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找出时间分辨荧光的价值,并使用铕共轭工具进行下一次荧光实验。
荧光检测通常依赖于抗体用荧光标记的。一旦抗体与目标结合,就用光源激发荧光团,荧光团在返回基态时产生瞬态发光。光的发射波长高于用于激发的波长,并由专门的读卡器检测。荧光检测是许多应用的核心,包括流式细胞术,酶联免疫吸附试验,西方印迹法,免疫组织化学(IHC)、和免疫细胞化学它的受欢迎程度可归因于它提供的高灵敏度,此外,它是定量的,并且具有广泛的荧光团,为多路传输.
什么是时间分辨荧光?
时间分辨荧光(TRF)与标准荧光检测非常相似。两次测量之间的主要差异是激发/发射过程的时间。在标准荧光检测期间,激发和发射同时进行;当激发发生时,测量样品发出的光。与此相反,TRF依赖于使用非常特殊的荧光分子,称为镧系螯合物标记,允许在激发发生后检测发射的光。最常用的镧系螯合物标签是铕离子(Eu3+).
虽然传统荧光灯非常流行,但它们有几个局限性。首先,同步激发/发射过程会产生高背景信号。其次,许多商用荧光团的斯托克斯位移(最大吸收波长和发射波长之间的差异)相对较小,这意味着这些试剂可能由于吸收光谱和发射光谱之间的重叠而遭受自猝灭。第三,生物基质,如血清或组织样品通常含有自体荧光物质;在同质分析中,这些成分尤其是背景信号的来源,在测量之前这些成分不会被冲走。最后,在高通量筛选由于某些化学类测试化合物的荧光性质,可能会出现假阳性。
镧系元素具有以下几个关键优势:
图1。铕的吸收光谱和发射光谱。铕具有较大的斯托克斯位移、较宽的激发光谱和较窄的发射光谱,这是镧系螯合物的典型特征。
Abcam的铕结合试剂盒
我们的铕结合试剂盒允许抗体、蛋白质、肽或任何其他生物分子与伯胺基团快速简便地结合到经过特殊处理的200nm铕螯合物微球上。这种独特的产品可用于基于微孔板的分析或免疫色谱分析,与其他基于颗粒的分析相比具有更高的灵敏度。
图2。铕结合试剂盒标记过程。铕颗粒是冷冻干燥的。结合反应是通过用抗体重组冻干混合物而开始的,然后抗体(通过赖氨酸残基)与铕颗粒的专有表面共价结合。
除了提高灵敏度外,我们的铕颗粒还具有其他几个优点。抗体和颗粒表面之间形成的键是共价键,形成高度稳定的共轭物。颗粒也能抵抗聚集,不需要苛刻的再悬浮方法。此外,共轭过程从开始到结束只需35分钟,与被动的颗粒共轭方法不同,它不涉及在不同pH值下的广泛优化。
图3。用于评估抗体-尿嘧啶颗粒结合物的微孔板分析。示意图代表了测定形式:用抗CRP抗体涂覆微孔板的孔,然后加入含有已知浓度CRP的溶液并孵育。为了进行检测,使用了使用Abcam的铕结合试剂盒制备的抗-CRP抗体结合物。使用带有TRF设置的微孔板阅读器读取平板。数据显示高灵敏度(~10pg/ml)和低背景。
除了我们的铕结合试剂盒,我们还提供铕-链霉亲和素结合物这是通过将链霉亲和素共价连接到我们经过特殊处理的200nm铕粒子上而制成的,非常适合用于利用链霉亲和物-生物素相互作用的TRF应用。
图4。用于评估铕-链霉亲和素结合物的微孔板分析。用生物素化卵清蛋白涂覆微孔板孔,然后添加不同稀释度的Abcam的Europium-streptavidin结合物并培养。使用带有TRF设置的微孔板阅读器读取平板。