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His标签,或多组氨酸标签,包括一系列连续的六到十个组氨酸残基。最常见的his-tag是6xHis标签,有一个分子量0.8kDa1他的标签用于许多重组蛋白以促进纯化,使研究人员能够从细胞或细胞裂解液中发现的数千种其他蛋白质中提取出感兴趣的蛋白质。 6x-His标签的较小尺寸意味着标签影响融合蛋白功能的可能性较低,而较大的标签可能会影响融合蛋白的功能。
组氨酸与固定化的过渡金属离子形成配位键,这种性质可用于蛋白质纯化。His-tag蛋白的纯化是通过一种特殊形式的亲和层析,称为固定化金属亲和层析(IMAC),在这种层析中,蛋白质或肽根据其与固定在固体螯合树脂上的金属离子的亲和力进行分离。在这个过程中,一个小的His标签被融合到靶蛋白的N或C末端,从而能够被配位在各种树脂上的镍或钴离子捕获。小尺寸、低成本和易用性使His-tag成为最流行的亲合力标签2然而,由于His残基存在于哺乳动物和昆虫系统中,因此可能存在背景结合。这可以通过在5-10 mM咪唑中洗涤来避免,但此洗涤步骤可能会过早洗脱感兴趣的蛋白质。
有关关联标记(包括His-tag)的更多信息,请参阅我们的融合标签指南.
我们的一系列抗体、蛋白质和化验试剂盒经验证可用于各种应用,包括酶联免疫吸附试验,西方印迹,免疫组织化学,免疫沉淀,免疫细胞化学,染色质免疫沉淀、和流式细胞术.
使用ab18184在1/100稀释度下对His/FLAG标记的PDCD5进行免疫沉淀。
车道1:MW梯形图(顶部120、85、50、34、25、19 kDa)
2-5车道:使用ab18184从约50 ng纯化的His/FLAG标记PDCD5和15µL RRL的混合物中免疫沉淀标记的PDCD5。
6-7车道:从大肠杆菌中纯化PDCD5,含~60-70 ng蛋白质。
每条车道的最低频带为~20 kDa,为PDCD5。2-5车道上的上层带为重链(~50kDa,以双链形式运行)和轻链(~25kDa或26kDa)。
免疫沉淀-Anti-6X His标签®抗体[HIS.H8](约18184年)
这张图片是由Chris Tracy先生提交的Abreview提供的
用标记6X-His标签的GFP-Myc-His载体表达构建体转染的4%多聚甲醛固定的0.1%Triton X-100透化HEK-293T(来自用大T抗原转化的胚胎肾的人上皮细胞系)细胞的免疫荧光分析®用ab213204以1/100稀释,然后用山羊抗狂犬病IgG H&L(Alexa Fluor®488)(ab150077)二级抗体,稀释度为1/1000(白色)。共焦图像显示转染GFP-Myc-His表达载体的HEK-293T细胞呈阳性染色。核反染为DAPI(蓝色)。用抗α-管蛋白抗体[DM1A]-微管标记物(Alexa Fluor)检测管蛋白®594)(ab195889)(红色),稀释度为1/200。
仅二级抗体对照:使用PBS代替一级抗体,二级抗体为山羊抗狂犬病IgG H&L(Alexa Fluor®488)(ab150077)二级抗体,稀释度为1/1000。
His-Tag蛋白纯化柱(预包装,5 x 1ml)-AminTrap(ab270528)
His-Tag蛋白纯化柱(预包装,5 x 5ml)-AminTrap(ab270529)
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