简介

  • 产品名称

    抗BNIP3抗体[ANA40]
    见BNIP3一级抗体
  • 描述

    小鼠单克隆抗体[ANA40]到BNIP3
  • 寄主种

    鼠标
  • 特异性

    该抗体最初在转染BNIP3的29 3T细胞的全细胞裂解物上进行测试。组成型表达的BNIP3水平是非常可变的,强烈推荐良好的阳性对照。张等。(2008)在20% O2培养的WT MEFs中,用免疫印迹法检测BNIP3蛋白的极低水平,而低氧强烈诱导BNIP3蛋白表达,其迁移率为30 kDa单体和60 kDa二聚体。BIPN3表达受HIF-1在生理条件下的调节。
  • 测试应用

    适用于:国际商会ELISA知识产权世界银行IHC-P流式细胞术ICC/IF更多细节
  • 物种反应性

    与之反应:小鼠,大鼠,人
  • 免疫原

    与人BNIP3相对应的重组片段。

  • 抗原表位

    由抗体识别的表位驻留在人BNIP3分子的氨基酸112~124内。
  • 阳性对照

    • 该抗体在人Western blot中的骨骼肌组织裂解物和人肾福尔马林固定的石蜡包埋组织切片中呈阳性信号。
  • 一般注释

    Western印迹协议建议
    我们建议使用3%牛奶作为阻断剂用于Western印迹。

    该抗体克隆是由ABCAM制造的。

    如果你需要这种抗体在特定的缓冲配方或实验中的特定结合物,请联系Orths@ abcAM.com或者你可以找到更多的信息在这里.

性能

应用

我们的保证担保覆盖使用AB10433在以下测试应用中。

应用注意事项包括推荐的起始稀释液;最佳稀释/浓度应由最终用户确定。

应用 退让 笔记
国际商会 使用依赖于测定的浓度。
ELISA 使用依赖于测定的浓度。
知识产权 使用依赖于测定的浓度。
世界银行 使用浓度为1~5μg/ml的检测约30 kDa的带(预测分子量:30 kDa)。

我们建议使用3%牛奶作为阻断剂用于Western印迹。

IHC-P 使用5μg/ml的浓度,用柠檬酸盐缓冲液pH 6进行热介导的抗原检索,然后用IHC染色方案开始。
流式细胞术 使用0.1-1μg为10细胞。

AB170192小鼠单克隆IgG2b适合用作该抗体的同种型对照。

ICC/IF 使用依赖于测定的浓度。

目标

图像

  • 第1巷:野生型HAP1全细胞裂解液(40μg)
    第2巷:BNIP3敲除HAP1全细胞裂解液(40μg)
    第3巷:SHSY5Y全细胞裂解液(40μg)

    1 - 3车道:合并信号(红色和绿色)。绿色-AB10433在30 kDa处观察到。红色负载控制,AB181602,观察到37 kDa。

    AB10433在野生型HAP1细胞中被识别为BNIP3,因为在BNIP3敲除细胞中预期的MW丢失了信号。在野生型和敲除细胞中观察到额外的交叉反应带。野生型和BNIP3敲除样品进行SDS-PAGE。AB10433和AB181602(兔抗GAPDH负荷对照)分别于5℃/ml和1/20000℃下分别在4℃下孵育。山羊抗小鼠IgG H&L印迹(Ir染料)®800厘米)预吸收AB21677山羊抗兔IgG H&L(Ir染病)®第六百八十)预吸收AB21677二次抗体在室温下稀释1/20000小时,成像前1小时。

  • 用AB10433对人喉鳞状细胞癌组织进行免疫组化染色。

    在柠檬酸盐缓冲液中通过热处理进行抗原修复。切片在4℃下在加湿室中与原抗体(1/100)隔夜孵育,用DAB染色,苏木精核染色。
  • 抗BNIP3抗体[ANA40](AB10433),在1μg/mL+人骨骼肌组织裂解物-总蛋白(AB29 330)20克

    次要的
    山羊IgG -H和L预吸附(HRP)多克隆AB685(1/5000稀释)

    在还原条件下进行。

    预测波段大小:30 kDa


    曝光时间:5秒


    使用4-12%双TIS凝胶在MOPS缓冲系统下产生该印迹。凝胶在200 V下运行50分钟,然后在30V转移到硝酸纤维素膜上70分钟。然后在4℃下用AB10433孵育3%小时,然后用HRP结合的抗鼠抗体检测抗体结合,并用ECL显影液进行可视化。AB133406.

  • 正常人肾福尔马林固定石蜡包埋组织切片中AB10433染色的徕卡键TM系统使用标准协议F。使用热介导的抗原检索,用柠檬酸钠缓冲液(PH6,表位检索溶液1)预处理20分钟。然后将切片与AB10433,5μg/ml孵育,在室温下15分钟,并用HRP偶联的紧凑聚合物体系检测。使用DAB作为显色剂。然后切片用苏木精复染,并安装DPX。

    对于其他IHC染色系统(自动化和非自动化),客户应优化可变参数,如抗原检索条件,一级抗体浓度和抗体孵育时间。

  • AB10433通过免疫细胞化学/免疫荧光法检测BNIP3在人成纤维细胞中的染色。在室温下将细胞固定在2%的多聚甲醛中30分钟,然后用50毫米NH4Cl在PBS中处理10分钟,使渗透后的无醛醛基被处理。然后将细胞在0.1% Triton X-100中渗透,然后在1% BSA中在室温下阻断1小时。将原代抗体稀释1/400,在室温下与样品一起孵育1小时。第二抗体为Alexa For。®555共轭山羊抗小鼠多克隆,稀释1/1000。

    见复审

  • 叠加直方图显示HepG2细胞用AB10433(红线)染色。用4%多聚甲醛(10分钟)固定细胞,然后用0.1%个PBS TWEN通透20分钟,然后将细胞在1X PBS/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸中孵育,以阻断非特异性蛋白-蛋白相互作用,随后是抗体(AB10433,1μg/1x10)。细胞)在22℃下30分钟,使用的第二抗体是DyLoT。®488山羊抗小鼠IgG(H+L)AB968 79在1/500℃稀释22 min,30分钟,同种型对照抗体(黑线)为小鼠IgG2B[PLPV219]。AB91366,2μg/1x10细胞)在相同条件下使用。术后随访5000例。该抗体在80%甲醇(5分钟)固定的HepG2细胞中得到阳性信号,在相同条件下用0.1% pB-TWEN渗透20分钟。

推荐信

该产品已被引用:

  • 弗罗斯特J等。 PHD和VHL抑制剂的RNA SEQ分析揭示了与低氧反应的差异和相似性。 威尔士公开赛 :17(2019)。阅读更多(PubMed:30801039)
  • 张杰等。 自噬在低氧BNIP3信号转导中的作用,促进表皮角质形成细胞的迁移。 细胞死亡 :234(2019)。阅读更多(PubMed:30850584)
参见本产品的所有75个出版物

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-属于6评论

应用
蛋白质印迹法
样品
人细胞裂解液-全细胞(MCF-7)
凝胶运行条件
变性变性(10)
装载量
35μg
治疗
20nm的SiNeG或SiBNIP3为48和72h
规格
MCF-7
阻塞步骤
BSA作为1小时(S)和0分钟(S)·浓度的阻滞剂:5%℃:温度20℃

用户社区

核实客户

2019 1月14日提交

应用
免疫细胞化学/免疫荧光
样品
猴细胞(肾)
透化作用
是- 0.1% Triton X-100
规格
阻塞步骤
血清阻断剂为1小时(s)和0分钟(s)·浓度:5%℃:温度37℃
固定剂
多聚甲醛

用户社区

核实客户

提交08军2016

应用
免疫组化(冰冻切片)
样品
小鼠组织切片(脑)
透化作用
规格
阻塞步骤
血清阻断剂为1小时(s)和0分钟(s)·浓度:5%℃:温度37℃
固定剂
多聚甲醛

用户社区

核实客户

三月04日提交2016

应用
蛋白质印迹法
样品
中国仓鼠细胞裂解液-全细胞(CHO细胞)
凝胶运行条件
变性变性
装载量
30μg
规格
CHO细胞
阻塞步骤
牛奶为1小时(S)和0分钟(S)·浓度的封闭剂:5%℃:RT°C

用户社区

核实客户

2015 6月26日提交

应用
免疫细胞化学/免疫荧光
样品
人细胞(成纤维细胞)
规格
成纤维细胞
固定剂
多聚甲醛
透化作用
是- 0.1% Triton X-100
阻塞步骤
BSA作为1小时(S)和0分钟(S)·浓度的阻滞剂:1%℃:RT°C

Sharon Sneddon博士

核实客户

2011 11月30日提交

应用
蛋白质印迹法
样品
人细胞裂解液-全细胞(PC3细胞(前列腺癌细胞系))
装载量
25μg
规格
PC3细胞(前列腺癌细胞系)
治疗
巷2用足叶乙甙治疗18小时
凝胶运行条件
变性变性
阻塞步骤
牛奶为1小时(S)和0分钟(S)·浓度的封闭剂:5%℃:RT°C

用户社区

核实客户

提交NOV 07 2007

请注意:所有产品仅用于研究用途。不用于诊断程序
有关许可证查询,请联系PosisSts@ ABCAMC.

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