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批号143129订单号--未指定--问题描述非特定波段,它显示了120到180kd之间的错误波段大小。样品物种来自HepG2 2.2.15细胞。细胞提取物含有NaCl 150 mM、NP-40 1.0%、Nadeoxycholate 0.5%和SDS 0.1%。初级抗体在TBST中以1:400的ab8638(ABCAM),在室温下以5%的速度行驶约4小时。用TBST冲洗三次。检测方法穿孔ECL套件使用的正负控制以GepG2细胞为阴性对照,乙型肝炎病毒核心抗原为阳性对照抗体储存条件存储在-20?C类样品制备缓冲区包含4个?堆积缓冲液、SDS、甘油、巯基乙醇和溴酚蓝。装载的蛋白质量50微克电泳/凝胶条件12%的非还原性凝胶转移和阻塞条件用5%脱脂牛奶湿敷1小时次级抗体用来自[另一家公司]的山羊抗鼠抗体在1:3000孵育2小时。然后洗了三次。您试用了多少次该应用程序?5您是否运行了“无主”控制?是的你每次都得到同样的结果吗?是的附加注释我已找到120至180kd的链。但应该在21公里左右。
Abcam社区
已验证客户
2006年6月27日被问及
谢谢你的询问。听说你对这种抗体有困难,我很难过。我对你检测到的乐队的规模感到惊讶。我与该抗体的来源保持一致,以确定使用该抗体的预期带大小。在这个阶段,我建议您转移准备好的蛋白裂解物,并使用手术刀切割印迹,以便只有分子量小于100KDa的蛋白质才能进行免疫印迹,并且抗体集中在适当大小的蛋白质上。我建议使用3%牛血清白蛋白作为阻断剂进行隔夜培养。这种方法将显著增加检测肝炎核心抗原的机会。我希望这些信息能有所帮助。如果这种方法不能改善您的结果,请随时与我联系。
2006年6月29日答复