应中的核移位。 低氧条件下,在细胞核中与SUMO1进行结肠酸化。 -
UniProt提供的信息 -
数据库链接 Entrez基因: 3091 人类 Entrez基因: 15251 鼠标 Entrez基因: 29560 老鼠 Omim公司: 603348 人类 瑞士保护银行: 问题16665 人类 瑞士保护银行: Q61221问题 鼠标 瑞士保护银行: O35800万 老鼠 尤尼金: 597216 人类
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替代名称 ARNT相互作用蛋白抗体 ARNT相互作用蛋白抗体 碱性螺旋-环-螺旋PAS蛋白MOP1抗体
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图像
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HeLa DFO细胞中HIF-1α的ab1染色。 细胞用100%甲醇固定(5分钟),用0.1%PBS-Triton X-100渗透5分钟,然后用1%BSA/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸在0.1%PBS吐温中封闭1小时。 然后在4°C下用10µg/ml的ab1将细胞培养过夜 ab6046年 ,兔多克隆到β-管蛋白-负载控制。 然后将细胞与 ab150117号 小鼠IgG H&L(Alexa Fluor)山羊多克隆二级抗体 ® 488)以1/1000稀释度预吸附(以绿色显示)和 约150080 、山羊抗兔IgG-H&L(Alexa Fluor)多克隆二级抗体 ® 594),稀释度为1/1000(以伪品红色显示)。 用DAPI标记细胞核DNA(以蓝色显示)。 也适用于用4%多聚甲醛固定的细胞(10分钟)。 使用高含量分析仪(Operetta CLS、Perkin Elmer)采集图像,并显示共焦截面的最大强度投影。 -
所有车道: 5µg/ml的抗-HIF-1α抗体[H1alpha67](ab1) 车道1: HeLa核提取物裂解物( 约150036 )40µg 车道2: Hela-DFO处理的(0.5mM,24h)核裂解液( 约180880 )40µg 3号车道: 40µg HeLa核控制 车道4: 40µg处理的HeLa核DFO 车道5: 重组人HIF-1α蛋白( 约154478 )0.001微克 次要 所有车道: 山羊抗鼠IgG H&L(HRP)预吸附( 约97040 )稀释度为1/10000 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 92千帕 暴露时间: 20分钟 我们建议使用TBST中5%的牛奶作为阻断剂,在一级和二级抗体孵育期间将TBST中的牛奶降至2%。 印迹是用 山羊抗鼠IgG H&L(HRP)预吸附(ab97040)二级抗体 -
使用0.5 mg HeLa Nuclear DFO处理的全细胞提取物免疫沉淀HIF-1α( 约180880 ),5µg针对HIF-1α的小鼠单克隆抗体和50µl g蛋白磁珠(+)。 对照组(-)未添加抗体。 将抗体与蛋白G珠搅拌培养10分钟,将HeLa DFO处理的全细胞提取物裂解液稀释在RIPA缓冲液中,添加到每个样品中,并在搅拌下再培养10分钟。 通过添加40µl SDS负载缓冲液洗脱蛋白质,并在70°C下培养10分钟; 在SDS-PAGE凝胶上分离10µl每个样品,转移到硝化纤维素膜上,用5%BSA封闭并用ab1探测。 次要:1:20000稀释的山羊多克隆至小鼠IgG轻链特异性(HRP)。 带:110 kDa; HIF1α -
1/400稀释的抗-HIF-1α抗体[H1alpha67](ab1)+人全细胞裂解物(人肺腺癌细胞系ADLC-5M2),用20µg的100摩尔去铁胺(DFO)处理16小时 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 92千帕 观察到的频带大小: 120千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? 使用PVDF膜并在5%牛奶中封闭16小时。 -
使用ab1的流式细胞术。 HeLa(宫颈腺癌人上皮细胞系)细胞未经处理或用1mM去甲氧胺培养( 约120727 )诱导HIF-1α蛋白水平。 然后将细胞胰蛋白酶化,用多聚甲醛固定,并用ab1(0.5µg/mL)染色。 PBS中的1%BSA用作阻断缓冲液。 ab1标记有抗鼠Alexa-Fluo ® 488染料。 显示未染色(黑色)、未处理(红色)和DFO处理(蓝色)细胞痕迹。
数据表和文件
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SDS下载 -
数据表下载
工具书类 (340)
温M 等。 HIF-1a介导远距离缺血预处理诱导的血浆细胞外颗粒对人脐静脉内皮细胞氧化应激损伤的保护作用。 实验治疗学 23:48 (2022). 公共医学:34917179 张M 等。 ARNT/HIF-1β介导的AhR和HIF-1信号通路之间的相互作用。 BMC药物毒理学 23:26 (2022). 公共医学:35473600 郭C 等。 miR-199a-5p通过靶向HIF-1α缓解阻塞性睡眠呼吸暂停综合征相关高血压。 免疫学研究杂志 2022:7236647 (2022). 公共医学:35935584 王X 等。 人类囊胚释放的miR‑519d‑3p通过靶向HIF1α负调控子宫内膜上皮细胞粘附。 国际分子医学杂志 50:无(2022)。 公共医学:35959792 基吉岛A 等。 凝血酶抑制可预防血管紧张素II诱导的小鼠高血压中的内皮功能障碍,并在不影响血压的情况下逆转20-HETE的过度生成。 国际分子科学杂志 22:不适用(2021年)。 公共医学:34445374