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微管相关蛋白1A/1B-轻链3(MAP1LC3)是一种分子量约为17kDa的可溶性蛋白,通常简称为LC3。LC3分布于哺乳动物组织和培养细胞中1 和是真核细胞自噬循环系统的关键组成部分。在自噬体生物发生过程中,它被并入自噬体内外膜2因此,LC3是自噬的特异性标记,特别是自噬体形成的特异性标记三.
自噬体标志物LC3的加工过程已经被彻底研究过,它从细胞溶质(LC3-I)逐步转化为膜结合的脂质(LC3-II)形式被用于自噬的实验测量4在western blotting中,这种脂质化事件使LC3-II带迁移更快,从而能够区分膜和非膜结合形式5.
我们的LC3抗体、试剂盒和蛋白质经验证可用于多种关键应用,包括西方印迹,免疫细胞化学,免疫沉淀、和免疫组织化学.
ab192890染色HeLa细胞中的LC3B+/-氯喹(50μM,24小时)。用100%甲醇固定细胞(5分钟),用0.1%Triton X-100渗透5分钟,然后用1%BSA/10%正常山羊血清/0.3 M甘氨酸在0.1%PBS-Tween中封闭1小时。然后用ab192890在1μg/ml和ab195889在+4°C下孵育细胞过夜,在1/250稀释度下(以伪红色显示),然后在室温下用2μg/ml(以绿色显示)的山羊兔IgG二级抗体(Alexa Fluor®488)(ab150081)进一步孵育1小时。用DAPI标记细胞核DNA(以蓝色显示)。
使用共焦显微镜(Leica-Microsystems,TCS SP8)拍摄图像。
免疫细胞化学/免疫荧光-抗LC3B抗体[EPR18709]-自噬体标记(约192890年)
ab225383染色野生型HAP1细胞和敲除细胞中的LC3B,未经处理和氯喹处理(50μM,24小时)。用100%甲醇固定细胞(5分钟),用0.1%Triton X-100渗透5分钟,然后用1%BSA/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸在0.1%PBS-Tween中封闭1小时。然后用0.5μg/ml的ab225383(以红色显示)和ab195887(小鼠单克隆α-管蛋白(Alexa Fluor®488))在+250稀释度(以绿色显示)下在+4°C下培养细胞过夜。核DNA用DAPI标记为蓝色。
免疫细胞化学/免疫荧光-抗-LC3B抗体[EPR18709]-自噬体标记(Alexa Fluor®647)(约225383)
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