主要功能和细节
重组生产(无动物),实现高批次一致性和长期供应安全 兔单克隆[E235]到EGFR 适用于:IHC-P、流式细胞仪(内部)、ICC/IF、WB、IP 敲除已验证 反应对象:小鼠、大鼠、人类
相关共轭物和制剂
概述
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产品名称 -
描述 兔单克隆[E235]到EGFR -
寄主物种 兔子 -
特异性 该抗体检测表皮生长因子受体(EGFR)。 它不会与其他ERBB家族成员发生交叉反应。 该产物在使用A431(人鳞状细胞癌)裂解物的蛋白质印迹中产生强信号,该裂解物自然过表达EGFR蛋白。 对于内源性EGFR水平较低的细胞系和组织,可能需要优化Western blot条件。 -
经过测试的应用程序 -
物种反应性 与以下物质反应: 老鼠、老鼠、人 -
免疫原 合成肽。 此信息为Abcam和/或其供应商专有。 -
阳性对照 WB:A431、A549和HeLa细胞裂解物。 ICC/IF:A431电池。 流式细胞仪(内部):A431细胞。 IHC-P:FFPE小鼠皮肤正常。 IP:A431细胞裂解物
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一般注意事项
属性
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表格 液体 -
储存说明 在4°C下装运。 短期储存在+4°C下(1-2周)。 交付时,等分。 储存于-20°C。 避免冷冻/解冻循环。 -
存储缓冲区 pH值:7.20 防腐剂:0.01%叠氮化钠 成分:49%PBS、50%甘油(甘油、甘油)、0.05%BSA -
正在加载浓度信息。。。 -
纯度 蛋白质A纯化 -
克隆性 单克隆 -
克隆编号 E235型 -
同位素 免疫球蛋白G -
研究领域
相关产品
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替代版本 -
兼容的辅助设备 -
同位素控制 -
KO细胞系 -
KO细胞裂解物 -
阳性对照 -
重组蛋白 -
相关产品
应用
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目标
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功能 受体酪氨酸激酶结合EGF家族配体并激活几个信号级联,将细胞外信号转换为适当的细胞反应。 已知配体包括EGF、TGFA/TGF-alpha、双调节蛋白、表观蛋白/EPGN、BTC/β细胞壁蛋白、表调节蛋白/EREG和HBEGF/肝素结合EGF。 配体结合触发关键细胞质残基上的受体同源和/或异源二聚和自磷酸化。 磷酸化受体招募GRB2等适配蛋白,后者反过来激活复杂的下游信号级联。 激活至少4个主要下游信号级联,包括RAS-RAF-MEK-ERK、PI3激酶-AKT、PLCgamma-PKC和STATs模块。 也可能激活NF-kappa-B信号级联。 还直接磷酸化其他蛋白质,如RGS16,激活其GTPase活性,并可能将EGF受体信号与G蛋白偶联受体信号耦合。 还磷酸化MUC1并增加其与SRC和CTNNB1/β-catenin的相互作用。 异构体2可能是EGF作用的拮抗剂。 -
组织特异性 普遍表达。 异构体2也在卵巢癌中表达。 -
参与疾病 肺癌 炎症性皮肤和肠道疾病,新生儿,2 -
序列相似性 属于蛋白激酶超家族。 酪氨酸蛋白激酶家族。 EGF受体亚家族。 包含1个蛋白激酶结构域。 -
翻译后 修改 Ser-695处的磷酸化是部分的,只有当Thr-693被磷酸化时才会发生。 PRKD1在Thr-678和Thr-693处的磷酸化抑制EGF诱导的MAPK8/JNK1活化。 PTPRJ的去磷酸化可防止内吞并稳定质膜上的受体。 Tyr-1197的自磷酸化由Arg-1199的甲基化刺激,并增强与PTPN6的相互作用。 Tyr-1092和/或Tyr-1110的自磷酸化招募STAT3。 通过PTPN1和PTPN2脱磷。 EGF刺激下的单泛素化和多泛素化; 它不影响酪氨酸激酶活性或信号传导能力,但可能在溶酶体靶向中发挥作用。 多泛素连接主要通过“Lys-63”进行,但也通过“Lys-48”、“Lys-11”和“Lys-29”进行连接。 OTUD7B的去泛素作用可防止降解。 RNF115和RNF126泛素化。 甲基化。 PRMT5在Arg-1199的甲基化刺激Tyr-1197的磷酸化。 -
手机定位 分泌膜和细胞膜。 内质网膜。 高尔基体膜。 细胞核膜。 内体。 内体膜。 核心。 作为对EGF的反应,通过高尔基体和内质网从细胞膜转运到细胞核。经配体激活后内吞。 在雌激素激动剂诱导的癌相关成纤维细胞(CAF)的细胞核中用GPER1染色。 -
UniProt提供的信息 -
数据库链接 Entrez基因: 1956 人类 Entrez基因: 13649 鼠标 Entrez基因: 24329 老鼠 Omim公司: 131550 人类 瑞士保护: P00533 人类 瑞士保护: 企01279 鼠标 尤尼金: 488293 人类 尤尼金: 605083 人类
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替代名称 禽红细胞白血病病毒癌基因同源抗体 细胞生长抑制蛋白40抗体 细胞增殖诱导蛋白61抗体
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图像
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所有车道: 稀释1/1000的抗-EGFR抗体[E235](ab32077) 车道1: 野生型A549细胞裂解物 车道2: EGFR敲除A549细胞裂解物 3号车道: 野生型HeLa细胞裂解物 车道4: EGFR敲除HeLa细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 134千帕 观察到的频带大小: 160千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? Western blot:抗-EGFR抗体[E235](ab32077)在1/1000稀释度下染色,以绿色显示; 小鼠抗α-管蛋白[DM1A]( 约7291 )以1/20000稀释度进行负荷对照染色,以红色显示。在Western blot中,ab32077显示与EGFR特异结合。 在野生型细胞裂解液中观察到160kDa的条带,在EGFR敲除细胞系中未观察到这种大小的信号。 要生成此图像,请使用野生型和EGFR剔除A549( 约286394 )和赫拉( ab255385号 )对细胞裂解物进行了分析。 首先,样品在SDS-PAGE凝胶上运行,然后转移到硝化纤维素膜上。 在4°C下与一级抗体孵育过夜之前,在TBS-0.1%吐温®20(TBS-T)中的3%牛奶中封闭膜。 在TBS-T中清洗四次斑点,在室温下与二级抗体孵育1小时,再次清洗四次,然后成像。 二级抗体为羊抗兔IgG H&L 800CW和羊抗鼠IgG H&L 680RD,稀释度为1/20000。 -
所有车道: 稀释1/1000的抗-EGFR抗体[E235](ab32077) 车道1: 野生型HCT 116细胞裂解物 车道2: EGFR敲除HCT 116细胞裂解物 3号车道: HeLa细胞裂解物 车道4: Caco-2细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 使用ECL技术开发。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 134千帕 观察到的频带大小: 180千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? Western blot假彩色图像:抗-EGFR抗体[E235]在1/1000稀释度下染色,以绿色显示; 小鼠抗α-管蛋白[DM1A]( 约7291 )以1/20000稀释度进行负荷对照染色,以红色显示。在Western blot中,ab32077显示与EGFR特异结合。 在野生型HCT 116细胞裂解液中在180 kDa处观察到一条带,在Egfr敲除细胞系中未观察到该大小的信号 约281597 (敲除细胞裂解物 约282949 ). 为了生成此图像,分析了野生型和Egfr敲除HCT 116细胞裂解物。 首先,样品在SDS-PAGE凝胶上运行,然后转移到硝化纤维素膜上。 在4°C下与一级抗体孵育过夜之前,在荧光蛋白印迹(基于TBS)封闭溶液中封闭膜。 在TBS-T中清洗四次斑点,在室温下与二级抗体孵育1小时,再次清洗四次,然后成像。 使用的二级抗体是山羊抗兔IgG H&L(IRDye®800CW)预吸收抗体( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye®680RD)预吸收床( 约216776 )稀释1/20000。 -
使用标准方案B在Leica Bond™系统上对福尔马林固定、石蜡包埋的小鼠正常皮肤组织切片进行EGFR染色的IHC图像。该切片使用柠檬酸钠缓冲液(pH6,表位检索溶液1)进行热介导抗原检索预处理20分钟。 然后在室温下用ab32077在1/200稀释度下培养15分钟。 用山羊抗兔生物素化二级抗体检测初级抗体,并用HRP偶联ABC系统进行可视化。 DAB被用作显色剂。 然后用苏木精对切片进行复染,并用DPX固定。 对于其他IHC染色系统(自动化和非自动化),客户应优化可变参数,如抗原回收条件、初级抗体浓度和抗体孵育时间。 -
所有车道: 稀释1/1000的抗-EGFR抗体[E235](ab32077) 车道1: Caco-2细胞裂解物 车道2: A431细胞裂解物 3号车道: 小鼠皮肤细胞裂解物 车道4: 大鼠皮肤细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 134千帕 该印迹是在MOPS缓冲系统下使用4-12%双三凝胶生成的。 凝胶在200V下运行50分钟,然后在30V下转移到硝化纤维膜上70分钟。 然后将膜封闭一小时,然后在4°C温度下与ab32077孵育过夜,并进行负载控制 约18058 (小鼠单克隆[SPM227]与文丘林按1:10000稀释)。 在成像前,使用IR标记的山羊抗兔抗体在室温下以1:10000稀释1小时检测抗体结合。 该产品使用A431(人类鳞癌)裂解液在western blot中产生强烈信号,该裂解液自然过度表达EGFR蛋白。 对于内源性EGFR水平较低的细胞系和组织,可能需要优化Western blot条件。 -
A431细胞的免疫细胞化学/免疫荧光分析,在1/500处用ab32077标记EGFR。 细胞用100%甲醇固定。 约150077 ,一种Alexa Fluor ® 用488-结合羊抗兔IgG(1/1000)作为二级抗体。 控制:仅PBS。 核反染:DAPI。 -
重叠直方图显示A431细胞被ab32077染色(红线)。 用80%甲醇固定细胞(5分钟),然后用0.1%PBS-Tween渗透20分钟。然后在1x PBS/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸中孵育细胞,以阻断非特异性蛋白-蛋白质相互作用,然后在22°C下用抗体(ab32077,1/1000稀释)孵育30分钟。 使用的二级抗体是DyLight ® 488山羊抗兔IgG(H+L)( 约96899 )在22°C下以1/500稀释30分钟。 同型对照抗体(黑线)为兔IgG(单克隆)(0.1µg/1x10 6 电池)在相同条件下使用。 未标记样本(蓝线)也用作对照。 使用20mW氩离子激光器(488nm)和525/30带通滤波器采集了超过5000个事件。
协议
数据表和文件
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SDS下载 -
数据表下载
工具书类 (28)
李斯(Li S) 等。 较高的胸腺细胞选择相关的高迁移率族盒(TOX)表达预示卵巢癌患者预后不良。 BMC癌症 22:1216 (2022). 公共医学:36434543 张建华 等。 颗粒细胞表达EGFR在多囊卵巢综合征发病机制中的作用。 前内分泌(洛桑) 13:971564 (2022). 公共医学:36440230 李H 等。 单细胞RNA测序揭示的人胎盘内皮细胞和滋养层细胞的异质性和分化。 单元格 12:不适用(2022年)。 公共医学:36611882 摩根EL 等。 E6介导的JNK激活驱动EGFR信号传导,以促进宫颈癌中的增殖和病毒癌蛋白表达。 细胞死亡差异 28:1669-1687 (2021). 公共医学:33303976 蒂西亚尼E 等。 人胎盘细胞滋养层细胞中双酚S和表皮生长因子受体的信号传导。 环境卫生展望 129:27005 (2021). 公共医学:33605785